Komplementation einer Escherichia coli plsB-Mutante mit cDNAs aus Cuphea lanceolata: Charakterisierung von cDNAs und Genen für Glycerin-3-Phosphat-Dehydrogenasen
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1995
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
.
I
ABKUERZUNGEN.
IV
1.
EINLEITUNG
1.1.
PFLANZENZUECHTUNG
UND
NACHWACHSENDE
ROHSTOFFE
.
1
1.2.
BIOSYNTHESE
VON
SPEICHERLIPIDEN
.
3
1.3.
VERFAHREN
ZUR
GENISOLIERUNG.
5
1.4.
FUNKTIONELLE
KOMPLEMENTATION
ALS
METHODE
ZUR
GENISOLIERUNG.
.6
1.5.
DIE
GLYCERIN-3-PHOSPHAT
DEHYDROGENASE
(GPDH,
EC
1.1.1.8)
.7
1.6.
ZIELSETZUNG
.
9
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
2.1.
MATERIAL
.
10
2.1.1.
CHEMIKALIEN
UND
ENZYME
.
10
2.1.2.
BAKTERIENSTAEMME,
BAKTERIOPHAGEN
.
10
2.1.3.
PLASMIDE
.
11
2.1.4.
BAKTERIENMEDIEN
.
11
2.1.5.
CDNA-BANK
VON
CUPHEA
LANCEOLATA
.
12
2.1.6.
GENOMISCHE
BANK
VON
CUPHEA
LANCEOLATA
.
12
2.1.7.
PFLANZENMATERIAL
.
12
2.2.
METHODEN
.
12
2.2.1.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
12
2.2.1.1.
ALLGEMEINE
STANDARDMETHODEN
.
12
2.2.1.2.
IN
VIVO-T
RANSFORMATION
.
13
2.2.1.3.
PRAEPARATION
VON
1-PHAGEN-DNA
.
13
2.2.1.4.
PRAEPARATION
VON
GENOMISCHER
PFLANZEN-DNA
.
14
2.2.1.5.
PRAEPARATION
VON
POLY(A)
+
-RNA
.
14
2.2.1.6.
IMMOBILISIERUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
AUF
MEMBRANFIITEM
.
15
2.2.1.7.
HYBRIDISIERUNG
FILTERGEBUNDENER
NUKLEINSAEUREN
.
15
2.2.1.8.
HERSTELLUNG
RADIOAKTIVER
HYBRIDISIERUNGSSONDEN
.
15
2.2.1.9.
AUFREINIGUNG
SPEZIFISCHER
X-KLONE
AUS
DNA-BANKEN
.
15
2.2.1.10.
SYNTHETISCHE
OLIGONUKLEOTIDE
.
16
2.2.1.11.
POLYMERASEKETTENREAKTION
(PCR).
16
2.2.1.12.
DNA-SEQUENZIERUNG.
17
2.2.1.13.
AUSWERTUNG
VON
SEQUENZDATEN
.
17
2.2.1.14.
VEKTORKONSTRUKTIONEN.
17
2.2.1.14.1.
EXPRESSIONSVEKTOR
PGXG20
.
17
2.2.1.14.2.
DAS
VEKTORSYSTEM
PBLUESFI
AB
-
PLH900
.
18
2.2.1.14.3.
DIE
PROMOTOR-GUS-KONSTRUKTION
PLHGAGUS
.
19
2.2.2.
BIOCHEMISCHE
METHODEN
.
20
2.2.2.1.
BESTIMMUNG
DER
PROTEINKONZENTRATION
.
20
2.2.2.2.
GPDH-AKTIVITAETSMESSUNG
.
20
2.2.2.3.
AUFREINIGUNG
DES
GST-FUSIONSPROTEINS
AUS
E.
CO/PZELLEN
.
20
2.2.2.4.
ERZEUGUNG
VON
ANTISERUM
GEGEN
DAS
FUSIONSPROTEIN
.
21
2.2.2.5.
SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
.
21
2.2.2.6.
FAERBUNG
VON
PROTEINEN
MIT
SILBEMITRAT
.
21
2.2.2.7.
WESTERN-BLOT
.
21
2.2.2.8.
IMMUNOLOGISCHER
NACHWEIS
FILTERGEBUNDENER
PROTEINE
.
22
2.2.3.
PFLANZENARBEITEN
.
22
2.2.3.1.
TRANSFORMATION
VON
BRASSICA
NAPUS
.
22
2.2.3.2.
GLUKURONIDASE
AKTIVITAETSTEST.
22
3.
ERGEBNISSE
3.1.
KOMPLEMENTATION
EINER
G3P-AUXOTROPHE
E.
CO/AMUTANTE
DURCH
CDNAS
AUS
CUPHEA
LANCEOLATA
.
23
3.2.
IDENTIFIKATION
DER
KOMPLEMENTIERENDEN
KLONE
.
