Multigenfamilien in der Hefe Saccharomyces cerevisiae: Charakterisierung zweier Mitglieder einer neuen Superfamilie als Komponenten eines proteolytischen Systems der Mitochondrien
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
München
Diss.-Verl. NG-Kopierladen
1996
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| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Zugl.: München, Univ., Fak. für Biologie, Diss., 1996 |
| Beschreibung: | VII, 139 S. graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
1
1.1
EVOLUTION
VON
GENFAMILIEN
1
1.2
DIE
AAA
BZW.
CAD-FAMILIE
2
1.3
FRAGESTELLUNG
UND
ZIEL
DER
ARBEIT
9
2
MATERIAL
UND
METHODEN
11
2.1
ORGANISMEN
11
2.2
PLASMIDE
UND
VEKTOREN
12
2.3
ENZYME
12
2.4
CHEMIKALIEN
13
2.5
RADIOAKTIV
MARKIERTE
SUBSTANZEN
14
2.6
GERAETE
14
2.7
SONSTIGES
14
2.8
HAEUFIG
VERWENDETE
PUFFER
UND
LOESUNGEN
15
2.9
MEDIEN
24
2.10
ANZUCHT
UND
LAGERUNG
DER
ORGANISMEN
25
2.11
PRAEPARATION
VON
DNA
26
2.11.1
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-UND
COSMID-DNA
AUS
.
CO/T
26
2.11.2
PRAEPARATION
GENOMISCHER
DNA
AUS
SACCHAROMYCES
CEREVISIAE
27
2.11.3
PRAEPARATION
VON
HEFECHROMOSOMEN
27
2.11.4
ISOLIERUNG
VON
DNA
AUS
M13-PHAGEN
28
2.11.5
AMPLIFIZIERUNG
VON
DNA
MIT
DER
POLYMERASEKETTENREAKTION
28
2.12
REINIGUNG
UND
ANALYSE
VON
DNA
29
2.12.1
PHENOLEXTRAKTION
UND
ETHANOLFALHMG
29
2.12.2
GELELEKTROPHORESEN
30
2.12.2.1
AGAROSEGELE
30
2.12.2.2
POLYACRYLAMIDGELE
30
2.12.3
ELEKTROELUTION
31
2.12.4
TRANSFER
UND
NACHWEIS
VON
DNA
AUF
MEMBRANEN
("SOUTHERN
BLOTTMG")
31
2.13
ENZYMATISCHE
MODIFIKATION
VON
DNA
32
2.13.1
RESTRIKTIONSVERDAU
VON
DNA
32
2.13.2
AUFLULLEN
UEBERHAENGENDER
DNA-ENDEN
33
2.13.3
DEPHOSPHORYLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
33
2.13.4
LIGIENING
VON
DNA-MOLEKUELEN
33
2.13.5
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA
33
INHALTSVERZEICHNIS
Y
2.13.6
SEQUENZIERUNG
VON
DNA
34
2.14
TRANSFORMATION
VON
BAKTERIEN
UND
HEFEZELLEN
34
2.14.1
HERSTELLUNG
TRANSFORMATIONSKOMPETENTER
E.
CO/Z-ZELLEN
34
2.14.2
TRANSFORMATION
KOMPETENTER
E
COLI-ZEUEEN
34
2.14.3
TRANSFEKTION
KOMPETENTER
E.
COLI-ZELLEN
35
2.14.4
TRANSFORMATION
VON
HEFEZELLEN
35
2.15
PROTEINSYNTHESE
36
2.15.1.
IN
V/FRO-TRANSKRIPTION
UND
-TRANSLATION
36
2.15.2.
EXPRESSION
VON
IPTG-INDUZIERBAREN
PLASMIDEN
IN
E.
COLI
37
2.16.
ANALYSE
VON
PROTEINEN
37
2.16.1
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE(SDS-PAGE)
37
2.16.2
ANFARBEN
UND
FHIOROGRAPHIE
VON
PROTEINGELEN
38
2.16.3
TRANSFER
VON
PROTEINEN
AUF
NITROZELLULOSE
MEMBRANEN
("WESTERN
BLOTTING
I")
38
2.16.4
PROTEINBESTIMMUNG
39
2.16.5
PROTEINFALLUNG
MIT
TRICHLORESSIGSAEURE
(TCA)
39
2.17
BESTIMMUNG
ENZYMATISCHER
AKTIVITAETEN
39
2.17.1
NADH:CYTOCHROMC
OXIDOREDUKTASE
39
2.17.2
FERROCYTOCHROM
C:
OXIDOREDUKTASE
40
2.18
SUBFIAKTIONIERUNG
VON
HEFEZELLEN
40
2.18.1
ISOLIERUNG
VON
MITOCHONDRIEN
AUS
S.
CEREVISIAE
40
2.18.2
PRAEPARATION
EINER
ZYTOSOLISCHEN
UND
EINER
MIKROSOMALEN
ZELLFIAKTION
AUS
S.
CEREVISIAE
41
2.19
SUBFRAKTIONIERUNG
VON
MITOCHONDRIEN
AUS
S.
CERVISIAE
42
2.20
IMPORT
VON
IN
VFIRO-SYNTHETISIERTEN
PROTEINVORSTUFEN
IN
MITOCHONDRIEN
AUS
S.
CEREVISIAE
43
2.21
IN
ORGANELLO-XTTARAES&BN.
