Assoziation von Gelsolin mit Aktin:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1995
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| Beschreibung: | Bochum, Univ., Diss., 1995 |
| Beschreibung: | 124 S. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1.1
ALLGEMEINE
EINLEITUNG
1
1.2
AKTIN
2
1.3
GELSOLIN
6
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
2.1.1
PRAEPARATION
VON
AKTIN
AUS
ACETONTROCKENPULVER
12
2.1.2
HERSTELLUNG
FLUORESZENZMARKIERTEN
AKTINS
12
2.2
PRAEPARATION
VON
THROMBOZYTEN
AUS
HUMANBLUT
14
2.3
PRAEPARATION
VON
GELSOLIN
2.3.1
GELSOLIN
AUS
MENSCHLICHEN
THROMBOZYTEN
15
2.3.2
GELSOLIN
AUS
BLUTPLASMEN
17
2.3.3
PRAEPARATION
DER
1:1
GELSOLIN-AKTIN
KOMPLEXES
2.3.3.1
HERSTELLUNG
DER
DNASEL-AKTIN-AFFINITAETSSAEULE
19
2.3.3.2
PRAEPARATION
DES
1:1
GELSOLIN-AKTIN
KOMPLEXES
AUS
PLASMAGELSOLIN
UND
G-AKTIN
20
2.4
PROTEINKONZENTRATIONSBESTIMMUNG
22
2.5
HERSTELLUNG
VON
SDS-GRADIENTENGELEN
23
2.6
FAERBEMETHODEN
2.6.1
COOMASSIE-BLAU-FAERBUNG
27
2.6.2
SILBERFAERBUNG
27
2.6.3
PONCEAUFAERBUNG
VON
BLOTMEMBRANEN
28
2.7
WESTERNBLOTS
ZUM
NACHWEIS
VON
GELSOLIN
UND
AKTIN
29
2.8
FLUORESZENZ
2.8.1
THEORETISCHE
GRUNDLAGEN
30
2.8.2
FLUORESZENZMESSUNGEN
ALLGEMEIN
32
2.8.3
ANREGUNGS-UND
EMISSIONSSPEKTRUM
VON
FURA-2
33
2.8.4
BESTIMMUNG
DER
FREIEN
CALCIUMKONZENTRATION
34
2.9
KINETISCHE
MESSUNGEN
2.9.1
BESTIMMUNG
DER
KRITISCHEN
KONZENTRATION
DER
SPITZEN
FILAMENTENDEN
35
2.9.2
ASSOZIATION
VON
AKTIN
MIT
GELSOLIN
36
2.9.3
EINFLUSS
VON
CALCIUM
AUF
DIE
BILDUNG
DES
1
:2
GELSOLIN
-AKTIN
KOMPLEXES
AUS
GELSOLIN
UND
AKTIN
37
2.9.4
EINFLUSS
VON
CALCIUM
AUF
DIE
BILDUNG
DES
1
:2
GELSOLIN
-AKTIN
KOMPLEXES
AUS
1:1
GELSOLIN-AKTIN
KOMPLEX
UND
AKTIN
37
2.9.5
EINFLUSS
VON
CALCIUM
AUF
DIE
NUKLEIERTE
AKTINPOLYMERISATION
38
2.9.6
EINFLUSS
VON
MAGNESIUM
AUF
DIE
BILDUNG
DES
1
:2
GELSOLIN-AKTIN
KOMPLEXES
38
2.10
CROSSLINKING
'
-EXPERIMENTE
40
2.11
N-TERMINALE
SEQUENZIERUNG
VON
MENSCHLICHEM
PLASMA
UND
THROMBOZYTENGELSOLIN
41
3.
