Bekämpfung von pflanzenparasitären Nematoden der Gattung Meloidogyne mit Pilzen und deren Toxinen:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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1995
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IMAGE 1
BEKAEMPFUNG VON PFLANZENPARASITAEREN NEMATODEN
DER GATTUNG MELOIDOGYNE MIT PILZEN UND DEREN TOXINEN
VOM FACHBEREICH BIOLOGIE , DER UNIVERSITAET KAISERSLAUTEM ZUR ERLANGUNG
DES AKADEMISCHEN GRADES
"DOKTOR DER NATURWISSENSCHAFTEN"
GENEHMIGTE DISSERTATION (D 386)
VORGELEGT VON
ANKE MAYER
VORSITZENDER: 1. BERICHTERSTATTERIN: 2. BERICHTERSTATTER:
PROF. DR. H. HUBER PROF. DR. H. ANKE PROF. DR. J.A. CULLUM
TAG DER WISSENSCHAFTLICHEN AUSSPRACHE: 15.12.95
KAISERSLAUTERN 1995
IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
2. MATERIAL UND METHODEN 9
2.1 CHEMIKALIEN 9
2.2 MEDIEN, PUFFERUND LOESUNGEN 12
2.2.1 MEDIEN FUER PILZE UND BAKTERIEN 12
2.2.2 MEDIEN ZUR KULTIVIERUNG VON NEMATODEN 14
2.2.3 MEDIEN FUER ZELLKULTUREN 15
2.2.4 PUFFER UND LOESUNGEN 15
2.3 ORGANISMEN 17
2.3.1 BEARBEITETE PILZSTAEMME 17
2.3.2 TESTORGANISMEN FUER DIE BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG DER
ISOLIERTEN
VERBINDUNGEN 18
2.3.3 NEMATODEN 19
2.3.4 ZELLINIEN 19
2.3.5 PFLANZEN 19
2.4 KULTIVIERUNGSMETHODEN 20
2.4.1 KULTIVIERUNG VON NEMATODEN 20
2.4.1.1 ANZUCHT UND GEWINNUNG VON M. INCOGNITA LARVEN 20
2.4.1.1.1 KULTIVIERUNG VON M. INCOGNITA AN PAPRIKA UNTER UNSTERILEN
BEDINGUNGEN UND
GEWINNUNG VON LARVEN (L2) 20
2.4.1.1.2 AUFBAU DER STERILEN M. INCOGNITA KULTUR (NACH SOUTHEY [63] UND
KOENNING
[64]) 20
2.4.1.1.3 STERILE KULTIVIERUNG VON M. INCOGNITA AN GURKENKEIMLINGEN UND
GEWINNUNG
DER LARVEN (L2) * -. 21
2.4.1.1.4 STERILISATION VON M. INCOGNITA L2 MIT VERSCHIEDENEN
ANTIBIOTIKALOESUNGEN 22
2.4.1.2 STERILE KULTIVIERUNG VON CAENORHABDITIS ELEGANS (NACH [60]) 22
2.4.2 KULTIVIERUNG VON PILZEN 22
2.4.3 KULTIVIERUNG VON ZELLINIEN 22
2.5 FERMENTATION UND SCREENING VON BASIDIOMYCETEN UND ASCOMYCETEN IN
SUBMERSKULTUR 23
2.5.1 GEWINNUNG VON ROHEXTRAKTEN FUER DAS SCREENING 23
2.5.2 SCREENING NACH NEMATIZIDEN WIRKSTOFFEN 23
2.5.3 FERMENTATION DER PRODUZENTENSTAEMME UND GEWINNUNG DER ROHEXTRAKTE
24
