Untersuchungen zur Polymerisation des Aktins aus dem Komplex mit b-Thymosinen und zur Interaktion des Aktin-Thymosin b4-Komplexes mit Aktin bindenden Proteinen:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1995
|
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| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Bochum, Univ., Diss., 1995 |
| Beschreibung: | 156 S. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
1.1.
AKTIN
1
1.2.
AKTIN
BINDENDE
PROTEINE
7
1.2.1.
SS-THYMOSINE
15
13.
ZIELSETZUNG
UND
GLIEDERUNG
DES
ERGEBNISTEILES
19
2.
MATERIALIEN
UND
METHODEN
21
2.1.
CHEMIKALIEN
UND
LABORGERAETE
21
2.2.
PROTEINPRAEPARATIONEN
21
2.2.1.
PRAEPARATION
DER
A-AKTIN-ISOFORM
AUS
DER
SKELETTMUSKULATUR
VON
KANINCHEN
22
2.2.I.I.
MARKIERUNG
DES
SKELETTMUSKEL-AKTINS
MIT
PYRENYLIODOACETAMID
23
2.2.2.
PRAEPARATION
DER
SS-AKTIN-ISOFORM
AUS
SCHWEINEHIM
24
2.2.3.
MYOSIN
I-PRAEPARATION
AUS
DEM
DUENNDARM
VON
HUEHNERN
25
2.2.4.
DNASE
I-AUFREINIGUNG
UEBER
HYDROXYLAPATIT-IONENAUSTAUSCHER
CHROMATOGRAPHIE
28
23.
GRUNDLEGENDE
PROTEINANALYTISCHE
METHODEN
29
2.3.1.
QUANTITATIVE
PROTEINBESTIMMUNGSVERFAHREN
2.3.1.1.
PROTEINBESTIMMUNG
NACH
BRADFORD
29
2.3.1.2.
PROTEINBESTIMMUNG
DURCH
UV-EXTINKTIONSMESSUNG
29
2.3.2.
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
30
2.3.3.
NATIVE
POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
32
2.3.4.
FAERBUNG
VON
PROTEINGELEN
33
2.3.4.I.
COOMASSIEFARBUNG
33
23.4.2.
SILBERFARBUNG
33
2.4.
IMMUNOLOGISCHE
METHODEN
34
2.4.1.
ERZEUGUNG
EINES
POLYKLONALEN
ANTIKOERPERS
GEGEN
MYOSIN
I
34
2.4.2.
REINIGUNG
DES
MYOSIN
I-ANTIKOERPERS
35
2.4.3.
WESTEMBLOT-TRANSFER
VON
PROTEINEN
AUF
NITROCELLULOSE
36
2.4.4.
IMMUNCHEMISCHER
NACHWEIS
TRANSFERIERTER
PROTEINE
37
24K
SPEZIELLE
PROTEINCHEMISCHE
UNTERSUCHUNGSMETHODEN
37
2.5.1,
FLUORESZENZMESSUNGEN
37
2.5.2.
SEDIMENTATIONSEXPERIMENTE
40
2.5.3.
DNASE
I-INHIBITIONSTEST
41
2.5.4.
ATPASE-AKTIVITAETSMESSUNGEN
42
2.5.5.
FFD-QUERVEMETZUNGEN
VON
AKTIN
MIT
AKTIN
BINDENDEN
PROTEINEN
43
3.
ERGEBNISSE
45
3.A.
PROTEINAUFREINIGANGEN
45
3.
A.
1.
PRAEPARATION
DER
A-AKTIN-ISOFORM
AUS
DER
SKELETTMUSKULATUR
VON
KANINCHEN
45
3.
A.
1.1.
MARKIERUNG
DES
SKELETTMUSKEL-AKTINS
MIT
PYRENYLIODOACETAMID
45
3.A.2.
PRAEPARATION
DER
SS-AKTIN-ISOFORM
AUS
SCHWEINEHIM
46
3.A2.1.
DEAE-52-ANIONENAUSTAUSCHERCHROMATOGRAPHIE
46
3.
A.2.2.