ERGEBNISSE
3.1
PROTEINPRAEPARATIONEN
3.1.1
PLASMAGELSOLIN
42
3.1.2
1:1
PLASMAGELSOLIN-AKTIN
KOMPLEX
47
3.1.3
THROMBOZYTENGELSOLIN
48
3.2
FLUORESZENZMESSUNGEN
3.2.1
ANREGUNGS
UND
EMISSIONSSPEKTRUM
VON
FURA-2
50
3.2.2
BESTIMMUNG
DER
FREIEN
CALCIUMKONZENTRATION
DURCH
TITRATION
53
3.2.3
EINFLUSS
VON
CALCIUM
AUF
DIE
GESCHWINDIGKEIT
DER
BILDUNG
DES
1
:2
GELSOLIN-AKTIN
KOMPLEXES
56
3.2.4
STOPPED-FLOW
-MESSUNGEN
ZUR
BILDUNG
DES
1
:2
GELSOLIN-AKTIN
KOMPLEXES
AUS
DEM
1:1
GELSOLIN-AKTIN
KOMPLEX
UND
AKTIN
58
3.2.5
AFFINITAET
VON
CALCIUM
ZU
GELSOLIN
UND
1:1
GELSOLIN-AKTIN
KOMPLEX
60
3.2.6
KOMPETITION
VON
CALCIUM
UND
MAGNESIUM
UM
DIE
BESETZUNG
DER
KATIONENBINDUNGSSTELLEN
AM
GELSOLIN
63
3.2.7
EINFLUSS
VON
CALCIUM
AUF
DIE
NUKLEATION
DER
AKTINPOLYMERISATION
70
3.3
BESTIMMUNG
DER
CALCIUM-DISSOZIATIONKONSTANTEN
VON
GELSOLIN
AUS
RINDERPLASMA
73
3.4
UNTERSUCHUNGEN
AN
HUMANGELSOLIN
3.4.1
EINFUEHRUNG
76
3.4.2
BESTIMMUNG
DER
KRITISCHEN
MONOMERENKONZENTRATION
DES
SPITZEN
FILAMENTENDES
IN
GEGENWART
VON
PLASMAGELSOLIN
76
3.4.3
AUSWERTUNG
DER
BILDUNG
DES
1:2
GELSOLIN-AKTIN
KOMPLEXES
AUS
PLASMAGELSOLIN
UND
AKTIN
79
3.4.4
AUSWERTUNG
DER
BILDUNG
DES
1:2
GELSOLIN-AKTIN
KOMPLEXES
AUS
THROMBOZYTENGELSOLIN
UND
AKTIN
81
3.4.5
AUSWERTUNG
DER
BILDUNG
DES
1:2
GELSOLIN-AKTIN
KOMPLEXES
AUS
1:1
PLASMAGELSOLIN-AKTIN
KOMPLEX
UND
AKTIN
84
3.4.6
NUKLEATION
DER
AKTINPOLYMERISATION
DURCH
PLASMAGELSOLIN
86
3.5
NUKLEATION
DER
AKTINPOLYMERISATION
DURCH
HUEHNERPLASMAGELSOLIN
3.5.1
KINETIK
DER
ASSOZIATION
VON
AKTIN
MIT
GELSOLIN
87
3.5.2
REAKTIONEN
VON
AKTIN
MIT
GELSOLIN
-
MODELL
DER
NUKLEATION
91
3.5.3
BESTIMMUNG
DER
KRITISCHEN
MONOMERENKONZENTRATION
DES
SPITZEN
FILAMENTENDES
94
3.5.4
IDENTIFIKATION
QUERVERNETZTER
GELSOLIN-AKTIN
OLIGOMERE
IM
WESTERNBLOT
96
3.5.5
BESTIMMUNG
DER
GESCHWINDIGKEITSKONSTANTE
DER
FRAGMENTATION
VON
AKTINFILAMENTEN
DURCH
HUEHNERPLASMAGELSOLIN
98
4.
DISKUSSION
103
5.
ZUSAMMENFASSUNG
UND
AUSBLICK
112
6.
LITERATURVERZEICHNIS
116
7.
ANHANG
7.A
ABKUERZUNGEN
122
7.B
PUFFERLISTE
123 |
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