2.5.4 UNTERSUCHUNGEN ZUM SEKUNDAERMETABOLISMUS VON OMPHALOTUS OLEARIUS TA
90170 UND WEITERER STAEMME DER GATTUNG 25
2.5.5 FERMENTATION VON STAEMMEN DER GATTUNG OMPHALOTUS, LAMPTEROMYCES,
PAX///USUND HYGROPHOROPSIS 25
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
2.5.6 WACHSTUMSVERHALTEN VON O. OLEARIUS AUF FESTMEDIUM BEI
VERSCHIEDENEN
TEMPERATUREN 26
2.5.7 FERMENTATIONSANALYSEN 26
2.5.7.1 PH-WERT 26
2.5.7.2 ENZYMATISCHE BESTIMMUNG DES GLUCOSE- UND MALTOSEGEHALTES 26
2.5.7.3 MYZELTROCKENGEWICHT 27
2.5.7.4 ABGASANALYTIK 27
2.5.7.5 HPLC-ANALYTIK 27
2.5.7.5.1 BESTIMMUNG VON RETENTIONSZEIT UND GEHALT DER ISOLIERTEN
SUBSTANZEN 27
2.5.7.5.2 AMINOSAEURENANALYTIK 28
2.6 METHODEN ZUR REINIGUNG DER WIRKSTOFFE 30
2.7 METHODEN ZUR PHYSIKALISCH-CHEMISCHEN CHARAKTERISIERUNG DER
WIRKSTOFFE 32
2.7.1 DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE 32
2.7.2 SPEKTROSKOPIE 33
2.7.3 SAURE HYDROLYSE VON OMPHALOTIN 33
2.8 BIOLOGISCHE TESTMETHODEN 33
2.8.1 TESTS MIT NEMATODEN 33
2.8.1.1 WASSERAGARTEST (ANTAGONISTENTEST) 33
2.8.1.2 MIKROTITERPLATTENTEST 34
2.8.1.3 MIGRATIONSTEST (SEPHADEXTEST) " 34
2.8.1.4 NEMATIZIDTEST AN GURKENKEIMLINGEN 34
2.8.2 BIOLOGISCHE TESTSYSTEME ZUR CHARAKTERISIERUNG ISOLIERTER
NATURSTOFFE 35
2.8.2.1 CYTOTOXIZITAETSTEST 36
2.8.2.2 AGARDIFFUSIONSTEST 35
2.8.2.3 REIHENVERDUENNUNGSTEST 36
2.8.2.4 PFLANZENKEIMUNGSTEST 36
2.8.2.5 HAEMOLYSETEST 37
2.8.3 WEITERE TESTSYSTEME 37
3. ERGEBNISSE 38
3.1 ETABLIERUNG EINER STERILEN KULTUR UND EINES TESTSYSTEMS MIT M.
INCOGNITA
(KOFOID & WHITE) CHITWOOD 38
3.1.1 ETABLIERUNG EINER STERILEN KULTUR VON M. INCOGNITA 38
3.1.2 TESTSYSTEME ZUM SCREENING AUF NEMATIZIDE UND NEMATOPHAGE AKTIVITAET
VON
PILZEN GEGEN M. INCOGNITA 42
3.1.3 WIRKUNG BEKANNTER NATURSTOFFE AUF M. INCOGNITA IM
MIKROTITERPLATTENTEST 44
3.1.4 VERGLEICH VON M. INCOGNITA UND C. ELEGANS 45
3.1.5 WIRKUNG VON FETTSAEUREN AUF M. INCOGNITA 48
IMAGE 4
INHALTSVERZEICHNIS
3.1.6 SCREENING VON HOEHEREN PILZEN AUF NEMATIZIDE AKTIVITAET GEGEN M.
INCOGNITA
IM MIKROTITERPLATTENTEST UND AUSWAHL DER PRODUZENTENSTAEMME 49
3.2 NEMATIZIDE VERBINDUNGEN AUS PILZEN 50
3.2.1 HA A4990: PRODUZENT VON 5-PENTYL-2-FURALDEHYD UND A4990B 50
3.2.1.1 ASCOMYCET HA A4990 50
