Regulation des Transkriptionsfaktors AP-2 während zellulärer Differenzierung und Proliferation:
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1995
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INHALT
L
EINLEITUNG
------
.
------------------
.
--------
.
_
.
_
.
/
1.
DIE
REGULATION
DER
GENEXPRESSION._YY.YY.YY._.YY.YY.YY.YY.YY.YY.
M
.
1
2.
DIE
TRANSKRIPTION
IN
ENKARYONTEN
ZEUEN.
-
2
2.1
BASALE
TRANSKRIPTION
.
2
2.1.1
EINFLUB
VON
CHROMATIN
.
2
2.1.2
RNA
POLYMERASEN
.
2
2.1.3
BASALE
TRANSKRIPTIONS&KTOREN
.
3
2.2
REGULATION
DER
MRNA
TRANSKRIPTION
.
4
2.2.1
AKTIVIERUNG
DER
TRANSKRIPTION
.
5
2.2.2.
REPRESSION
DER
TRANSKRIPTION
.
6
3.
TRANSKRIPTIONSREGULATION
WAHREND
ENTWICKLUNG!
UND
DIFFERENZIERUNGSVORGAENGEN.
7
3.1.
EMBRYONALE
MUSTERBILDUNG
.
7
3.2
MUSKELDIFIERENZIERUNG
.
9
3.3
ADIPOCYTENDIFFITRENZIERUNG
.
10
4.
TRANSKRIPTIONSREGULATION
WAHREND
DER
ENTSTEHUNG
VON
TUMOREN.YYYY.YYYYYY.YY.YY.YYYYYY.YYYYYY.YY.LL
4.1
DAS
PROTO-ONKOGEN
C-MYC.
.
11
4.3
DAS
TUMORNPPRESAOR
GEN
P53
.
12
4.4
DAS
TTANOTSUPPRESSOR
GEN
RB
.
13
5.
DER
TRANSKRIPTIONSFAKTOR
AP
2
YYYYYYYYYY.YYYYYYYYYY.YYYYYYYY
14
5.1
EIGENSCHAFTEN
DES
AP-2
PROTEINS
.
14
5.2
ISOFONNEN
DES
TRANSKRIPTIONSFAKTORS
AP-2
.
15
4.3
AP-2
WAEHREND
DER
ENTWICKLUNG
UND
TUMORIGENESE
.
16
II
MATERIAL
UND
METHODEN.
_
.
_
_
19
1.
MATERIAL
_
19
1.1.
REAGENZIEN
.
19
1.2.
STANDARDS
UND
KITS
.
20
1.3.
ENZYME
UND
ANTIKOERPER
.
20
1.4.
GERAETE
.
20
1.5.
ORGANISMEN
.
22
1.6.
VEKTOREN
.
22
1.7.
MEDIEN,
ANTIBIOTIKA
UND
PUFFER
.
22
1.8.
OLIGONUKLEOTIDE
.
27
T.
METHODEN
.
JO
2.1.
SCREENEN
EINER
GENBIBLIOTHEK
.
30
2.1.1.
INDUKTION
DES
MALTOSE-REZEPTORS
VON
E.COLI
ZUR
INFEKTION
MIT
BAKTERIOPHAGEN
1
.
30
2.1.2.
INFEKTION
VON
BAKTERIEN
MIT
BAKTERIOPHAGEN
X
UND
INDUKTION
DER
GENEXPRESSION
EINER
EXPRESSION*
CDNA
BIBLIOTHEK
.
30
2.1.3.
DENATURIERUNG
UND
RENATURIERUNG
DER
CDNA
EXPRESSIONSBANK
.
31
2.1.4.
SCREENING
EINER
CDNA
BANK
MIT
COMPLEMENTSSRER
DNA
.
31
2.1.5.
PICKEN
VON
PLAQUES
.
31
2.1.5.
ISOLIERUNG UND
KLONIERUNG
DER
INSERTS
AUS
REKOMBINANTEN
LAMBDA-PHAGEN
.
32
2.2.
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
AUS
E.COLI
.
32
2.2.1.
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
IM
KLEINEM
MALLSTAB
(MINIPRAPARATION)
.
32
2.2.2.
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
IM
GROSSEN
MASSSTAB
(MAXIPRAEPARATION)
.
YY
.
33
2.3.
KLONIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
.
33
2.3.1.
LIGATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
.
33
2.3.2.
KONKATEMERISIERUNG
VON
OLIGONUKLEOTIDEN
.
33
2.3.3.
TRANSFORMATION
.
34
2.3.4.
SELEKTION
MITTELS
LAC
Z-A
KOMPLEMENTATION
.
34
2.3.5.
FILTER-SCREEN
.
35
2.4.
ORTSSPEZIFISCHE
MUTAGENESE
.
35
2.5.
ANALYSE
VON
DNA
UND
RNA
.
36
2.5.1.
SPALTUNG
VON
DNA
MIT
RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN.
36
2.5.2.
GELELEKTROPHORESE
VON
DNA
.
37
2.5.3.
POLYMERASEKETTENREAKTION
(PCR)
.
37
2.5.4.
RT-PCR.
.
38
2.5.5.
SEQUENZIERUNG
VON
PLASMID-DNA
.
38
2.5.6.
POLYACRYLAMID-HARNSTOFF
GELELEKTROPHORESE
.
39
2.5.7.
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
AGAROSEGELEN
.
39
2.5.8
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
POLYACRYLAMIDGELEN
.
40
2.5.9.