ACA-44-MOLEKULARSIEBCHROMATOGRAPHIE
47
3.A2.3.
REINIGUNGSTABELLE
49
3.
A.3.
MYOSIN
I-PRAEPARATION
AUS
DEM
DUENNDARM
VON
HUEHNERN
49
3.A.3.I.
SEPHAROSE
CL-4B-MOLEKULARSIEBCHROMATOGRAPHIE
50
3.A.3.2.
S-SEPHAROSE-KATIONENAUSTAUSCHERCHROMATOGRAPHIE
52
3.
A.3.3.
FPLC-MONOQ-ANIONENAUSTAUSCHERCHROMATOGRAPHIE
54
3.A.3.4.
REINIGUNGSTABELLE
55
3.A3.5.
MESSUNGEN
DER
ATPASE
AKTIVITAET
DES
MYOSIN
I
55
3.
A.3.5.
1.
STIMULATION
DER
MG
2+
-ATPASE-AKTIVITAET
IN
ANWESENHEIT
VON
FILAMENTAEREM
AKTIN
UND
CALCIUMCHLORID
56
3.
A.3.5.2.
NACHWEIS
DER
K
+
,
EDTA
UND
DER
CA
2
*-ATPASE-AKTIVITAET
DES
MYOSIN
I
59
3.
A.4.
DNASE
I-AUFREINIGUNG
UEBER
HYDROXYLAPATIT
LONENAUSTAUSCHERCHROMATOGRAPHIE
61
3.B.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
INDUKTION
DER
POLYMERISATION
DES
AKTINS
AUS
DEM
KOMPLEX
MIT
SS-THYMOSINEN
63
3.B.
1.
POLYMERISATION
VON
AKTIN
AUS
DEM
KOMPLEX
MIT
SS-THYMOSINEN
UNTER
VERSCHIEDENEN
LONENBEDINGUNGEN
63
3.B.
1.1.
BESTIMMUNG
DER
GLEICHGEWICHTSDISSOZIATIONSKONSTANTEN
DES
AKTIN-THYMOSIN
SS4-KOMPLEXES
UND
DES
AKTIN-THYMOSIN
SS9
KOMPLEXES
UNTER
VERSCHIEDENEN
LONENBEDINGUNGEN
64
3.B.I.2.
FLUORESZENZSPEKTRALPHOTOMETRISCHE
MESSUNG
DER
AKTIN
POLYMERISATION
AUS
DEM
KOMPLEX
MIT
THYMOSIN
SS4
66
3.B.
1.2.1.
VERGLEICHENDE
DARSTELLUNG
DER
POLYMERISATIONSKINETIK
VON
FREIEM
UND
KOMPLEXIERTEM
AKTIN
IN
ANWESENHEIT
VON
MAGNESIUM
ODER
CALCIUM-IONEN
66
3.B.
1.2.2.
EINFLUSS
VON
CALCIUM-IONEN
AUF
DIE
POLYMERISATION
VON
CYTOPLASMATISCHEM
HIRN-AKTIN
AUS
DEM
AKTIN-THYMOSIN
SS4-KOMPLEX
70
3.B.
1.2.3.
EINFLUSS
VON
100
MM
KCL
AUF
DIE
STABILITAET
DES
AKTIN
THYMOSIN
SS4-KOMPLEXES
71
3.B.2.
INDUKTION
DER
POLYMERISATION
VON
AKTIN
AUS
DEM
KOMPLEX
MIT
THYMOSIN
SS4
DURCH
PHALLOIDIN
72
3.B.3.
POLYMERISIERENDE
WIRKUNG
VON
MYOSINEN
IN
GEGENWART
DES
AKTIN
THYMOSIN
SS4-KOMPLEXES
73
3.B.3
1.
POLYMERISATION
VON
SKELETTMUSKEL-AKTIN
AUS
DEM
KOMPLEX
MIT
THYMOSIN
SS4
UNTER
EINWIRKUNG
VON
MYOSIN
I
73
3.B.3.2.
POLYMERISATION
VON
HIRN-AKTIN
AUS
DEM
KOMPLEX
MIT
THYMOSIN
SS4
IN
ANWESENHEIT
DES
MYOSIN
II-KOEPFCHENS
(S
1
AL)
75
3.B.4.
