Endothel-Tumor-Zell-Interaktion am Beispiel des humanen Harnblasenkarzinoms:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1995
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I
EINLEITUNG
.
1
1
STRUKTUR
UND
FUNKTION
DER
HARNBLASENWAND
.
1
2
TUMOREN
DER
HARNBLASE
.
2
2.1
MORPHOLOGIE
UND
EPIDEMIOLOGIE
.
2
2.2
AETIOLOGIE,
PATHOGENESE
UND
PROGNOSE
.
3
2.3
THERAPIEMOEGLICHKEITEN
.
4
3
TUMOR-ENDOTHEL-INTERAKTIONEN
.
5
3.1
ANGIOGENESE
.
5
3.2
METASTASIERUNG
.
8
4
MULTIZELLULAERE
SPHAEROIDE
(MCS)
.
9
S
DIFFERENTIELLE
GENEXPRESSION
.
10
6
ZIELSETZUNG
.
11
N
MATERIAL
UND
METHODEN
.
12
1
METHODEN
.
12
1.1
METHODEN
ZUR
KULTIVIERUNG
VON
ENDOTHELZELLEN
.
12
1.1.1
ISOLATION
VON
EADOTBETEEUEEN
AUS
DER
NABELSCHNURVENE
(NACH
JAFFE
ET
AL.,
1973)
12
1.1
J
SUBKNLTIVIERANG
DER
HUVEC
.
12
1.13
KULTIVIERUNG
VON
HUVEC
AUF
MINUSBEETS
(MINUTH
ET
AL.,
1992)
-
-
.
-
.
13
1.1.4
BESCHICHTUNG
VON
KTUETARGEFLUEN
MIT
GELATINE
-
.
-
-
.
.
.
-
^
-
.
-
14
1.13
ISOLATION
VON
ENDOTHELZEUEN
AUS
DER
RINDERAUGENHOMHAUT
(NACH
GOSPODAROWICZ
ET
AL.,
1980)
-
-
-
.
-
14
1.1.6
SUNODTIVIERUNG
DER
BCEC
ZUR
BESCHICHTUNG
VON
UNTERLAGEN
MIT
EINER
BASALMEMBRAN
(GOSPODAROWICZ
ET
AL.,
1980)
-
14
1.2 METHODEN
ZUR
KULTIVIERUNG
VON
ZELLINIEN
.
15
1X1
KULTIVIERUNG
ADHLNNTER
MONOBYER
VON
J82,
RT4,
HCV29
UND
NI
.
-
.
-
15
133
WACHSTUMSFAKTOR-STI
NM
LATION.
-
.
-
.
.
-
.
-
15
133
KULTIVIERUNG
VON
MULTIZEDULIREN
SPHLROMEN
(MCS)
VON
J82,
RT4
UND
HCV29
-
-
.~1S
13.4
BESCHICHTUNG
VON
96-WEH
PLATTEN
MIT
AGAROSE
-
-
.
.16
1.3
SPHAEROID-KOKULTIVIERUNG
.
16
13.1
KOTADTUREN
VON
SPHLROIDEN
AUF
EINEM
ENDOTHELZELBNONOLAYER
-
.
-
.
-
-
.16
133
KOKULTUR
VON
SPHFLROHEN
AUF
NABELSCHNNR-YYEN-FACE
W
-PRI
PARATIONEN
(YYEN-FACE
"
KOKULTUREN)
-
-
-
.
.
-
.
-
.
-
.16
1.4
METHODEN
ZUR
VORBEREITUNG
VON
PRAEPARATEN
ZUR
WEITEREN
ANALYSE
.17
1
AL
FIXIERUNGEN
-
.
-
17
1.43
FIXIERUNG
UND
EINBETTUNG
VON
YYEN-FACE
"
KALMHNREN
.
-
.
_
.
-
R
------
,
------
,
TU
1.43
ANSTEIGENDE
/
ABSTEIGENDE
ALKOHOLNFLIE
-
.
.
.
-.
.
-
18
1.4.4
ZELLSEPARATIONMIT
BESCHICHTETEN
DYNALWD.
.
,
------
,
-----
,
-----
,,,
-
IN
1.43
BESCHICHTUNG
VON
DYNABEADSMIT
II
U
T
-LAH
M
-
.
,
----------------
,
FP
1.5
METHODEN
ZUR
MORPHOLOGISCHEN
AUSWERTUNG
VON
PRAEPARATEN
.
19
1.5.1
BEOBACHTUNG
DER
HUVEC-MCS-KOKNKUREN
19
133
QUANTIFIZIERUNG
DER
AUSBRETTUNGSGESCHWINDIGKEIT
VON
MCS
ZELLEN
AUF
VERSCHIEDENEN
.