DNA
UND
RNA-KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
.
40
2.5.10.
SOUTHERN
BLOT
.
40
2.6.
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
.
41
2.6.1.
DNA-MARKIERUNG
DURCH
'RANDOM
PRIMING"
.
41
2.6.2.
DNA-MARKIERUNG
MITTELS
KLENOW
DNA-POLYMERASE
.
41
2.6.3.
REINIGUNG
RADIOAKTIV
MARKIERTER
DNA-FRAGMENTE
.
42
2.7.
FILTERHYBRIDISIERUNG
.
42
2.7.1.
VORHYBRIDISIERUNG
.
42
2.7.2.
HYBRIDISIERUNG
.
42
2.7.3.
WASCHEN
DER
FILTER
UND
MEMBRANEN
.
42
2.8.
KULTIVIERUNG
DER
ZEUINIEN
.
43
2.9.
TRANSFEKTIONSEXPERIMENTE
.
43
2.9.1.
TRANSIENTE
TRANSFEKTION
.
43
2.9.2.
CAT-ASSAY
.
44
2.10.
PRAEPARATION
VON
KCMEXTRAKTEN
.
45
2.11.
DNAASEL
PROTECTION
ASSAY
.
45
2.12.
GEL-SHIFT
ASSAYS
.
46
2.13
SOUTH
WESTERN
BLOT
.
47
2.14.
IN
VITRO
TRANSKRIPTION
.
47
2.15.
PROTEINREINIGUNG
.
48
2.15.1.
METALLIONEN
AFFINITTTSCHROMATOGRAPHIE.
.
48
2.15.2.
GLUTATHION
AFFINITAETACHROMATOGRAPHIE.
.
48
2.15.3.
HEPARIN
CHROMATOGRAPHIE
.
49
2.15.4.
DNA-AFFINITTTSREIIIIGUNG
.
49
2.15.5
WEIZENKETM
AG
GLUTININ
(WGA)
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
.
50
2.16.
IN
VITRO
WECHSELWIRKUNGSASSAY
.
50
2.17.
IMMUNPRITEIPITATION
.
50
IIL
ERGEBNISSE.
-----------------------------------------------------------
.
-------------------------------------------------------------------
53
1.
AP-2
KOMPLEXE
AN
DER
HMTIIA
BNDUNGSSTEUE._YY.YY_YY.YYYY.YY._.YY.YYYY.YYYY.J3
1.1
ANALYSE
VON
KERNEXIRAKICA
.
53
1.2
HEPARINAGAROEE
CHROMATOGRAPHIE
.
55
1.3
DNA
AFFINITAETXREINIGUNG
.
57
1.4
SPEZIFITAET
DES
GEREINIGTEN
KOMPLEXES
.
59
1.5
FUNKTIONELLE
UNTERSUCHUNG
.
59
2.
AP-2
KOMPLEXE
AN
DER
AP-2
PROMOTER
BINDUNGSSTELLE
-----
.
-
-----
.
----------
.60
2.1
ANALYSE
VON
KERNEXTRAKTEN
.
60
2.2
FUNKTIONELLE
UNTERSUCHUNGEN
.
61
2.3
KLONIERUNG
A32MUT
IN
BINDENDER
PROTEINE
.
63
2.4
BTEB
.
64
2.5
P6/P7/P8,
AP-2-ZIF
.
66
2.6
PROKARYOTISCHE
EXPRESSION
DER
MONIERTEN
PROTEINE
.
68
2.7
BINDUNGSSPEZIFITAET
.
69
2.8
WECHSELWIRKUNGEN
MIT
AP-2
.
71
2.9
GEWEBESPEZIFISCHE
EXPRESSION
.
73
3.
PROTEIN-PROTEIN
WECHSELWIRKUNG
MIT
ANDEREN
FAKTOREN
.74
3.1
AP-2
C-MYC
WECHSELWIRKUNG
.
74
3.1.1
IN
VIVO
UNTERSUCHUNGEN
.
74
3.1.2
IN
VITRO
UNTERSUCHUNGEN
.
75
3.2.
WECHSELWIRKUNGEN
MIT
ZELLULAEREN
PROTEINEN.
.
80
3.2.1
AP-2
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
.
80
4.
POSTTRANSLATIONALE
MODIFIKATIONEN
VON
AP-2
82
4.1
PHOSPHORYLIERUNG
.
82
4.2.
GLYKOSYLIERUNG
.
83
IV.
DISKUSSION
.
85
1.
DIREKTE
REGULATION
DES
AP-2
PROTEINS
YYYYYYYYYYYYYYYY87
1.1
TRANSKRIPTIONEUE
KONTROLLE
.
87
1.2
POSTTRANSLATIONALE
MODIFIKATION
.
88
2.
WECHSELWIRKUNG
MIT
ANDEREN
FAKTOREN
2.1
DER
A-PROTHYMOSIN
PROMOTER
.
89
2.2
DER
AP-2
PROMOTER
.
91
4.2.2.I.
BTEB
.
92
4.2.2.2
AP-2
ZIF
.
93
2.3
DER
HMTIIA
PROMOTER
.
95
3.
SCHLUSSFOLGERUNGEN
.YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY
YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY
YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY
YYYYYYYYYYS
YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY
YYYYYYYYYYYYYY98
V.
ZUSAMMENFASSUNG.
_
_
.
_
.
_
.
_
.
_
101
VL
LITERATURVERZEICHNIS.
-------
.
------------
.
_
.
-
.
.
103 |
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