POLYMERISIERENDER
EINFLUSS
DES
GELSOLINS
BZW.
DES
GELSOLIN:2
AKTIN
KOMPLEXES
AUF
DAS
AKTIN-THYMOSIN
SS4-GLEICHGEWICHT
76
3.B.4.I.
EINFLUSS
UNTERSCHIEDLICHER
KONZENTRATIONEN
DES
GELSOLIN:2
AKTIN-KOMPLEXES
AUF
DAS
AKTIN-THYMOSIN
SS4-GLEICHGEWICHT
76
3.B.4.2.
VERGLEICHENDE
KINETIK
DER
ENTSTEHUNG
VON
FILAMENTAEREM
AKTIN
AUS
DEM
AKTIN-THYMOSIN
SS4-KOMPLEX
ZWEIER
AKTIN-ISOFORMEN
IN
GEGENWART
DES
GELSOLINS
78
3.B.4.3.
WECHSELSEITIGER
EINFLUSS
VON
GELSOLIN
UND
CALCIUM-IONEN
AUF
DIE
STABILITAET
DES
AKTIN-THYMOSIN
SS4-KOMPLEXES
79
3.B.5.
EINFLUSS
FREIER
PLUS
UND
MINUS-ENDEN
VON
AKTINFILAMENTEN
AUF
DIE
POLYMERISATION
DES
AKTINS
AUS
DEM
AKTIN-THYMOSIN
SS4-KOMPLEX
81
3.B.5.I.
KINETISCHE
VERFOLGUNG
DER
AUSBILDUNG
VON
FILAMENTAEREM
AKTIN
AUS
DEM
AKTIN-THYMOSIN
SS4-KOMPLEX
IN
ANWESENHEIT
UNTERSCHIEDLICHER
KONZENTRATIONEN
FREIER
AKTINFILAMENT-ENDEN
81
3.B.5.2.
VERGLEICHENDE
DARSTELLUNG
DER
POLYMERISIERENDEN
WIRKUNG
FREIER
PLUS
UND
MINUS-ENDEN
VON
AKTINFILAMENTEN
AUF
DEN
AKTIN
THYMOSIN
SS4-KOMPLEX
83
3.B.6.
POLYMERISIERENDE
WIRKUNG
DES
BIRKEN-PROFILINS
IN
ANWESENHEIT
VON
SS-THYMOSIN-AKTIN-KOMPLEXEN
84
3.B.6.
1.
BESTIMMUNG
DER
GLEICHGEWICHTSDISSOZIATIONSKONSTANTEN
DES
AKTINS
IM
KOMPLEX
MIT
BIRKEN-PROFILIN
85
3.B.6.2.
EINFLUSS
VON
BIRKEN-PROFILIN
AUF
DEN
AKTIN-THYMOSIN
SS9
KOMPLEX
86
3.B.7.
DEPOLYMERISIERENDE
WIRKUNG
DES
THYMOSIN
B4
AUF
FILAMENTAERES
AKTIN
90
3.B.7.I.
INDUKTION
DER
DEPOLYMERISATION
VON
FILAMENTAEREM
AKTIN
DURCH
THYMOSIN
SS4
UNTER
VERSCHIEDENEN
LONENBEDINGUNGEN
90
3.B
7.2.
EINFLUSS
VON
THYMOSIN
SS4
AUF
FILAMENTAERES
AKTIN,
DAS
DEKORIERT
MIT
TROPOMYOSIN
VORLIEGT
93
3.B.8.
ERGEBNISZUSAMMENFASSUNG
DER
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
INDUKTION
DER
POLYMERISATION
DES
AKTINS
AUS
DEM
KOMPLEX
MIT
SS-THYMOSINEN
94
3.C.
WECHSELWIRKUNG
DES
AKTIN-THYMOSIN
04-KOMPLEXES
MIT
DER
DNASE
I,
DEM
VITAMIN
D
BINDENDEN
PROTEIN,
DEM
GELSOLIN,
DEM
GELSOLIN
SEGMENT
1
UND
DEM
PROFILIN
97
3.C.I.
