Immungenetische Analysen von Polymorphismen der Antigentransporter bei Typ 1 Diabetes-mellitus- und Morbus Basedow-Patienten:
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1994
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VII
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
XIII
1.
EINLEITUNG
1
1.1
EINFUEHRUNG
IN
DIE
THEMATIK
1
12
FRAGESTELLUNG
7
2.
PATIENTEN,
MATERIALIEN
UND
METHODEN
9
2.1
PATIENTEN
UND
KONTROLLPERSONEN
9
22
CHEMIKALIEN
10
23
ENZYME
12
2.4
GERAETE
UND
ARBEITSMATERIALIEN
13
23
PUFFER
UND
LOESUNGEN
14
2.6
EXTRAKTION
VON
DNA
18
2.6.1
EXTRAKTION
GENOMISCHER
DNA
AUS
VOLLBLUT
18
2.6.2
EXTRAKTION
VON
DNA
AUS
AGAROSE
19
2.62.1
DNA-EXTRAKTION
AUS
AGAROSE
NACH
DER
"CLEAN-A-GENE"
METHODE
19
2.62.2
DNA-EXTRAKTION
AUS
"LOW
MELTING
POINT'-AGAROSE
20
2.62.3
DNA-EXTRAKTION
AUS
AGAROSE
MIT
HILFE
VON
GLASWOLLE
20
2.OE.2.4
ELEKTROELUTION
VON
DNA
AUS
AGAROSE
21
2.62.5
DNA-EXTRAKTION
AUS
"LOW
MELTING
POINT"
(LMP)-AGAROSE
MITTELS
NACS
PREPACYY-SAEULEN
21
2.62.6
DNA-EXTRAKTION
AUS
AGAROSE
NACH
DER
O
'
RAHILLY-METHODE
22
2.62.7
DNA-EXTRAKTION
AUS
AGAROSE
MIT
PHENOL
UND
CHLOROFORM
22
2.62.8
LOESEN
VON
PHENOL
23
VIII
2.7
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
DNA
23
2.7.1
PHOTOMETRISCHE
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
23
2.7.1.1
PHOTOMETRISCHE
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
GENOMISCHER
DNA
23
2.7.1.2
PHOTOMETRISCHE
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
OLIGO
NUKLEOTIDEN
24
2.7.2
GELELEKTROPHORETISCHE
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
24
2.8
POLYMERASE
CHAIN
REACTION
(PCR)
26
2.8.1
PCR
ZUR
AMPLIFIKATION
DER
TAP-GENPOLYMORPHISMEN
AUS
GENOMISCHER
DNA
26
2.8.2
PCR
ZUR
AMPLIFIKATION
EINES
TNFSS-GENPOLYMORPHISMUS
'
AUS
GENOMISCHER
DNA
27
2.8.3
PCR
ZUR
AMPLIFIKATION
EINES
HLA
DRA-GENPOLYMORPHISMUS
'
AUS
GENOMISCHER
DNA
29
2.8.4
PCR
ZUR
AMPLIFIKATION
EINES
HLA
DQAL-GENPOLYMORPHISMUS
'
AUS
GENOMISCHER
DNA
29
2.8.5
PCR
ZUR
AMPLIFIKATION
EINES
HLA
DQBL-GENPOLYMORPHISMUS
'
AUS
GENOMISCHER
DNA
30
2.8.6
PCR
ZUR
MARKIERUNG
VON
SONDEN
31
2.8.6.1
MARKIERUNG
MIT
DIGDUTP
(BOEHRINGER)
32
2.8.6.2
MARKIERUNG
MIT
FLDUTP
(AMERSHAM)
33
2.8.7
ARMS
(AMPLIFICATION
REFRACTORY
MUTATION
SYSTEM-)
PCR
34
2.9
RESTRIKTIONSANALYSEN
ALS TYPISIERUNG
MITTELS
RFLP
36
2.9.1
RESTRIKTIONSVERDAU
GENOMISCHER
DNA
FUER
SOUTHEM-BLOTS
36
2.9.1.1
RESTRIKTIONSVERDAU
MIT
DEM
ENZYM
PVU
II
36
2.9.1.2
RESTRIKTIONSVERDAU
MIT
DEM
ENZYM
TAQ
I
36
2.9.1.3
RESTRIKTIONSVERDAU
MIT
DEM
ENZYM
ECO
RI
37
2.9.1.4
GELELEKTROPHORETISCHE
AUFTRENNUNG
DER
GESCHNITTENEN
DNA
37
2.9.2
RESTRIKTIONSANALYSEN
VON
AMPLIFIZIERTER
DNA
(AFLP)
39
2.9.2.1
TYPISIERUNG
DES
TNFSS-GENS
MITTELS
RFLP
39
2.9.2.2
TYPISIERUNG
DES
HLA
DRA-GENS
MITTELS
RFLP
40
2.10
DNA-TRANSFER
AUF
NYLONMEMBRANEN
41
2.10.1
DNA-TRANSFER
AUF
NYLONMEMBRANEN
