Nucleinsäure-Blotting:
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Format: | Buch |
Sprache: | German English |
Veröffentlicht: |
Heidelberg [und 2 weitere]
Spektrum Akademischer Verlag
1996
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Schriftenreihe: | Labor im Fokus
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INHALT
VORWORT
'
'
EINLEITUNG
DANKSAGUNG
9
11
13
1.
WIE
ALLES
BEGANN
15
1.1
DIE
ENTWICKLUNG
VON
BLOTTING
UND
HYBRIDISIERUNGSTECHNIKEN
16
1.1.1
SOUTHERN-BLOTTING
18
1.1.2
NORTHERN-BLOTTING
20
1.1.3
WEITERE
FORTSCHRITTE
21
1.2
ZU
DIESEM
BUCH
23
1.3
WEITERE
LITERATUR
23
1.4
LABORSICHERHEIT
24
1.5
REFERENZEN
24
2.
SOUTHERN-BLOTTING
I:
ELEKTROPHORESE
DER
DNA
27
2.1
VERSCHIEDENE
QUELLEN
DER
DNA
29
2.1.1
GENOMISCHE
DNA
30
2.1.2
PLASMID-DNA
31
2.1.3
2
UND
COSMID-DNA
33
2.1.4
YAC-DNA
33
2.1.5
PCR-DNA-PRODUKTE
34
2.2
VOR
DEM
LADEN
DES
GELES
MIT
DNA
34
2.3
GELHERSTELLUNG
UND
GELELEKTROPHORESE
37
2.3.1
AGAROSE
37
2.3.2
ELEKTROPHORESEPUFFER
38
2.3.3
GIESSEN
DES
GELES
40
2.3.4
ZUSAMMENSETZEN
DES
ELEKTROPHORESETANKS
47
2.3.5
AUFTRAEGEN
DER
PROBEN
48
2.3.6
DIE
GELELEKTROPHORESE
50
2.3.7
SICHTBARMACHEN
DER
DNA
DURCH
UV-STRAHLUNG
52
2.3.8
FOTOGRAFIEREN
DES
GELES
53
2.3.9
DIE
INTERPRETATION
VON
GELEN
55
2.3.10
WAS
ALLES
BEI
EINER
ELEKTROPHORESE
SCHIEFGEHEN
KANN
58
6
NUCLEINSAEURE-BLOTTING
2.4
WEITERE
LITERATUR
59
2.5
REFERENZEN
59
3.
SOUTHERN-BLOTTING
II:
DAS
BLOTTING
61
3.1
EINSEITIG
GERICHTETES
KAPILLARBLOTTING
AUF
EINE
EINZELNE
MEMBRAN
BEI
NEUTRALEM
PH
62
3.1.1
VORBEREITEN
DES
GELES
FUER
DAS
BLOTTEN
62
3.1.2
ZUSAMMENBAU
DES
BLOTS
66
3.1.3
ABBAU
DES
BLOTS
72
3.1.4
UEBERPRUEFEN
DER
TRANSFEREFFIZIENZ
73
3.1.5
FIXIEREN
DER
DNA
AN
DIE
MEMBRAN
74
3.1.6
LAGERUNG
VON
MEMBRANEN
VOR
DER
HYBRIDISIERUNG
76
3.2
KAPILLARBLOTTING
AUF
MEHRERE
MEMBRANEN
BEI
NEUTRALEM
PH
76
3.2.1
EINSEITIG
GERICHTETES
KAPILLARBLOTTING
AUF
MEHRERE
MEMBRANEN
77
3.2.2
ZWEISEITIG
GERICHTETES
KAPILLARBLOTTING
77
3.3
KAPILLARBLOTTING
BEI
BASISCHEM
PH
78
3.4
WEITERE
BLOTTING-METHODEN
79
3.4.1
ELEKTROPHORETISCHER
TRANSFER
(ELEKTROBLOTTING)
79
3.4.2
VAKUUMBLOTTING
UND
UEBERDRUCKBLOTTING
82
3.4.3
WELCHE
BLOTTINGMETHODE
SOLLTE
MAN
ANWENDEN?
84
3.5
WEITERE
LITERATUR
84
3.6
REFERENZEN
85
4.
ELEKTROPHORESE
VON
RNA
UND
NORTHERN-BLOTTING
87
4.1
WIE
UNTERSCHEIDET
SICH
DAS
NORTHERN-BLOTTING
VOM
SOUTHERN-BLOTTING?
87.
4.2
WELCHE
INFORMATIONEN
KANN
EIN
NORTHERN-BLOT
LIEFERN?
90
4.3
VERGLEICH
DER
MENGEN
EINER
MRNA-SPEZIES
IN
VERSCHIEDENEN
ZELLTYPEN
92
4.3.1
AUFTRAEGEN
GLEICHER
RNA-MENGEN
92
4.3.2
QUANTIFIZIERUNG
96
4.4
GELELEKTROPHORESE
VON
RNA-PROBEN
98
4.4.1
GELSYSTEME
98
4.4.2
FORMALDEHYDGELE
99
4.4.3
GLYOXALGELE
105
INHALT
7
4.4.4
LAENGENMARKER
108
4.5
BLOTTEN
DES
GELES
111
4.6
WEITERE
LITERATUR
112
4.7
REFERENZEN
112
5.