-
-
,IO
1.53
VERARBEITUNG
VON
YYEN-FACE
"
KOKNLTUREN
-
.20
13.4
AUSWERTUNG
DER
MINUSHEETS-VERSUCHE
-
-
-
-
-
-
-
.
.
.
-
.
-
.
,20
1.6
IMMUNHISTOCHEMISCHE
METHODEN
.
20
1.6.1
IMMUNHISTOCHEMISCHE
MARKIERUNG
UND
DETEKTION
VON
ANTIGENEN
-
.
-
-
.
-
.
20
1.63
IDENTIFIKATION
VON
ZELLEN
AUS
DER
NAWHCHNARWH
---------------------
----------------------------------------------
-------------
-
11
1.63
HSMATOX^IN-EOSIN-(HE-)
FIRBONG
-
.
-
.
-
.
~~
.
22
1.7
METHODEN
FUER
MOLEKULATBIOLOGTSCHE
ANALYSEN
.
22
1.7.1
RNA-FINGERPIINTTNG
ZUR
UNTERSUCHUNG
DER
GENEXPRESSION
IN
---
----
-
-------------------
1.73
SPEZIFISCHE
POLYMERASE
KETTEN
REAKTION
(PCR,
MULLIS
AND
FALCOOOA,
1987)
-
-
.
26
1.73
RNA-LSOLADON
(CHOMCZYNSKI
UND
SACDII,
1.7.4
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
NULDEINSIURCN.,,.
-
.
-
27
1.7.5
GELELEKTROPHORESEN
-
.
-
-
.
-
.
-
-
-
-
.
-
-
.
-
.
27
1.7.6
SILBERFAERBUNG
VON
POLYACRYIAMIDGELEA
(BUDOWIE
ER
AL-,
199
L).
-
-
.
.
-
.
-
.28
1.7.7
REAMPUEFIZIENMG
VON
PCR-FRAGMENTEN
.
-
.
-
-
.
-
-
.
YY
.
28
1.73
LIGATION
VON
PLASMID-DNA
MIT
PCR-FRAGMENTEN
-
-
-
-
-
-
.
.
-
.
.
-
-
.
28
1.7.9
TRANSFORMATION
KOMPETENTER
BAKTERIEN
(COHEN
ER
AL,
1972)
-
.
-
-
-
-
-
-
.
29
1.7.10
PLASMID-DNA-MINI-PRLPARATION
(BIMBOIM
AND
DOTY,
1979;
ISH-HOROWICZ
AND
BURKE,
1981)
.
29
1.7.11
HERSTELLUNG
VON
LB-PIATTEN
-
-
.
-
.
.YYYYYY
-
3
0
1.7.12
RESTRIKFIONSVERDAU
VON
PLASMID-DNA
.
-
.
30
1.7.13
SEQUENZIERUNG
VON
DNA.
-
.
-
-
-
.
-
.
-
-
-
-
-
30
1.7.14
NORTHERN
BLOT
ANALYSE
.
-
_
-
_
30
2
MATERIAL
.
31
2.1
CHEMIKALIEN
.
31
2.2
ENZYME
UND
PROTEINE
.
32
2.3
ANTIKOERPER
.
33
2.4
NUKLEINSAEUREN
.
34
2.4.1
PRIMER
_
34
2.43
SONSTIGE
.
-
.
-
.
-
.
-
.-.
-
.
-
.
-
.
34
2.5
LOESUNGEN
UND
PUFLER
.
34
2.6
SEREN
.
37
2.7
MEDIEN
.
37
2.8
BAKTERIENSTAEMME
(MANIATIS
ET
AL.,
1982)
.
38
2.9
EUKAIYONTISCHE
ZELLEN
UND
ZELLINIEN
.
39
2.9.1
HUVEC
(ENDOTHELZELLEN
UIS
DER
HUMANEN
NABELSCHNURVEOE)
-
-
-
-
.
-
.
-
-
-
-
.
39
2.93
BCEC
(ENDOTHELZELLEN
AUS
DER
RINDERAUGENHORNHAUT)
.
-
.
-
.
-
.
.
.
-
.
-
-
.
39
2.93
J82
(O'TOOLE
ET
AL.,
1978,
MASTERS
ET
AL,
1986)
.
-
_
39
2.9.4
RT4
(RIGBY
AND
FRANKS,
1970;
MASTEN
ET
AL
,
1986)
-
-
-
-
-
-
-
_
39
2.9.5
HCV29
(BEAN
ET
AL.,
1974;
MASTEN
ET
AL.,
1986)
_
39
2.9.6
NI
HAUTFIBROBLASTEN
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
40
2.10
MATERIALIEN
FUER
DIE
ZELLKULTUR
.
40
2.11
SONSTIGES
MATERIAL
.
40
2.12
GERAETE
.
40
HI
ERGEBNISSE
.
