Einsatz von Metolachlorderivaten als Immunogene bei der Entwicklung eines ELISA zum Nachweis des Herbizids Metolachlor in Wasser:
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1994
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| Beschreibung: | Heidelberg, Univ., Diss., 1995 (Nicht für den Austausch) |
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
1 EINLEITUNG
1.1 PROBLEMATIK DER PFLANZENSCHUTZMITTEL FUER DAS TRINKWASSER 1
1.2 ANALYTIK VON PFLANZENSCHUTZMITTELN IM TRINKWASSER 2
1.3 IMMUNOASSAYS ALS ALTERNATIVE ZUR KLASSISCHEN ANALYTIK 2
1.4 METOLACHLOR ALS UMWELTRELEVANTES HERBIZID 3
1. S ZIELSETZUNG DER DISSERTATION 5
2 MATERIALIEN UND METHODEN
2.1 MATERIALIEN 6
2.1.1 CHEMIKALIEN 6
2.1.1.1 CHEMIKALIEN ZUR SYNTHESE DER IMMUNOGENE 6
2.1.1.2 CHEMIKALIEN FUER DEN ELISA UND FUER DIE IMMUNISIERUNG 7
2.1.2 PESTIZIDE ZUR ERMITTLUNG DER KREUZREAKTIVITAET 7
2.1.3 LOESUNGSMITTEL 8
2.1.4 SALZE, SAEUREN UND LAUGEN 8
2.1.5 PUFFER UND SONSTIGE LOESUNGEN 10
2.1.6 GERAETE UND ARBEITSMATERIAL 14
2.1.7 VERSUCHSTIERE 16
2.2 METHODEN 17
2.2.1 SYNTHESE DER IMMUNOGENE 17
2.2.1.1 SYNTHESE DES METOLACHLOR-AHT-BSA-KONJUGATS 18
2.2.1.2 SYNTHESE DES METOLACHLOR-AHS-BSA-KONJUGATS 19
I
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2.2.1.3 SYNTHESE DES METOLACHLOR-ABS-BSA-KONJUGATS 21
2.2.1.4 KOPPLUNG VON METOLACHLORDERIVATEN MIT VERAENDERTER SEITENKETTE AN
BSA 22
2.2.1.4.1 SYNTHESE DES METOLAADIPINSAEURE-BSA-KONJUGATS 23
2.2.1.4.2 SYNTHESE DES METOLABEMSTEINSAEURE-BSA-KONJUGATS 24
2.2.1.4.3 SYNTHESE DES METOLACHLORSAEURE-BSA-KONJUGATS 25
2.2.2 KONZENTRATIONSBESTIMMUNG DER KONJUGATLOESUNGEN 26
2.2.2.1 NEPHELOMETRIE 27
2.2.2.2 BRADFORD-PROTEINKONZENTRATIONSBESTIMMUNG 27
2.2.3 BESTIMMUNG DER EPITOPDICHTE 28
2.2.4 IMMUNISIERUNG
30
2.2.4.1 IMMUNISIERUNGSSCHEMA 30
2.2.4.2 ZUBEREITUNG DER INJEKTIONSLOESUNG 32
2.2.4.3 INTRAMUSKULAERE INJEKTION 32
2.2.5 BLUTENTNAHME UND SERUMAUFBEREITUNG 33
2.2.5.1 BLUTENTNAHME 33
2.2.5.2 SERUMGEWINNUNG 34
2.2.6 PRINZIP UND DURCHFUEHRUNG DER IMMUNOASSAYS 35
2.2.6.1 PRINZIP DER INDIREKTEN ENZYMIMMUN OASSAYS 35
2.2.6.2 BESCHICHTUNG DER MIKROTITERPLATTE MIT COATING-ANTIGEN 36
