2D-Geldatenbank universeller, humaner Proteine und deren proteinchemische Charakterisierung:
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1
ZUS^LR^A4EHIF^LSSUHI(
.YY.YYYYYY.YYYYYY.YY.YY.YY.YYYYYYYYYY.YY.YY.YYYYYY.YY.YY.YYYY.YY.YYYY.YY.YY*YYYYYY.YY.YY.YYYYYYYYYY.YY.YYYYYY.*.
-
.
-
.YY.YY.YY.
"
.YY6
1.
Z
WEIDIMENSION
ALB
G
ELE
ALS
B
ASIS
FUER
EINE
G
ELDATENBANK
.
9
1.1.
MOEGLICHKEITEN
ZUR
IDENTIFIZIERUNG
VON
2D-SPOTS
.
14
1.2.
CHARAKTERISIERUNG
DER
PROTEINE
DER
2D-GELDATENBANK
.
18
2.
T
RAEGERFREIE
ISOELEKTRISCHE
F
OKUSSIERUNG
:
EINE
M
ETHODE
ZUR
K
ONZENTRIERUNG
GERING
EXPRIMIERTER
P
ROTEINE
.
19
3.
Z
IELSETZUNG
.23
AFATERIAL
UND
METHODEN
*YYYYYYYY**YY*YY**YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY25
1.
C
HEMIKALIEN
.
25
2.
Z
ELLKULTUR
UND
Z
ELLAUFSCHLUB
.
26
2.1.
STIMULIERUNG
DURCH HITZESCHOCK,
L-AZETIDIN
UND
DURCH
SERUM
.
26
2.2.
ZELLAUFSCHLUSS
FUER
DIE
2-DE
.
26
2.3.
EXTRAKTION
DER
LOESLICHEN
PROTEINE
.
26
2.4.
SUBZELLULARE
FRAKTIONIERUNGEN
.
26
2.4.1.
KEMPRAEPARATION
.
26
2.4.2.
SNUKLEOTIDASE-ASSAY
.
27
2.4.3.
KENUNEMBRANISOLIERUNG
.
27
2.4.4.
MITOCHONDRIENISOLIERUNG.
.
27
3.
PROTEINBESTIMMUNG
.
27
4.
Z
UCKERBESTIMMUNG
.
28
4.1.
KOHLEHYDRATDETEKTION
.
28
4.2.
GLC-NAC-DETEKTION
.
28
5.
E
LEKTROPHORESE
.
28
5.1.
SDS-POLYACRYLAMID-GELE
.
28
5.2.
2D-GELELEKTROPHORESE
(2-DE)
.
28
5.2.1.
HERSTELLEN
DER
PH-GRADIENTEN
GELE
.
29
52.2.
REHYDRIERUNG
.
29
5.2.3.
ISOELEKTRISCHE
FOKUSSIERUNG
MIT
IPG
.
29
5.2.4.
AEQUILIBRIERUNG
.
29
5.3.
TRAEGERFREIE,
KONTINUIERLICHE
ISOELEKTRISCHE
FOKUSSIERUNG
(FF-IEF).
29
5.4.
ANALYTISCHE
IEF
MIT
CARRIER
AMPHOLINEN.
.
30
5.5.
GELFTTRBUNGEN
.
30
5.5.1.
COOMASSIE
BLUE
.
30
53.2.
SILBERFLRBUNG
.
30
53.3.
PONCEAU
S-FAERBUNG
.
30
5.5.4.
BLOTTEN
VON
PROTEINEN
AUF
MEMBRANEN
.30
6.
C
OMPUTERAUSWERTUNG
DER
G
ELE
.
30
6.1.
DATENAUFNAHME
.
30
6.2.
GELVERGLEICH.
.
31
7.
E
NZYMATISCHE
S
PALTUNG
DER
P
ROTEINE
IN
DER
G
ELMATRDC
.
32
8.
A
MINOSAEURE
-A
NALYSE
.
32
81.
GASPHASENHYDOLYSE
.
32
82.
ORTHO-PHTHALDIALDEHYD-ASA
(OPA-ASA)
.
32
9.
P
ROTEINSEQUENZANALYSE
.33
10.
M
ASSENSPEKTROMETRIE
.
33
10.1.
MALDI-MS
.
33
10.2.ESI-MS.
.
33
11.
A
NTIKOERPER
P
RODUKTION
.