DOT
UND
SLOT-BLOTTING
115
5.1
WAS
VERSTEHT
MAN
UNTER
DOT-BLOTS
UND
SLOT-BLOTS?
115
5.1.1
WARUM
SOLLTE
MAN
EINEN
DNA-DOT/SLOT-BLOT
DURCHFUEHREN?
118
5.1.2
WARUM
SOLLTE
MAN
EINEN
RNA-DOT/SLOT-BLOT
DURCHFUEHREN?
120
5.2
WIE
MAN
EINEN
DOT/SLOT-BLOT
DURCHFUEHRT
120
5.2.1
HERSTELLUNG
DER
PROBE
121
5.2.2
VORBEHANDLUNG
DER
MEMBRAN
124
5.2.3
ZUSAMMENBAU
DER
SAUGAPPARATUR
125
5.2.4
AUFTRAEGEN
DER
PROBE
127
5.2.5
BLOTTEN
127
5.2.6
VERARBEITUNG
DER
MEMBRAN
128
5.3
QUANTIFIZIERUNG
VON
DOT/SLOT-BLOTS
UND
INTERPRETATION
DER
ERGEBNISSE
129
5.4
GRENZEN
DES
DOT/SLOT-BLOTTINGS
130
5.5
WEITERE
LITERATUR
132
5.6
REFERENZEN
132
6.
PLAQUE
UND
KOLONIE-SCREENING
133
6.1
SCREENEN
VON
2-PLAQUES
MIT
HILFE
DER
BENTON-DAVIS-METHODE
134
6.1.1
DAS
PLATTIEREN
135
6.1.2
HERSTELLEN
VON
MEMBRANABDRUECKEN
145
6.1.3
BEHANDLUNG
DER
MEMBRANEN
VOR
DER
HYBRIDISIERUNG
151
6.1.4
EINE
KURZE
BEMERKUNG
UEBER
HYBRIDISIERUNGSSONDEN
153
6.1.5
ORIENTIEREN
VON
MEMBRANEN
UND
ROENTGENFILM
VOR
DER
AUTORADIOGRAPHIE
153
6.1.6
IDENTIFIZIERUNG
VON
HYBRIDISIERUNGSSIGNALEN
NACH
DER
AUTORADIOGRAPHIE
155
6.1.7
ISOLIERUNG
VON
PLAQUES
157
8
NUCLEINSAEURE-BLOTTING
6.1.8
WEITERE
SCREENING-RUNDEN
159
6.2
BESTIMMEN
DES
TITERS
EINER
2,-SUSPENSION
161
6.3
SCREENEN
VON
BAKTERIELLEN
KOLONIEN
MIT
HILFE
DER
GRUNSTEIN-HOGNESS-METHODE
161
6.3.1
PLATTIEREN
163
6.3.2
HERSTELLUNG
VON
REPLIKAMEMBRANEN
165
6.3.3
BEHANDLUNG
DER
MEMBRANEN
VOR
DER
HYBRIDISIERUNG
167
6.3.4
EINE
WEITERE
KURZE
ANMERKUNG
UEBER
HYBRIDISIERUNGSSONDEN
170
6.3.5
ORIENTIERUNG
DER
MEMBRANEN
UND
ROENTGENFILME
ZUEINANDER
VOR
DER
AUTORADIOGRAPHIE
170
6.3.6
ISOLIERUNG
VON
KOLONIEN
172
6.4
WEITERE
LITERATUR
173
6.5
REFERENZEN
173
7.
FILTER
UND
MEMBRANEN
175
7.1
DIE
VOR
UND
NACHTEILE
VON
NITROCELLULOSEFILTERN
UND
NYLONMEMBRANEN
177
7.1.1
NYLONMEMBRANEN
SIND
PHYSIKALISCH
STABIL
177
7.1.2
DNA
UND
RNA
BINDEN
KOVALENT
AN
NYLONMEMBRANEN
177
7.1.3
NYLONMEMBRANEN
HABEN
EINE
HOHE
BINDUNGSKAPAZITAET
FUER
NUCLEINSAEUREN
178
7.1.4
NYLONMEMBRANEN
SIND
HYDROPHIL
178
7.1.5
NYLONMEMBRANEN
BEHALTEN
BEI
HOHEN
TEMPERATUREN
IHRE
GROESSE
UND
FORM
178
7.1.6
NYLONMEMBRANEN
SIND
NICHT
ENTFLAMMBAR
179
7.1.7
NYLONMEMBRANEN
BENOETIGEN
KEINE
LOESUNGEN
MIT
HOHER
LONENSTAERKE,
UM
NUCLEINSAEUREN
EFFIZIENT
ZU
BINDEN
179
7.1.8
NYLONMEMBRANEN
KOENNEN
EINEN
STAERKEREN
HINTERGRUND
LIEFERN
ALS
NITROCELLULOSEFILTER,
ABER
DAS
KANN
MAN
LEICHT
BEHEBEN
179
7.1.9
NYLONMEMBRANEN
SIND
MANCHMAL
YYEINSEITIG
"
180
7.1.10
NYLONMEMBRANEN
UND
NITROCELLULOSEFILTER
MUSS
MAN
VORSICHTIG
BEHANDELN
180
7.2
WELCHE
MEMBRAN
SOLLTE
MAN
VERWENDEN?
180
7.3
REFERENZEN
181
GLOSSAR
183
INDEX
189 |
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