Genfamilien in der Hefe Saccharomyces cerevisiae: Suche nach Homologen der Protein-Disulfid-Isomerase und Charakterisierung des MAL3R-Genlocus
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1996
|
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| Beschreibung: | München, Univ., Med. Fak., Diss., 1996 |
| Beschreibung: | 87 S. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
.
1
1.1
EXISTIERT
EINE
GENFAMILIE
MIT
DEM
KONSERVIERTEN
AMINOSAEUREMOTIV
PWCGHC
IN
DER
HEFE
S.
CEREVISIAE?
.
3
1.2
EINE
NEUE
SUBTELOMERASSOZIIERTE
GEN-FAMILIE
IN
DER
HEFE?
.
6
2.
ERGEBNISSE
.
8
2.1
SUCHE
NACH
EINER
GENFAMILIE
MIT
DEM
KONSERVIERTEN
AMINOSAEUREMOTIV
PWCGHC
IN
DER
HEFE
S.
CEREVISIAE
.
8
2.1.1
EXPERIMENTELLER
ANSATZ
ZUR
SUCHE
NACH
EINER
GENFAMILIE
MIT
HILFE
DER
PCR
.
8
2.1.2
ENTWURF
DEGENERIERTER
OLIGONUKLEOTIDE
ALS
PCR-PRIMER
.
10
2.1.2.1
WAHL
DER
PCR-BEDINGUNGEN
.
11
2.1.2.2
ANALYSE
BEKANNTER
PROTEINSEQUENZEN
MIT
DEM
DUPLIZIERTEN
MOTIV
PWCGHC
.
12
2.1.2.3
AUSWAHL
DER
VERWENDETEN
PRIMER
.
16
2.1.3
GENOMISCHE
DNA
AUS
VERSCHIEDENEN
EUKARYONTEN
UND
AUSGEWAEHLTER
COSMIDKLONE
EINER
GENOMISCHEN
HEFE-GENBANK
ALS
DNA-MATRIZE
FUER
PCR
ANSAETZE
MIT
PRIMERN
FUER
DAS
MOTIV
PWCGHC
.
18
2.1.4
HYBRIDISIERUNGSANALYSE
DER
PCR-PRODUKTE
MIT
PRIMERN
FUER
DAS
MOTIV
PWCGHC
.
19
2.1.5
SEQUENZIERUNG
DER
PCR-PRODUKTE
.
20
2.1.6
PCR
BEI
UNTERSCHIEDLICHEN
4NNEWNG-TEMPERATUREN
.
21
2.1.7
PCR
MIT
KOMBINATIONEN
SPEZIELLER
PRIMER
.
23
2.1.8
RESULTATE
DER
PCR-VERSUCHE
UND
DER
HYBRIDISIERUNGSANALYSE
.
25
2.2
SEQUENZIERUNG
UND
ANALYSE
EINES
REPETITIVEN
SEQUENZBEREICHS
ASU
AUS
DER
SUBTELOMERREGION
DER
HEFE
S.
CEREVISIAE
:
EIN
BISLANG
UNBEKANNTER
MAL
GENLOCUS
AUF
CHROMOSOM
II
?
.
26
2.2.1
ISOLIERUNG
EINES
COSMIDFRAGMENTS,
WELCHES
DIE
REPETITIVE
SEQUENZ
ASU
ENTHAELT
.
27
2.2.2
KLONIERUNG
DES
326BAMSAL3-FRAGMENTS
AUS
DEM
COSMIDKLON
C326
.
29
2.2.3
ERSTELLEN
EINER
RESTRIKTIONSKARTE
DES
326BAMSAL3-FRAGMENTS
.
29
2.2.4
STRATEGIE
ZUR
SEQUENZIERUNG
DES
326BAMSAL3-FRAGMENTS
.
30
2.2.4.1
UNGERICHTETE
KLONIERUNG
UEBERLAPPENDER
SUBFRAGMENTE
AUS
DEM
326BAMSAL3
FRAGMENT
.
31
2.2.4.2
GEZIELTE
KLONIERUNG
VON
SUBFRAGMENTEN
AUS
DEM
326BAMSAL3-FRAGMENT
.
31
2.2.5
DIE
DNA-SEQUENZANALYSE
DES 326BAMSAL3-FRAGMENTS
ZEIGT,
DASS
ES
SICH
UM
EINE
KOPIE
EINES
TEILS
DES
AFAL-GENLOCUS
HANDELT
.
32
2.2.6
DIE
ZINKFINGERDOMAENE
IN
MAL3RP
UNTERSCHEIDET
SICH
VON
DER
MAL6RP
DOMAENE
.
37
2.2.7
NUKLEOTIDSEQUENZVERGLEICH
DER
MAL3R
'UPSTREAM
REGION
1
MIT
BEKANNTEN
DNA-BINDUNGSSTELLEN
FUER
HEFE-TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
.
40
2.2.8
VERGLEICH
DER
RESTRIKTIONSKARTEN
DES
326BAMSAL3-FRAGMENTS
MIT
DER
VON
CHOW
ET
AL.
FUER
DEN
AFAL3-GENLOCUS
.
42
3.
DISKUSSION
.
43
3.1
ERGEBNISSE
DER
GENOMANALYSE
.