43
1
MORPHOLOGISCHE
BEOBACHTUNGEN
.
44
1.1
KOKULTUREN
VON
SPHAEROIDEN
AUF
EINEM
ENDOTHELZELLMONOLAYER
.
44
1.1.1
J82-KOKULTUREU
------------------------------
-----------
-----------
,
,
_
_
_
_
AA
I
IIPTA-KNLMTTI.R
--------------------------------
,
-------------------------
F
. .
_
_
_
M
1.13
HCV29-KOKN*TURTN
.
45
1.1.4
QUANTIFIRIENMG
DER
MIGRATION
VON
SPHLROIDZELLEN-^.
.
-
47
1.2
KOKULTUREN
VON
SPHAEROIDEN
AUF
DER
NABELSCHNURVENE
.
50
1.3
VERSUCH
ZUR
KULTIVIERUNG
VON
HUVEC
AUF
BM
IN
PERFUSION
.
51
2
IMMUNHISTOCHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
.52
2.1
FAKTOR
VIII
(F
VHI)
UND
CYTOKERATIN
18
(CK18)
.
53
2.2
AKTIN
.
55
2.3
ENDOTHELIALES
LEUKOZYTEN
ADHAESIONSMOLEKUEL
(ELAM-1)
.57
2.4KI-67
.
58
3
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
MOLEKULAREN
WECHSELWIRKUNG
.59
3.1
VORVERSUCHE
.
60
3.1.1
RAP-PCR
MIT
ARUTRFTREN
PRIMERN
.
-
.
^.^.60
3.13
RAP-PCR
MTT
YYNESTED
"
PRIMERN
.
-
.
-
.
-
.
.
62
3.13
ANALYSE
DER
BEI
J82
GEFTMDENEN
PNLYWORJAICNWI
.
-----------
--------
,
------------
----------
,
------------------
,YYYY.41
3.2
RNA-FINGERPRINTING
AN
KOKULTUREN
.
66
3X1
VORVERSUCHE
RAR
ZENSEPARATION-.
.
.66
333
VORVERRACHE
ZUR
MISCHUNG
DER
KONTROAE-RNAI
.
.
-
.67
333
RAP-PCR
VON
KOKULTUREN
MIT
NERIED
PRIMERN
-
.
-
.
-
.
-
.68
3.3
RAP-PCR-VERSUCHE
MIT
RNA
AUS
HUMANEM
PRIMAERMATERIAL
.71
IV
DISKUSSION
.
73
1
VERWENDUNG
EINES
KOKULTUR-MODELLS
IN
VITRO
_73
1.1
BESTANDTEILE
DER
KOKULTUREN
.
73
1.2
VERSUCHE
ZUR
PERFUSIONSKULTIVIERUNG
DER
HUVEC
.
74
2
MORPHOLOGIE
UND
IMMUNHISTOCHEMIE
DER
KOKULTUREN
.
75
2.1
ADHAESION,
MIGRATION,
DEGRADATION
UND
INVASION
.
75
2.2
ENDOTHELMORPHOLOGIE,
AKTINMUSTER
UND
PROLIFERATION
.
77
3
MOLEKULARE
ANALYSE
DER
KOKULTUREN
.
79
3.1
METHODIK
.
80
3.1.1
SAMNLDIVE
HYBRIDISIERUNG
(HEDRICK
ET
AL.
1984)
.
-
.
.
.
80
3.14
DUTERENTLAL
DTSPHY
(LIANG
AND
PARDEE,
1992)
---------------------------------------------------------------------------------------------------
SO
3.13
ARBITRARILY
PRIMED
PCR
OTRNA
(RAP-PCR;
WELSH
ETAL,
1992;
MCCLELLAND
ERNT,
1994)
-------------------------------------------
81
3.2
VORVERSUCHE
ZUR
RAP-PCR
UND SILBERFAEIBUNG
.
82
3X1
RAP-PCR
MIT
EINEM
ARBTTRIREN
PRIMER
-
.
-
.
-
83
333
RAP-PCR
MIT
YYNESTED
PRIMEN
.
.
84
333
ANALYSE
DER
POLYMORPHISMEN
.
-
.
-
.
-
.
85
3X4
SCMUBFOIFERUNGEN
.
-
.
-
-
86
3.3
RAP-PCR
AN
KOKULTUREN
.
87
33.1
RAP-PCR
MH
PRIMERN
_
8
3.4
RAP-PCR
AN
PRIMAERMATERIAL
.
89
3.5
PERSPEKTIVEN
ZUR
METHODE
DER
RAP-PCR
.
90
V
ZUSAMMENFASSUNG
.
92
VI
LITERATURVERZEICHNIS.
.
94
VH
ABKUERZUNGEN
.
105 |
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| author | Maack, Stephan |
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