:.
.
34
11.1.
KOPPPLUNG
VON
PEPTIDEN
ANBSA
_
34
11.2.
IMMUNISIERUNG
VON
HUEHNERN
.
34
11.2.1.
EXTRAKTION
DER
IGG
AUS
EIDOTTER
.
34
11.3.
IMMUNISIERUNG
VON
KANINCHEN
.
35
11.3.1.
PROTEIN-A-REINIGUNG
DER
KANINCHEN
IGG
.
35
12.
I
MMUNOLOGISCHE
M
ETHODEN
.35
12.1.
ELISA
.
35
12.2.
WESTERN
BLOT
.
35
12.3.
IMMUNKOPRAEZIPITATION.
.
36
12.4.
IMMUNFLUORESZENZ
.
36
1.
2D-GELDATENBANK
UNIVERSELLER
HUMANER
PROTEINE
.
38
1.1.
AUSWAHL
DER
ZELLEN
.
38
1.2.
AUSWAHL
DES
GELSYSTEMS
.
39
1.3.
BEWEIS
DER
REPRODUZIERBARKEIT,
GENAUIGKEIT
UND
VARIABILITAETEN
.
39
1.4.
DIGITALISIERUNG
DER
GELE,
ERSTELLUNG
DER
SPOTLISTE
UND
QUANTIFIZIERUNG
.
42
1.5.
AUFBAU
DES
ALGORITHMUS
.
42
1.6.
BASISGELE
.
45
1.7.
MASTERGELE
.
46
1.8
EIGENSCHAFTEN
DER
2D-GELDATENBANK
.46
1.9.
MASTERKARTE
DER
UNIVERSELLEN
PROTEINE
.
50
2.
A
MINOSAEUREANALYTIK
.
54
3.
P
ROTEINCHEMISCHE
I
DENTIFIZIERUNG
.
57
3.
1.
N-TERMINALE
SEQUENZIERUNG
.
57
3.2.
INTERNE PEPTIDINFORMATION
NACH
ENZYMATISCHER
SPALTUNG
.
57
3.3.
IMMUNFAERBUNG
.
58
3.4.
IDENTIFIZIERUNG
DURCH
VERGLEICH
MIT
ANDEREN
2D-GELMUSTEM
.
61
SEITE
2
3.5.
ZWISCHENZUSAMMENFASSUNG
.
62
4.
M
ASSENSPEKTROMETRIE
.
63
4.1.
MALDI-MS.
.
63
4.2.
ES1-MS.
.
65
4.3.
ZWISCHENZUSAMMENFASSUNG
.
70
5.
S
UBZELLULAERE
F
RAKTIONIERUNGEN
.
71
5.1.
KERNE
.
71
5.2.
KERNMEMBRAN.
.74
5.3.
MITOCHONDRIEN
.75
5.4.
EINTRAG
IN
DIE
KARTE
DER
UNIVERSELLEN
PROTEINE
UND
LISTE
.
75
6.
P
ROTEINCHEMISCHE
C
HARAKTERISIERUNG
.77
6.1.
GLYKOPROTEINDETEKTION
.77
6.1.1.
ALLGEMEINE
GLYKOPROTEINE
.
77
6.1.2.
O-GLCNAC
.
77
6.2.
STIMULIERUNGEN
.
79
6.3.
VERGLEICH
ZWISCHEN
TRANSFORMIERTEN
UND
NICHT
TRANSFORMIERTEN
ZELLEN
.
83
7.
T
RAEOERFREIE
ISOELEKTRISCHE
F
OKUSSIERUNG
.
86
7.1.
LAUFPARAMETER.
.
87
7.2.
PH-GRADIENT
UND
REPRODUZIERBARKEIT
.
89
7.3.
EINDIMENSIONALE
ISOELEKTRISCHE
FOKUSSIERUNG
.
92
7.4.
PH
4-9
.
93
7.5.
GESPREIZTE
PH-GRADIENTEN
.
96
7.6.
ANREICHERUNG
.
96
7.7.
KOMBINATIONSMOEGLICHKEIT
MIT
RP-HPLC.
.
98
7.8.
WEITERE
ANREICHERUNG
.
98
7.9.
REINIGUNG
EINES
UNBEKANNTEN
PROTEINS
.
101
7.10.
ZWISCHENZUSAMMENFASSUNG
.
102
8.
