Die transkriptionelle Regulation eines 22 kD alpha-Zeingens:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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1995
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
EINLEITUNG
1.
1.1.
DAS
MAISENDOSPERMGEWEBE
1
1.2.
DIE
ZEINPROTEINE
2
1.3.
STRUKTUR
UND
REGULATION
DER
ZEINGENE
3
1.4.
OPAQUE-2
6
1.5.
ZIELE
DER
ARBEIT
9
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
10
2.1.
ABKUERZUNGEN
10
2.2,
MATERIAL
11
2.2.1.
BAKTERIENSTAEMME
UND
VEKTOREN
11
2.2.2.
PFLANZENMATERIAL
11
2.2.3.
HEFESTAEMME
UND
VEKTOREN
12
2.2.4.
CHEMIKALIEN
UND
ENZYME
12
2.2.5.
HAEUFIG
VERWENDETE
MEDIEN
UND
PUFFER
12
2.3.
METHODEN
15
2.3.1.
REINIGUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
15
2.3.1.1.
ISOLIERUNG
VON
PFLANZEN
DNA
15
23.1.2.
ISOLIERUNG
VON
POLY(A)*-RNA
15
2.3.1.3.
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
AUS
HEFE
16
2.3.2.
SYNTHESE
UND
REINIGUNG
VON
OLIGONUKLEOTIDEN
16
2.3.3.
IN
VITRO
AMPLIFIKATION
VON
DNA
DURCH
PCR
16
2.3.4.
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
16
2.3.4.1.
DNA-MARKIERUNG
DURCH
'
RANDOM
PRIMER
LABELING
'
16
2.3.4.2.
AUFTUELLEN
REZESSIVER
3*
ENDEN
17
2.3.5
NUKLEINSAEURE
HYBRIDISIERUNGEN
17
2.35.1.
KOLONIE-HYBRIDISIERUNG
17
2.3.5.2.
PLAQUE-HYBRIDISIERUNG
17
2.3.5.3.
SOUTHERN-BLOT
ANALYSE
18
2.3.6.
DNA-SEQUENZANALYSE
18
2.3.7.
GERICHTETE
MUTAGENESE
18
2.3.8.
TRANSIENTE
GENEXPRESSION
IN
TABAKPROTOPLASTEN
19
2.3.8.1.
ISOLIERUNG
VON
PROTOPLASTEN
19
2.3.8.2.
TRANSFEKTION
VON
PROTOPLASTEN
19
2.3.8.3.
FLUOROMETRISCHE
SS-GLUKURONIDASEAKTIVITAETSBESTIMMUNG
19
2.3.9
TRANSIENTE
EXPRESSION
MITTELS
MIKROPROJEKTIL
BOMBARDIERUNG
20
23.9.1.
PRAEPARATION
DES
PFLANZENGEWEBES
20
2.3.9.2.
PRAEPARATION
DER
DNA-PARTIKEL
UND
BALLISTISCHE
DNA-TRANSFEKTION
20
2
3.9.3.
HISTOCHEMISCHER
NACHWEIS
VON
SS-GLUKURONIDASEAKTIVITAET
21
2.3.10.
GELRETARDIERUNGSEXPERIMENTE
21
2.3.11.
TRANSFORMATION
VON
HEFEZELLEN
21
2.3.12.
COMPUTERAUSWERTUNG
22
3.
ERGEBNISSE
23
3.1.
02
ABHAENGIGE
TRANSAKTIVIERUNG
EINES
22
KD
A-ZEINPROMOTORS
23
3.1.1.
KONSTRUKTION
DER
PLASMIDE
FUER
TRANSIENTE
EXPRESSION
23
3.1.2.
TRANSIENTE
EXPRESSION
IN
TABAKMESOPHYLLPROTOPLASTEN
25
3.1.3.
BINDUNGSAFFINITAET
DER
DREI
BINDUNGSSTELLEN
ZU
02
IN
VITRO
27
3.1.3.1.
EXPRESSION
VON
02
IN
E.
COLI
27
3.1.3.2.
ERMITTLUNG
DER
BINDUNGSAFFINITAET
VON
02
ZU
DEN
BINDUNGSSTELLEN
IN
28
VITRO
3.2.
KLONIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
EINES
ENDOSPERM-MOTIV
BINDENDEN
31
PROTEINS
3.2.1.
VORBEREITUNG
DES
REPORTERPLASMIDS
32
3.2.2.
HERSTELLUNG
DER
ENDOSPERM
CDNA-BANKEN
33
3.2.3.
GENETISCHE
SELEKTION
IN
HEFE
34
3.2.4.
CHARAKTERISIERUNG
VON
MEM1
37
3.2.4.1.
SEQUENZANALYSE
37
3.2.4.2.
ANALYSE
DER
EXPRESSION
VON
MEM1
TRANSKRIPTEN
DURCH
RT-PCR
40
3.2.4.3.
SOUTHERN-BLOT
ANALYSE
41
3.2.4.4.
IDENTIFIZIERUNG
DES
5
'
ENDES
DER
MEM1
CDNA
IN
EINER
X-PHAGEN
43
GENBANK
3.2.4.5.
TRANSAKTIVIERUNG
VERSCHIEDENER
REPORTERKONSTRUKTE
DURCH
MEM1
IN
44
HEFE
3.2.4.6.
TRANSIENTE
EXPRESSION
MIT
MEM1
IN
TABAKPROTOPLASTEN
47
3.2.4.7.
AKTIVIERUNG
EINES
INTEGRIERTEN
HMW
GLUTENINPROMOTORS
IN
49
TRANSGENEN
TABAKBLAETTERN
DURCH
BALLISTISCHE
TRANSFORMATION
MIT
MEM1
4.
DISKUSSION
51
4.1.
02
ABHAENGIGE
TRANSKRIPTIONELLE
REGULATION
DES
22
KD
A
51
ZEINPROMOTORS
4.2.
KLONIERUNG
VON
MEM1
56
4.3.
CHARAKTERISIERUNG
VON
MEM1
59
4.4.
AUSBLICK
62
5.
ZUSAMMENFASSUNG
64
6.
LITERATUR
65
7.
ANHANG:
77
NUKLEOTIDSEQUENZ
DES
22
KD
A-ZEINPROMOTORS |
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