3.2.1.2 FERMENTATION VON HA A4990 50
3.2.1.3 ISOLIERUNG DER VERBINDUNGEN AUS HA A4990 52
3.2.1.4 PHYSIKALISCH-CHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG VON
5-PENTYL-2-FURALDEHYD UND
A4990B 53
3.2.1.4.1 VERHALTEN BEI DER CHROMATOGRAPHIE UND REAKTION MIT
VERSCHIEDENEN
SPRUEHREAGENZIEN 54
3.2.1.4.2 UVA/IS-UND IR-SPEKTROSKOPIE 54
3.2.1.5 BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG DER SUBSTANZEN AUS HA A4990 57
3.2.1.5.1 TEST AUF NEMATIZIDE AKTIVITAET (MIKROTITERPLATTENTEST) 57
3.2.1.5.2 WASSERAGARTEST (ANTAGONISTENTEST) 57
3.2.1.5.3 MIGRATIONSTEST (SEPHADEXTEST) 57
3.2.1.5.4 BESTIMMUNG DER MINIMALEN HEMMKONZENTRATION IM REIHENVER-
DUENNUNGSTEST 57
3.2.1.5.5 CYTOTOXIZITAETSTEST 59
3.2.1.5.6 PFLANZENKEIMUNGSTEST ? 59
3.2.1.5.7 HAEMOLYSETEST 60
3.2.1.5.8 WIRKUNG IN WEITEREN TESTSYSTEMEN 60
3.2.2 OMPHALOTUS OLEAHUS TA 90170: PRODUZENT VON ILLUDIN M, OMPHALOTIN
UND
LNDOL-3-N-METHYLPROPANAMID 61
3.2.2.1 BASIDIOMYCET O. OLEARIUS (DC EX FR.) SING. TA 90170 61
3.2.2.2 FERMENTATION VON O. O/EAM/STA 90170 IM 100 I MASSSTAB 63
3.2.2.3 ISOLIERUNG VON OMPHALOTIN UND WEITERER NEMATIZIDER FRAKTIONEN
AUS EINER
FERMENTATION IN 100 I M1 63
3.2.2.4 FERMENTATION VON O. OLEARIUS IN 201 M1.: 66
3.2.2.4.1 FERMENTATIONSVERLAUF 66
3.2.2.4.2 PRODUKTION VERSCHIEDENER NEMATIZIDER SUBSTANZEN WAEHREND DER
FERMENTATION 67
3.2.2.4.3 ISOLIERUNG VON OMPHALOTIN, ILLUDIN M UND
LNDOL-3-N-METHYLPROPANAMID AUS
DEN EXTRAKTEN VON O. O/EANUS TA 90170 70
3.2.2.5 PHYSIKALISCH-CHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG VON OMPHALOTIN UND
LNDOL-3-N- METHYL-PROPANAMID 70
3.2.2.5.1 AMINOSAEURENZUSAMMENSETZUNG (HYDROLYSE) VON OMPHALOTIN 70
3.2.2.5.2 NMR-UND MASSENSPEKTROSKOPIE 73
IMAGE 5
INHALTSVERZEICHNIS
3.2.2.5.3 UV/VIS-UND IR-SPEKTROSKOPIE 75
3.2.2.5.4 RETENTIONSZEITEN AN DER ANALYTISCHEN HPLC 78
3.2.2.5.5 VERHALTEN BEI DER CHROMATOGRAPHIE UND REAKTION MIT
VERSCHIEDENEN SPRUEH- REAGENZIEN : 79
3.2.2.6 BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG VON OMPHALOTIN UND
LNDOL-3-N-METHYL- PROPANAMID 80
3.2.2.6.1 TEST AUF NEMATIZIDE AKTIVITAET (MIKROTITERPLATTENTEST) 80
3.2.2.6.2 ZEITABHAENGIGE NEMATIZIDE WIRKUNG BEI VERSCHIEDENEN
KONZENTRATIONEN 80