MITTELS
DOT-BLOT
41
2.10.2
DNA-TRANSFER
AUF
NYLONMEMBRANEN
MITTELS
SOUTHERN-BLOT
41
IX
2.11
HYBRIDISIERUNG
VON
DOT-BLOTS
NACH
DEM
"S
'
-THIOL
OLIGOLABELLING
AND
DETECTION
SYSTEM"
(AMERSHAM)
42
2.11.1
ENDGRUPPENABSPALTUNG
AM
OLIGO
(DETRITYLIEREN)
44
2.11.2
HERSTELLUNG
VON
SEPHADEX
G
25
/
G
50
SAEULEN
45
2.11.3
ENTSALZEN
DES
OLIGOS
UND
MARKIERUNG
45
2.11.4
HYBRIDISIERUNG
45
2.11.5
ENTFERNEN
UEBERSCHUESSIGER
UND
UNSPEZIFISCH
GEBUNDENER
SONDENMOLEKUELE
46
2.11.6
DETEKTION
UND
EXPOSITION
49
2.11.7
DEHYBRIDISIERUNG
49
2.12
HYBRIDISIERUNG
VON SOUTHEM-BLOTS
49
2.12.1
HYBRIDISIERUNG
NACH
DEM
"ECL
GENE
DETECTION
SYSTEM
"
(AMERSHAM)
50
2.12.1.1
MARKIERUNG
DER
DNA
50
2.12.1.2
HYBRIDISIERUNG
50
2.12.1.3
ENTFERNEN
UEBERSCHUESSIGER
UND
UNSPEZIFISCH
GEBUNDENER
SONDENMOLEKUELE
51
2.12.1.4
DETEKTION
UND
EXPOSITION
51
2.12.1.5
DEHYBRIDISIERUNG
51
2.12.2
HYBRIDISIERUNG
NACH
DEM
"RANDOM
PRIME
LABELLING
AND
DETECTION
SYSTEM"
VON
AMERSHAM
52
2.12.2.1
MARKIERUNG
DER
DNA
52
2.12.2.2
HYBRIDISIERUNG
52
2.12.2.3
ENTFERNEN
UEBERSCHUESSIGER
SONDENMOLEKUELE
UND
ANHEFTEN
DES
ANTIKOERPERS
53
2.12.2.4
DETEKTION
UND
EXPOSITION
54
2.12.2.5
DEHYBRIDISIERUNG
54
2.12.2.6
KONTROLLE
DER
MARKIERUNGSREAKTION
54
2.12.3
HYBRIDISIERUNG
NACH
DEM
"ECL
PROBE-AMP
REAGENTS"
KIT
MIT
FLDUTP
(AMERSHAM)
55
2.12.3.1
HYBRIDISIERUNG
55
2.12.3.2
ENTFERNEN
UEBERSCHUESSIGER
SONDENMOLEKUELE
UND
ANHEFTEN
DES
ANTIKOERPERS
56
2.12.3.3
DETEKTION
UND
EXPOSITION
57
2.12.3.4
DEHYBRIDISIERUNG
57
X
2.12.4
HYBRIDISIERUNG
NACH
DEM
"DIGOXIGENIN
LUMINESCENT
DETECTION"
KIT
(BOEHRINGER)
57
2.12.4.1
MARKIERUNG
NACH
DER
"RANDOM-PRIMED"
METHODE
57
2.12.4.2
MARKIERUNG
MIT
DIGDUTP
MITTELS
PCR
58
2.12.4.3
HYBRIDISIERUNG
NACH
DER
STANDARDMETHODE
58
2.12.4.4
HYBRIDISIERUNG
IN
HOCHKONZENTRIERTER
SDS-LOESUNG
59
2.12.4.5
HYBRIDISIERUNG
OHNE
FORMAMID
59
2.12.4.6
CHEMILUMINESZENZ-NACHWEIS
NACH
DER
STANDARDMETHODE
60
2.12.4.7
CHEMILUMINESZENZ-NACHWEIS
NACH
DER
HYBRIDISIERUNG
IN
HOCHKONZENTRIERTER
SDS-LOESUNG
61
2.12.4.8
CHEMILUMINESZENZ-NACHWEIS
NACH
DER
HYBRIDISIERUNG
OHNE
FORMAMID
61
2.12.4.9
DEHYBRIDISIERUNG
61
2.12.4.10
DEIONISIEREN
VON
FORMAMID
61
2.12.4.11
HERSTELLUNG
VON
NATRIUMPHOSPHAT-PUFFER
62
2.12.5
HYBRIDISIERUNG
NACH
DEN
"RANDOM
PRIMED
IMAGES"
UND
"GENE
IMAGES"
KITS
(USB)
62
2.12.5.1
MARKIERUNG
DER
DNA
62
2.12.5.2
HYBRIDISIERUNG
63
2.12.5.3
ENTFERNEN
UEBERSCHUESSIGER
SONDENMOLEKUELE
64
2.12.5.4
CHEMILUMINESZENZ-NACHWEIS
64
2.12.5.5
DEHYBRIDISIERUNG
64
2.13
SSCP-ANALYSE
65
2.13.1
VORBEREITUNG
DER
GLASPLATTEN
65
2.13.2
GIESSEN
DES
POLYACRYLAMIDGELS
66
2.13.3
VORBEREITUNG
DER
DNA
UND
PROBENAUFTRAG
66
2.13.4
GELLAUF
67
2.13.5
FAERBUNG,
ENTWICKLUNG
UND
FIXIERUNG
DES
POLYACRYLAMIDGELS
67
2.13.6
AUSWERTUNG
EINES
SSCP-GELS
BEZUEGLICH
DER
TAP-POLY
MORPHISMEN
68
2.14
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
69
XI
3.
