Untersuchungen zur Bedeutung von Thrombomodulin, einem Zelloberflächenrezeptor für Thrombin, beim humanen Ovarialkarzinom:
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1995
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
A: EINLEITUNG 1
1. STAND DER WISSENSCHAFT 1
2. ZIELSETZUNG II
B: MATERIALIEN UND METHODEN 12
1. MATERIALIEN 12
2. METHODEN 16
2.1 ZELLKULTUR 16
2.2 PROTEINBESTIMMUNG 18
2.3 HERSTELLUNG VON ZELL- UND GEWEBEEXTRAKTEN 19
2.4 IMMUNAFFMITAETSCHROMATOGRAPHIE 20
2.5 SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) 22
2.6 WESTERN BLOT 24
2.7 IMMUNZYTOCHEMIE 26
2.8 DURCHFLUSSZYTOFLUOROMETRIE (FACS) 27
2.9 KONFOKALE LASER SCAN MIKROSKOPIE (CLSM) 29
2.10 ERSTELLUNG EINES QUANTITATIVEN ENZYMIMMUNOASSAYS (ELISA) FUER
THROMBOMODULIN (TM) 30
2.11 PROTEIN C-AKTIVIERUNGSASSAY 34
2.12 /N-VFTRO-INVASIONSASSAY 35
2.13 ERSTELLUNG EINES PRO-UPA INAKTIVIERUNGSASSAYS 36
2.14 STATISTISCHE KENNGROESSEN 38
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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SEITE
C: ERGEBNISSE 39
1. NACHWEIS DES ZELLOBERFLAECHENREZEPTORS THROMBOMODULIN (TM) IN/AUF
HUMANEN OVARIALKARZINOMZELLINIEN DURCH BIOCHEMISCHE UND
IMMUNOLOGISCHE METHODEN 39
1.1 UEBERPRUEFUNG DER REINHEIT VON LOESLICHEM REKOMBINANTEM TM (REC-TM)
DURCH
SDS-PAGE 39
1.2 QUALITAETSKONTROLLE VON LOESLICHEM REKOMBINANTEM TM (REC-TM) IM
WESTERN BLOT DURCH DIE MONOKLONALEN ANTIKOERPER MAK # 531 UND # 43B 39
1.3 AUFSTELLUNG EINES HOCHSENSITIVEN TM-ELISA 40
1.4 DETEKTION DES ZELLOBERFLAECHENREZEPTORS TM AUF/IN HUMANEN
OVARIALKARZINOMZELLEN MITTELS DURCHFLUSSZYTOFLUOROMETRIE 42
1.5 NACHWEIS VON TM IN/AUF 6 VERSCHIEDENEN OVARIALKARZINOMZELLINIEN
MITTELS
FACS, ELISA UND PROTEIN C-AKTIVIERUNG 44
1.6 NACHWEIS VON TM MITTELS KONFOKALER LASER SCAN MIKROSKOPIE
(CLSM) AUF DER ZELLOBERFLAECHE VON OVARIALKARZINOMZELLEN 45
1.7 IMMUNZYTOCHEMISCHE DETEKTION VON TM IN/AUF OV-MZ-19 ZELLEN 47
1.8 THROMBIN-ABHAENGIGE PROTEIN C-AKTIVIERUNG IN ANWESENHEIT VON TM
BEI OV-MZ-19 ZELLEN 48
1.9 INHIBIERUNG DER DURCH THROMBIN/TM-VERMITTELTEN PROTEIN-C AKTIVIERUNG
VON OV-MZ-19 ZELLEN MITTELS MAK # 531 UND # 43B 48
2. BESTIMMUNG DES TM-ANTIGENGEHALTES IN BENIGNEM UND MALIGNEM
GEWEBE DES OVARS: VERGLEICH VON TRITON X-100 EXTRAKTEN MIT
ZYTOSOLFRAKTIONEN 49
2.1 BESTIMMUNG DER TM-ANTIGENKONZENTRATION IN BENIGNEN PERITONEAL
FLUESSIGKEITEN BZW. IM ASZITES VON OVARIALKARZINOMPATIENTINNEN 51
SEITE
3. ISOLIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG VON LOESLICHEM TM AUS
OVARIALKARZINOMASZITES 51
3.1 VISUALISIERUNG VON TM MITTELS WESTERN BLOT UND
VERGLEICH MIT IMMUNAFFINITAETSGEREINIGTEM TM 51
3.2 NACHWEIS DER FUNKTIONALITAET DES LOESLICHEN ASZITES-TM MITTELS
PROTEIN C-AKTIVIERUNG 52
3.3 INHIBIERUNG DER DURCH LOESLICHES TM VERMITTELTEN PROTEIN C-
AKTIVIERUNG DURCH MONOKLONALE ANTIKOERPER #531 UND # 43B 54
4. INHIBIERUNG DER INVASION DER HUMANEN OVARIALKARZINOMZELLEN IN
GEGENWART TM-NEUTRALISIERENDER MONOKLONALER ANTIKOERPER 54
5. UNTERSUCHUNGEN ZUR INAKTIVIERUNG DES REZEPTORGEBUNDENEN PRO-
UPA DURCH THROMBIN BZW. DURCH DEN THROMBIN/TM-KOMPLEX 56
5.1 EINFLUSS DES REKOMBINANTEN UROKINASEREZEPTORS (REC-UPAR
277
) AUF DIE
INAKTIVIERUNG VON PRO-UPA DURCH THROMBIN 56
5.2 INAKTIVIERUNG VON FREIEM UND REZEPTORGEBUNDENEM PRO-UPA DURCH
THROMBIN BZW. DURCH DEN THROMBIN/TM-KOMPLEX 57
5.3 EINFLUSS VON REC-UPAR
277
UND/ODER TM AUF DIE THROMBIN
VERMITTELTE INAKTIVIERUNG VON PRO-UPA 58
5.4 KONTROLLVERSUCHE ZUR INAKTIVIERUNG VON PRO-UPA 59
5.5 INAKTIVIERUNG VON PRO-UPA DURCH THROMBIN BZW. DURCH DEN THROMBIN/TM-
KOMPLEX IN AN- BZW. ABWESENHEIT VON REC-UPAR
277
60
D: DISKUSSION 63
E: ZUSAMMENFASSUNG 72
F: LITERATURVERZEICHNIS 74
G: ABKUERZUNGEN 91
H: DANKSAGUNG 93
I: EIGENE VEROEFFENTLICHUNGEN 94
J: LEBENSLAUF 95 |
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