U
NBEKANNTE
P
ROTEINE
.
103
8.1.
NR.
66
/
P-66
.,
.
103
8.1.1.
INTERNE
SEQUENZEN
.
104
8.1.2.
ISOFONNEN
.
104
8.1.3.
HUEHNER-ANTIKOERPER
.
104
8.1.4.
WESTEMBLOT-ANALYSE
.
107
8.1.5.
P-66
EIN
UNIVERSELLES
PROTEIN?
.
109
8.1.6.
SUBZELLULAERE
FRAKTIONIERUNG
.
110
8.1.7.
EXPRESSIONSLEVEL
UNTER
VERSCHIEDENEN
BEDINGUNGEN
.
111
8.1.8.
WEITERE
CHARAKTERISIERUNG
.
112
8.1.9.
TEILREINIGUNG
DURCH
TRAEGERFREIE
ISOELEKTRISCHE
FOKUSSIERUNG
IM
OKTOPUS
C.HJ.E.F.
.
112
8.2.
PROTEIN
NR.30/P-30
.
113
8.2.1.
INTERNE
SEQUENZEN
.
113
8.2.2.
POLYKLONALE
ANTIKOERPER
AUS
DEM
KANINCHEN
.
114
8.2.3.
WESTERNBLOT-ANALYSE
.
116
SEITE
3
8.2.4.
ISOFONNEN
.
117
8.2.5.
PROTEIN
P-30
EIN
UNIVERSELLES
PROTEIN?
.
118
8.2.6.
SUBZELIULAERE
FRAKTIONIERUNG
.
119
8.2.7.
VERHALTEN
UNTER
REDUZIERENDEN
UND
NICHT
REDUZIERENDEN
BEDINGUNGEN;
MIT
UND
OHNE
HARNSTOFF.
.
119
82.8.
VERHALTEN
DER
ISOFORMEN
.
120
8.2.9.
IMMUNKOPRAEZIPITATION
.
121
8.2.10.
IMMUNFLUORESZENZ
.
122
8.2.11.
REINIGUNG
DES
PROTEIN
P-30
.
122
DISKUSSION
1.
2D-GELDATENBANK
UNIVERSELLER
HUMANER
PROTEINE
.
125
1.1.
PROTEINCHEMISCHE
IDENTIFIZIERUNG
.
129
1.2.
CHARAKTERISIERUNG
.
132
2.
T
RAEGERFREIE
ISOELEKTRISCHE
F
OKUSSIERUNG
.
135
3.
U
NBEKANNTE
P
ROTEINE
.
137
AUSBLICK
ABKUERZUNGEN
144
ANHANG
_
-
_
14
1.
T
ABELLEN
DER
S
POTDATEN
DER
B
ASISGELE
UND
M
ASTERGELE
DER
EINZELNEN
Z
ELLINIEN
.
146
1.1.
JURKAT
.
146
1.1.1.
BASISGEL
.
146
1.1.2.
MASTERGEL
.
147
1.2.HU080
.
149
1.2.1.
BASISGEL
.
149
1.2.2.
MASTERGEL
.
150
1.3.1MR32
.
151
1.3.1.
BASISGEL
.
151
1.3.2.
MASTERGEL
.
153
1.4.HELA
.
154
1.4.1.
BASISGEL
.
154
1.4.2.
MASTERGEL
.
155
1.5.HEPG2
.
157
1.5.1.
BASISGEL
.
157
1.5.2.
MASTERGEL.
158
2.
Q
UANTITATIVER
V
ERGLEICH
VON
F
IBROSARKOMA
(H
T
1080)
UND
NICHT
TRANSFORMIERTEN
F
IBROBLASTEN
.
159
LITERATUR
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162
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| spelling | Burggraf, Dorothe Verfasser aut 2D-Geldatenbank universeller, humaner Proteine und deren proteinchemische Charakterisierung von Dorothe Burggraf ZweiD-Geldatenbank universeller, humaner Proteine und deren proteinchemische Charakterisierung 1995 175 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier München, Univ., Diss., 1995 Proteine (DE-588)4076388-2 gnd rswk-swf Gelelektrophorese (DE-588)4123267-7 gnd rswk-swf (DE-588)4148875-1 Datensammlung gnd-content (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Proteine (DE-588)4076388-2 s Gelelektrophorese (DE-588)4123267-7 s DE-604 DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=007067392&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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