43
3.2
SUCHE
NACH
GENFAMILIEN
MIT
HILFE
DER
PCR-METHODE
.
44
3.3
KEINE
GENFAMILIE
MIT
DEM
DUPLIZIERTEN
PROTEINMOTIV
PWCGHC
IN
DER
HEFE?
.
46
3.4
WARUM
GIBT
ES
MOEGLICHERWEISE
NUR
DIE
PDI
IN
DER
HEFE?
.
46
3.5
IST
DIE
ENTSTEHUNG
DER
SUC
UND
MAL-GENLOCI
MITEINANDER
VERKNUEPFT?
.
48
3.6
VERGLEICH
DES
MAL3
MIT
DEM
AFAL6-GENLOCUS
.
51
3.6.1
UNTERSCHIEDE
IN
DEN
REGULATORISCHEN
SEQUENZBEREICHEN
.
51
3.6.2
UNTERSCHIEDE
IN
DER
ZINKFINGER-DOMAENE
DEUTEN
AUF
UNTERSCHIEDLICHE
BINDUNGSEIGENSCHAFTEN
DES
MAL3RP-TRANSKRIPTIONSREGULATORS
HIN
.
51
4.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
53
4.1
MATERIAL
.
53
4.1.1
BAKTERIEN-UND
HEFESTAEMME
.
53
4.1.2
KLONIERUNGSVEKTOREN
.
53
4.1.3
ENZYME
.
53
4.1.4
RADIOAKTIV
MARKIERTE
KOMPONENTEN
.
54
4.1.5
CHEMIKALIEN
.
54
4.1.6
KLEINMATERIALIEN
.
55
4.1.7
GERAETE
.
55
4.1.8
MEDIEN
UND
PUFFER
.
56
4.2
METHODEN
.
59
4.2.1
TRANSFORMATION
VON
E.COFI-STAEMMEN
.
59
4.2.1.1
TRANSFORMATIONSKOMPETENTE
BAKTERIEN
.
59
4.2.1.2
TRANSFORMATION
MIT
PLASMIDEN
.
59
4.2.1.3
TRANSFEKTION
VON
E.CO/I-ZELLEN
MIT
DEM
PHAGEN
M13
.
59
4.2.2
ISOLIERUNG
VON
PLASMID
BZW.
COSMID-DNA
AUS
E.COLI-ZELLEN
.
60
4.2.2.1
PRAEPARATION
GERINGER
MENGEN
DNA
.
60
4.2.2.2
PRAEPARATION
GROESSERER
MENGEN
DNA
.
60
4.2.3
ISOLIERUNG
VON
GENOMISCHER
DNA
AUS
HEFE
.
61
4.2.4
SPALTUNG
VON
DNA
MIT
RESTRIKTIONSNUKLEASEN
.
61
4.2.5
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA
.
61
4.2.6
PHOSPHATASEBEHANDLUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
.
62
4.2.7
ELEKTROPHORETISCHE
AUFTRENNUNG
VON
DNA-MOLEKUELEN
UEBER
AGAROSE-GELE
.
.
62
4.2.8
ISOLIERUNG
VON
DNA-MOLEKUELEN
AUS
AGAROSEGELEN
.
'.
.
62
4.2.8.1
ELEKTROELUTION
.
62
4.2.8.2
ABTRENNUNG
DER
DNA
DURCH
DIE
"ZENTRIFUGATIONS-METHODE"
.
63
4.2.9
TRANSFER
VON
DNA
AUF
NITROCELLULOSE-MEMBRAN
("SOUTHERN-BLOTTING")
UND
HYBRIDISIERUNG
.
63
4.2.10
DNA-SEQUENZIERUNG
NACH
DER
KETTENABBRUCH-METHODE
.
63
4.2.11
PCR
(POLYMERASE-KETTENREAKTION)
.
64
4.2.12
C-PROGRAMM
ZUM
VERGLEICH
VON
DNA-SEQUENZEN
.
64
4.3
VERWENDETE
COSMID-,
PLASMID
UND
M13-SUBKLONE
.
65
4.3.1
COSMIDKLONE
.
65
4.3.2
PUC-SUBKLONE
.
65
4.3.3
M13-SUBKLONE
.
65
4.4
VERWENDETE
PRIMER
.
66
4.5
QUELLCODE
FUER
C-PROGRAMM
ZUM
VERGLEICH
VON
DNA-SEQUENZEN
.
67
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
77
6.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
80
6.1
ALLGEMEINE
ABKUERZUNGEN
.
80
6.2
NUKLEOTIDE
.
81
6.3
AMINOSAEUREN
.
81
7.
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
.
83
8.
LITERATURVERZEICHNIS
.
85 |
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| title_sort | genfamilien in der hefe saccharomyces cerevisiae suche nach homologen der protein disulfid isomerase und charakterisierung des mal3r genlocus |
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| topic | Genfamilie (DE-588)4212496-7 gnd Genklonierung (DE-588)4123275-6 gnd Protein-Disulfid-Isomerase (DE-588)4256460-8 gnd Saccharomyces cerevisiae (DE-588)4178812-6 gnd |
| topic_facet | Genfamilie Genklonierung Protein-Disulfid-Isomerase Saccharomyces cerevisiae Hochschulschrift |
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