MITOCHONDRIALER
PROTEINE
43
2.22
IN
VRVO-TRANSLATION
MITOCHONDRIALER
PROTEINE
44
2.23
SPORULATION
UND
TETRADENANALYSE
VON
HEFEZELLEN
45
2.23.1
SPORULATION
VON
HEFEZELLEN
45
2.23.2
TETRADENANALYSE
45
2.24
GEWINNUNG
SPEZIFISCHER
ANTISEREN
45
2.24.1
AUSWAHL
VON
OLIGOPEPTIDEN
45
2.24.2
KOPPLUNG
VON
OLIGOPEPTIDEN
AN
TRAEGERPROTEINE
46
2.24.3
IMMUNISIERUNG
DER
KANINCHEN
46
2.24.4
GEWINNUNG
DER
ANTISEREN
47
2.25
NACHWEIS
IMMOBILISIERTER
PROTEINE
AUF
MEMBRANEN
("WESTERN
BLOTTING
II")
47
VI
INHALTSVE
RZEICHNIS
3
ERGEBNISSE
48
3.1
IDENTIFIZIERUNG
VON
YTA1O,
YTA11
UND
YTA12
ALS
MITGLIEDER
DER
AAA
BZW.
CAD-FAMILIE
IN
DER
HEFE
S.
CEREVISIAE
48
3.1.1
DIE
NUKLEINSAEURESEQUENZEN
VON
YTA1O,
YTAU
UND
YTA12
50
3.1.2
DIE
PRIMAERSTRUKTUREN
VON
YTALOP,
YTALLP
UND
YTAL2P
52
3.1.4
HOMOLOGIEVERGLEICHE
ZWISCHEN
YTALOP,
YTALLP,
YTAL2P
UND
FTSH
56
3.2
DIE
CHROMOSOMALE
LOKALISATION
VON
YTA10,
YTA11
UND
YTA12
59
3.3
GENETISCHE
CHARAKTERISIERUNG
VON
YTA10
UND
YTA12
61
3.3.1
DIE
DISRUPTION
VON
YTA
JO
UND
YTA12
61
3.3.1.1
HERSTELLUNG
GEEIGNETER
DISRUPTIONSKONSTRUKTE
61
3.3.1.2
TRANSFORMATION
DES
HEFESTAMMES
W303D
MIT
VERSCHIEDENEN
DISRUPTIONSKONSTRUKTEN
63
3.3.2
PHAENOTYPISCHE
ANALYSE
DES
WACHSTUMSVERHALTENS
VON
MAY20
(YTA10/YTAL0::URA3)
UNDRTY12
(YTA12/YTAL2::HIS3)
65
3.3.3
KOMPLEMENTATION
DER
WACHSTUMSDEFEKTE
DER
HAPLOIDEN
DISRUPTANTENSTAEMME
MAY20
(YTA10/YTAL0::URA3)
UND
RTY12
(YTA12/YTAL2::HIS3)
67
3.4
SPEKTROSKOPISCHE
UNTERSUCHUNG
DER
MITOCHONDRIALEN
ATMUNGSKOMPETENZ
70
3.5
DIE
SUBZELHILAERE
LOKALISIERUNG
VON
YTALOP
UND
YTAL2P
73
3.5.1
IMPORT
VON
YTALOP
UND
YTAL2P
IN
MITOCHONDRIEN
AUS
S.
CEREVISIAE
73
3.5.2
IMMUNOLOGISCHER
NACHWEIS
VON
YTALOP
UND
YTAL2P
76
3.5.2.1
HERSTELLUNG
SPEZIFISCHER
ANTISEREN
77
3.5.2.2
NACHWEIS
VON
YTALOP
UND
YTAL2P
IN
VERSCHIEDENEN
SUBZELLULAEREN
FRAKTIONEN
79
3.6
SUBMITOCHONDRIALE
LOKALISIERUNG
UND
TOPOLOGIE
VON
YTALOP
UND
YTAL2P
81
3.7
FUNKTIONELLE
CHARAKTERISIERUNG
VON
YTALOP
UND
YTAL2P
84
3.7.1
TRANSLATION
MITOCHONDRIAL
KODIERTER
PROTEINE
84
3.7.2
DIE
ROLLE
VON
YTALOP
UND
YTAL2P
BEIM
PROTEOLYTISCHEN
ABBAU
VON
IN
ORGANELLO
SYNTHETISIERTEN
POLYPEPTIDKETTEN
87
3.7.2.1
PROTEOLYSE
VOLLSTAENDIG
SYNTHETISIERTER
POLYPEPTIDKETTEN
87
3.7.2.2
PROTEOLYSE
UNVOLLSTAENDIG
SYNTHETISIERTER
POLYPEPTIDKETTEN
88
3.7.2.3
ATP-ABHAENGIGKEIT
DES
PROTEOLYTISCHEN
ABBAUS
UNVOLLSTAENDIG
SYNTHETISIERTER
POLYPEPTIDKETTEN
92
3.7.2.4
ABHAENGIGKEIT
DER
PROTEOLYSE
UNVOLLSTAENDIG
SYNTHETISIERTER
POLYPEPTIDKETTEN
VON
DER
GEGENWART
ZWEIWERTIGER
METALLIONEN
93
INHALTSVERZEICHNIS
VN
4
DISKUSSION
96
4.1
DIE
PHYLOGENIE
DER
YTA-FAMILIE
96
4.2
DIE
TOPOLOGIE
VON
YTALOP
UND
YTAL2P
101
4.3
GENETISCHE
UND
BIOCHEMISCHE
FUNKTIONSANALYSE
VON
YTALOP
UND
YTAL2P
105
4.4
DIE
KLASSIFIZIERUNG
VON
YTALOP
UND
YTAL2P
108
5
ZUSAMMENFASSUNG
112
6
LITERATUR
114
7
ANHANG
130 |
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