3.2.2.6.3 WIRKUNG VON OMPHALOTIN IM NEMATIZIDTEST AN GURKENKEIMLINGEN 81
3.2.2.6.4 NEMATIZIDE WIRKUNG IM WASSERAGARTEST (ANTAGONISTENTEST) 82
3.2.2.6.5 NEMATIZIDE WIRKUNG IM MIGRATIONSTEST (SEPHADEXTEST) 82
3.2.2.6.6 ANTIMIKROBIELLE UND CYTOTOXISCHE WIRKUNGEN 82
3.2.2.6.7 PFLANZENKEIMUNGSTEST 82
3.2.2.6.8 HAEMOLYSETEST 83
3.2.2.6.9 WIRKUNG IN WEITEREN TESTSYSTEMEN 83
3.2.2.7 WIRKUNG VERSCHIEDENER CYCLOPEPTIDE - UND CYCLODEPSIPEPTIDE IM
MIKROTITER- PLATTENTEST AUF M. INCOGNITA 83
3.2.2.8 MEDIENVERSUCH 84
3.2.2.9 ZUFUETTERUNGSVERSUCH 88
3.2.2.10 PRODUKTION VON NEMATIZIDEN VERBINDUNGEN DURCH WEITERE STAMME
DER
GATTUNG OMPHALOTUS 97
3.2.2.10.1 FERMENTATION DER O. OLEARIUS STAEMME IM 20 I MASSSTAB 105
3.2.2.10.2 EXTRAKTION DER FRUCHTKOERPER VON O. OLEARIUS TA 93162 107
3.2.2.10.3 UEBERPRUEFUNG DER ABSCHEIDUNGEN VON O. OLEARIUS AUF NEMATIZIDE
WIRKUNG 107
3.2.2.11 UNTERSUCHUNG WEITERER STAEMME DER GATTUNG OMPHALOTUS UND
VERWANDTER
ARTEN AUF DIE BILDUNG VON OMPHALOTIN UND ILLUDIN M 107
4. DISKUSSION 109
4.1 STERILE KULTIVIERUNG VON M. INCOGNITA 111
4.2 M. INCOGNITA ALS TESTORGANISMUS UND TESTSYSTEME MIT M. INCOGNITA 111
4.3 SCREENING 114
4.4 ISOLIERUNG VON 5-PENTYL-2-FURALDEHYD UND A4990B AUS HA A4990 114
4.5 OMPHALOTUS OLEARIUS TA 90170: PRODUZENT VON OMPHALOTIN, ILLUDIN M
UND
LNDOL-3-N-METHYLPROPANAMID 117
4.5.1 BIOLOGISCHE AKTIVITAET VON OMPHALOTIN 121
4.5.2 FERMENTATION VON O. OLEARIUS TA 90170, MEDIEN- UND
ZUFUETTERUNGSVERSUCHE 125
4.6 VERGLEICH DES SEKUNDAERSTOFFWECHSELS VERSCHIEDENER O. OLEARIUS STAEMME
UND VERWANDTER GATTUNGEN 129
IMAGE 6
INHALTSVERZEICHNIS
4.7 SCHLUSSBETRACHTUNG 130
5. ZUSAMMENFASSUNG 131
6. ANHANG 132
6.1 ISOLIERUNG VON 4 NEMATIZIDEN VERBINDUNGEN AUS O. OLEARIUS TA 90170
132
6.2 METHODEN ZUR ANREICHERUNG DER NEMATIZIDEN VERBINDUNGEN 134
6.3 DETEKTIONSMOEGLICHKEITEN DER AKTIVEN FRAKTION 135
7. LITERATURVERZEICHNIS 137 |
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| spellingShingle | Mayer, Anke Bekämpfung von pflanzenparasitären Nematoden der Gattung Meloidogyne mit Pilzen und deren Toxinen Meloidogyne incognita (DE-588)4262850-7 gnd Pilze (DE-588)4046076-9 gnd Nematizid (DE-588)4239495-8 gnd |
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