26
3.2.1
KLON
BB-14
.
26
3.2.2.
KLON
BB-20
.
29
3.3.
VERGLEICH
DER
GPDH
AUS
CUPHEA
LANCEOLATA
MIT
ANDEREN
GPDHS
.
31
3.4.
SYNTHESE
EINES
PCR-PRODUKTES
FUER
DIE
GPDH
AUS
BRASSICA
NAPUS
.
31
3.5.
CHARAKTERISIERUNG
VON
C/GPDH20
.
33
3.5.1.
GPDH-AKTIVITAETSTEST
.
33
3.5.2.
NORTHERN-BLOT-ANALYSE
MIT
CIGPDH20
ALS
SONDE
.
34
3.5.3.
SOUTHERN-BLOT-ANALYSE
MIT
C/GPDH20
ALS
SONDE
.
35
3.6.
NACHWEIS
DER
GPDH
IN
EMBRYONEN
VON
CUPHEA
LANCEOLATA
.
37
3.6.1.
SYNTHESE
EINES
FUSIONSPROTEINS
ALS
ANTIGEN
ZUR
ERZEUGUNG
EINES
ANTISERUMS
.
37
3.6.2.
WESTEM-BLOT-ANALYSE
.
38
3.6.3.
GPDH-AKTIVITAETSTEST
MIT
REIFENDEN
EMBRYONEN
.
39
3.7.
ISOLIERUNG
VON
WEITEREN
GPDH-CDNAS
.
39
3.8.
GPDH-GENE.
42
3.8.1.
ISOLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
VON
GENOMISCHEN
GPDH-KLONEN.
42
3.8.2.
SEQUENZ
UND
STRUKTURANALYSE
DER
GPDH-GENE
.
45
3.9.
KLASSIFIZIERUNG
DER
ISOLIERTEN
GPDH-CDNAS
UND
-GENE
.
50
3.10.
SPEZIFIZIERUNG
DER
GPDH-ISOFORMEN
.
52
3.10.1.
HERSTELLEN
KLASSENSPEZIFISCHER
SONDEN
.
52
3.10.2.
NORTHERN-BLOT-ANALYSEN
MIT
KLASSENSPEZIFISCHEN
SONDEN
.
52
3.10.3.
SOUTHERN-BLOT-ANALYSE
MIT
KLASSENSPEZIFISCHEN
SONDEN
.
54
3.11.
TRANSFORMATION
VON
RAPS
.
55
3.11.1.
KONSTRUKTION
EINES
BINAEREN
VEKTORSYSTEMS
.
55
3.11.2.
ANALYSE
DES
KLASSE
A
GPDH-PROMOTORS
IN
TRANSGENEM
RAPS
.57
4.
DISKUSSION
4.1.
GENISOLIERUNG
DURCH
KOMPLEMENTATION
VON
E.
CO/AMUTANTEN
.
58
4.2.
DIE
PRIMAERSTRUKTUR
DER
GPDHS
AUS
CUPHEA
LANCEOLATA
.
62
4.3.
DIE
FUNKTION
DER
GPDH
UND
DIE
SPEICHERLIPIDSYNTHESE
.
69
4.4.
PERSPEKTIVEN
.
73
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
74
6.
LITERATUR
.
76
VEROEFFENTLICHUNGEN
VON
TEILEN
DER
VORLIEGENDEN
DISSERTATION
DANKSAGUNG
ERKLAERUNG
LEBENSLAUF |
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| title_full | Komplementation einer Escherichia coli plsB-Mutante mit cDNAs aus Cuphea lanceolata Charakterisierung von cDNAs und Genen für Glycerin-3-Phosphat-Dehydrogenasen vorgelegt von Ludger Hausmann |
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| title_full_unstemmed | Komplementation einer Escherichia coli plsB-Mutante mit cDNAs aus Cuphea lanceolata Charakterisierung von cDNAs und Genen für Glycerin-3-Phosphat-Dehydrogenasen vorgelegt von Ludger Hausmann |
| title_short | Komplementation einer Escherichia coli plsB-Mutante mit cDNAs aus Cuphea lanceolata |
| title_sort | komplementation einer escherichia coli plsb mutante mit cdnas aus cuphea lanceolata charakterisierung von cdnas und genen fur glycerin 3 phosphat dehydrogenasen |
| title_sub | Charakterisierung von cDNAs und Genen für Glycerin-3-Phosphat-Dehydrogenasen |
| topic | Komplementationsklonierung (DE-588)4397295-0 gnd GDH (DE-588)4156122-3 gnd Mutante (DE-588)4256709-9 gnd Cuphea lanceolata (DE-588)4328574-0 gnd Escherichia coli (DE-588)4070959-0 gnd cDNS (DE-588)4212297-1 gnd |
| topic_facet | Komplementationsklonierung GDH Mutante Cuphea lanceolata Escherichia coli cDNS Hochschulschrift |
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