WECHSELWIRKUNG
DES
AKTIN-THYMOSIN
SS4-KOMPLEXES
MIT
DER
DNASE
I
98
3
.C.
1.1.
NATIVGELELEKTROPHORETISCHE
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
AUSBILDUNG
EINES
TERNAEREN
KOMPLEXES
BESTEHEND
AUS
AKTIN,
THYMOSIN
SS4
UND
DNASE
I
98
3
,C.
1.1.1.
EINFLUSS
STEIGENDER
KONZENTRATIONEN
THYMOSIN
SS4
AUF
DEN
AKTIN-DNASE
I-KOMPLEX
98
3.C.
1.1.2.
EINFLUSS
STEIGENDER
KONZENTRATIONEN
DNASE
I
AUF
DEN
AKTIN
THYMOSIN
SS4-KOMPLEX
99
3.C.I.2.
FLUORESZENZSPEKTRALPHOTOMETRISCHE
MESSUNG
DER
KOMPLEXIERUNG
DES
AKTINS
MIT
DNASE
I
UND
THYMOSIN
SS4
UNTER
POLYMERISIEREND
WIRKENDEN
BEDINGUNGEN
100
3.C.
1.2.1.
BESTIMMUNG
DER
KRITISCHEN
KONZENTRATION
VON
G-AKTIN
IN
ANWESENHEIT
DES
VITAMIN
D
BINDENDEN
PROTEINS
UND
DER
DNASE
I
101
3.C.
1.2.2.
BESTIMMUNG
DER
KRITISCHEN
KONZENTRATION
VON
G-AKTIN
IN
ANWESENHEIT
DES
THYMOSIN
SS4
UND
DER
DNASE
I
102
3.C.I.3.
ENZYMATISCHER
NACHWEIS
DER
WECHSELWIRKUNG
DES
AKTIN
THYMOSIN
SS4-KOMPLEXES
MIT
DER
DNASE
I
103
3
.C.
1.4.
GELELEKTROPHORETISCHE
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
WECHSELWIRKUNG
VON
CHEMISCH
QUERVEMETZTEM
AKTIN-THYMOSIN
SS4-KOMPLEX
MIT
DER
DNASE
I
105
3.C.
1.5.
DARSTELLUNG
EINES
TERNAEREN
QUERVEMETZTEN
KOMPLEXES
AUS
AKTIN,
THYMOSIN
SS4
UND
DNASE
I
107
3.C.
1.5.1.
NACHWEIS
DES
KOMPLEXIERTEN
THYMOSIN
SS4
IM
SDS-PA-GEL
107
3.C.
1.5.2.
NACHWEIS
DES
KOMPLEXIERTEN
THYMOSIN
SS4
IM
IMMUNOBLOT
109
3.C.2.
WECHSELWIRKUNG
DES
AKTIN-THYMOSIN
SS4-KOMPLEXES
MIT
DEM
VITAMIN
D
BINDENDEN
PROTEIN
110
3.C.2.
1.
NATIVGELELEKTROPHORETISCHE
UNTERSUCHUNG
ZUR
AUSBILDUNG
EINES
TERNAEREN
KOMPLEXES
AUS
AKTIN,
THYMOSIN
B4
UND
DEM
VITAMIN
D
BINDENDEN
PROTEIN
110
3.C.2.2.
GELELEKTROPHORETISCHE
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
WECHSELWIRKUNG
VON
CHEMISCH
QUERVEMETZTEM
AKTIN-THYMOSIN
B4-KOMPLEX
MIT
DEM
VITAMIN
D
BINDENDEN
PROTEIN
112
3.C.2.3.
NACHWEIS
EINES
TERNAEREN QUERVEMETZTEN
KOMPLEXES
AUS
AKTIN,
THYMOSIN
SS4
UND
DEM
VITAMIN
D
BINDENDEN
PROTEIN
IM
SDS-PA-GEL
UND
IM
IMMUNOBLOT
114
3.