2.2.6.3 NICHT-KOMPETETIVER INDIREKTER ENZYMIMMUNOASSAY ZUR BESTIMMUNG
DES ANTIKOERPERTITERS 37
2.2.6.3.1 VERDUENNUNG DES ANTISERUMS UND BESCHICHTUNG DER PLATTE 37
2.2.6.3.2 BESCHICHTUNG MIT SEKUNDAERANTIKOERPER 38
2.2.6.3.3 SUBSTRATUMSETZUNG UND KIOTOMETRIE 38
2.2.6.3.4 GRAPHISCHE AUSWERTUNG 39
2.2.6.4 KOMPETETIVER INDIREKTER ENZYMIMMUNOASSAY 41
2.2.6.4.1 BESCHICHTUNG MIT STANDARD UND ANTISERUM 41
2.2.6.4.2 BESCHICHTUNG MIT SEKUNDAERANTIKOERPER, SUBSTRATUMSETZUNG UND
PHOTOMETRIE 42
2.2.6.4.3 GRAPHISCHE ERSTELLUNG EINER EICHKURVE 42
2.2.6.4.4 ERFASSUNGSGRENZE UND UNTERGRENZE DER BESTIMMBARKEIT 43
2.2.6.4.5 TESTMITTELPUNKT 45
2.2.6.5 KONZENTRATIONSBESTIMMUNG IN UNBEKANNTEN PROBEN 47
2.2.6.6 AUSREISSERTEST VON DEAN UND DIXON 49
2.2.7 KREUZREAKTIVITAET 50
2.2.8 REPRODUZIERBARKEIT 53
II
2.2.9 WIEDEIFINDUNGSRATE 54
3 ERGEBNISSE
3.1 IMMUNISIERUNG MIT AHT-, ABS-UND AHS-KONJUGATEN 56
3.1.1 KONTROLLE DER ERFOLGREICHEN KONJUGATSYNTHESE 56
3.1.2 IMMUNISIERUNGEN UND TITERVERLAEUFE 58
3.1.3 SPEZIFITAETSVERLAEUFE 62
3.1.4 KREUZREAKTIVITAET 63
3.1.5 REPRODUZIERBARKEIT UND WIEDERFINDUNG 64
3.2 IMMUNISIERUNG MIT MAS(I)- UND MBS(I)-KONJUGATEN 65
3.2.1 KONZENTRATIONSBESTIMMUNG 66
3.2.2 IMMUNISIERUNGEN UND TITERVERLAUF 66
3.3 IMMUNISIERUNG MIT MAS(UE)-, MBS(HK MSR- UND AHT-
KONJUGATEN 67
3.3.1 BESTIMMUNG DER KONJUGAT-KONZENTRATIONEN UND DER EPITOPDICHTEN 67
3.3.2 IMMUNISIERUNGEN UND TITERVERLAEUFE 69
3.3.3 SPEZIFITAETSVERLAEUFE 70
3.3.4 KIEUREAKUEVITAET 73
3.3.5 REPRODUZIERBARKEIT UND WIEDERFINDUNG 74
4 DISKUSSION
4.1 EINFLUSS DES IMMUNOGENS AUF DEN IMMUNISIERUNGSERFOLG 78
4.1.1 EINFLUSS DES HAPTENS UND DES SPACERS 78
4.1.2 WAHL DES CARRIERPROTEINS 81
4.2 ANTIKOERPERGEWINNUNG 82
4.2.1 TIERWAHL 82
4.2.2 IMMUNISIERUNGSSCHEMA 82
4.2.2.1 ERSTIMMUNISIERUNG UND BOOSTERUNG 83
III
4.2.2.2 WAHL DES ADJUVANS 84
4.2.2.3 WAHL DER ANTIGENMENGE 84
4.3 AUSWERTUNG DER ANTISEREN 85
4.4 POLYKLONALE VERSUS MONOKLONALE ANTIKOERPER 86
4.5 VON DER OLIGOSPEZIFITAET ZUR MONOSPEZIFITAET 87
4.6 BEDEUTUNG IMMUNOLOGISCHER METHODEN FUER DIE UMWELTANALYTIK 90
5 ZUSAMMENFASSUNG 93
6 LITERATURVERZEICHNIS 95
ANHANG
: LEBENSLAUF
DANKSAGUNGEN
IV |
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