C.3.WECHSELWIRKUNG
DES
THYMOSIN
SS4
MIT
GELSOLIN-AKTIN-KOMPLEXEN
UNTERSCHIEDLICHER
STOECHIOMETRIE
-
WECHSELWIRKUNG
DES
AKTIN
THYMOSIN
SS4-KOMPLEXES
MIT
GELSOLIN
116
3.C.3.I.
WECHSELWIRKUNG
DES
THYMOSIN
SS4
MIT
GELSOLIN-AKTIN
KOMPLEXEN
UNTERSCHIEDLICHER
STOECHIOMETRIE
116
3.C.3.
1.1.
NATIVGELELEKTROPHORETISCHE
UNTERSUCHUNG
ZUR
INTERAKTION
DES
THYMOSIN
SS4
BZW.
DES
AKTIN-THYMOSIN
SS4-KOMPLEXES
MIT
DEM
GELSOLIN:2
AKTIN-KOMPLEX
116
3.C.3.1
.2.
NATIVGELELEKTROPHORETISCHE
UNTERSUCHUNG
ZUR
INTERAKTION
DES
THYMOSIN
SS4
MIT
DEM
GELSOLIN-AKTIN-KOMPLEX
118
3.C.3.2.
GELELEKTROPHORETISCHE
UND
IMMUNOLOGISCHE
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
WECHSELWIRKUNG
VON
CHEMISCH
QUERVEMETZTEM
AKTIN
THYMOSIN
SS4-KOMPLEX
MIT
GELSOLIN
119
3.C.4.
WECHSELWIRKUNG
DES
AKTIN-THYMOSIN
SS4-KOMPLEXES
MIT
DEM
GELSOLIN
SEGMENT
1
121
3.C.4.
1.
FLUORESZENZSPEKTRALPHOTOMETRISCHE
MESSUNG
DER
KOMPLEXIERUNG
DES
AKTINS
MIT
GELSOLIN
SEGMENT
1
UND
THYMOSIN
SS4
121
3.C.4.2.
GELELEKTROPHORETISCHE
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
WECHSELWIRKUNG
VON
CHEMISCH
QUERVEMETZTEM
AKTIN-THYMOSIN
SS4-KOMPLEX
MIT
GELSOLIN
SEGMENT
1
123
3.C.5.
WECHSELWIRKUNG
DES
AKTIN-THYMOSIN
SS4-KOMPLEXES
MIT
PROFILIN
125
3.C.5.
1.
VERSUCH
ZUR
DARSTELLUNG
EINES
TERNAEREN
QUERVEMETZTEN
KOMPLEXES
AUS
AKTIN,
THYMOSIN
SS4
UND
PROFILIN
125
3.C.6.
ERGEBNISZUSAMMENFASSUNG
DER
WECHSELWIRKUNGSSTUDIEN
DES
AKTIN
THYMOSIN
SS4-KOMPLEXES
MIT
VERSCHIEDENEN
AKTIN
BINDENDEN
PROTEINEN
127
4.
DISKUSSION
129
5.
ZUSAMMENFASSUNG
137
6.
LITERATURVERZEICHNIS
139 |
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| spelling | Ballweber, Edda Verfasser aut Untersuchungen zur Polymerisation des Aktins aus dem Komplex mit b-Thymosinen und zur Interaktion des Aktin-Thymosin b4-Komplexes mit Aktin bindenden Proteinen vorgelegt von Edda Ballweber Untersuchungen zur Polymerisation des Aktins aus dem Komplex mit Beta-Thymosinen und zur Interaktion des Aktin-Thymosin Beta4-Komplexes mit Aktin bindenden Proteinen 1995 156 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Bochum, Univ., Diss., 1995 Actin (DE-588)4201876-6 gnd rswk-swf Thymosin beta 4 (DE-588)4269376-7 gnd rswk-swf Wechselwirkung (DE-588)4064937-4 gnd rswk-swf Polymerisation (DE-588)4046704-1 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Actin (DE-588)4201876-6 s Thymosin beta 4 (DE-588)4269376-7 s Wechselwirkung (DE-588)4064937-4 s DE-604 Polymerisation (DE-588)4046704-1 s DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=007207787&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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