ERGEBNISSE
71
3.1
TYP
1
DIABETES
MELLITUS
71
3.1.1
TYPISIERUNG
DES
TNF
GENPOLYMORPHISMUS
'
MITTELS
RFLP
71
3.1.2
HLA
KLASSE
II-TYPISIERUNG
73
3.1.2.1
DRA
GENPOLYMORPHISMUS
73
3.1.2.2
DQA1
GENPOLYMORPHISMUS
74
3.1.2.3
DQB1
GENPOLYMORPHISMUS
78
3.1.3
ANALYSE
DER
TAP-GENVARIANTEN
82
3.1.3.1
HAEUFIGKEITSVERTEILUNG
DER
NUKLEOTIDVARIANTEN
87
3.1.3.2
HAEUFIGKEITSVERTEILUNG
DER
ALLELE
90
3.1.3.3
KOMBINATION
DER
ALLELE
93
3.1.3.4
PRUEFUNG
AUF
VORLIEGEN
DES
HARDY-WEINBERG-GLEICHGEWICHTS
96
3.1.4
ERWEITERTE
ANALYSE
DER
TAP2-GENPOLYMORPHISMEN
97
3.1.4.1
HAEUFIGKEITSVERTEILUNG
DER
ALLELE
98
3.1.4.2
KOMBINATION
DER
ALLELE
101
3.1.5
KOMBINATION
DER
DQ-ALLELE
MIT
TAP-AMINOSAEUREN
UND
-ALLELEN
103
3.1.5.1
KOMBINATION
VON
DQAL-ALLELEN
UND
TAP-AMINOSAEUREN
104
3.1.5.2
KOMBINATION
VON
DQA1
UND
TAPL-ALLELEN
110
3.1.5.3
KOMBINATION
VON
DQA1
UND
TAP2-ALLELEN
113
3.1.5.4
KOMBINATION
VON
DQA1
UND
ERWEITERTEN
TAP2-ALLELEN
117
3.1.5.5
KOMBINATION
VON
DQBL-ALLELEN
UND
TAP-AMINOSAEUREN
121
3.1.5.6
KOMBINATION
VON
DQB1
UND
TAPL-ALLELEN
127
3.1.5.7
KOMBINATION
VON
DQB1
UND
TAP2-ALLELEN
132
3.1.5.8
KOMBINATION
VON
DQB1
UND
ERWEITERTEN
TAP2-ALLELEN
139
3.1.5
ANALYSE
VON
GENPOLYMORPHISMEN
IN
FAMILIEN
145
3.2
MORBUS
BASEDOW
159
3.2.1
TYPISIERUNG
DES
TNF
GENPOLYMORPHISMUS
'
MITTELS
RFLP
159
3.2.2
HLA
KLASSE
II-TYPISIERUNG
160
3.2.2.1
DQA1
GENPOLYMORPHISMUS
160
3.2.2.2DQB1
GENPOLYMORPHISMUS
162
3.2.3
ANALYSE
DER
TAP-GENVARIANTEN
165
3.2.3.1
HAEUFIGKEITSVERTEILUNG
DER
NUKLEOTIDVARIANTEN
167
3.2.3.2
HAEUFIGKEITSVERTEILUNG
DER
ALLELE
169
3.2.3.3
KOMBINATION
DER
ALLELE
172
3.2.3.4
PRUEFUNG
AUF
VORLIEGEN
DES
HARDY-WEINBERG-GLEICHGEWICHTS
175
XII
3.2.4
ERWEITERTE
ANALYSE
DER
TAP2-GENPOLYMORPHISMEN
175
3.2.4.1
HAEUFIGKEITSVERTEILUNG
DER
ALLELE
175
3.2.4.2
KOMBINATION
DER
ALLELE
178
3.2.5
KOMBINATION
DER
DQ-ALLELE
MIT
TAP-AMINOSAEUREN
UND
ALLELEN
179
3.2.5.1
KOMBINATION
VON
DQAL-ALLELEN
UND
TAP-AMINOSAEUREN
179
3.2.5.2
KOMBINATION
VON
DQA1
UND
TAPL-ALLELEN
183
3.2.5.3
KOMBINATION
VON
DQA1
UND
TAP2-ALLELEN
186
3.2.5.4
KOMBINATION
VON
DQA1
UND
ERWEITERTEN
TAP2-ALLELEN
189
3.2.5.5
KOMBINATION
VON
DQBL-ALLELEN
UND
TAP-AMINOSAEUREN
192
3.2.5.6
KOMBINATION
VON
DQB1
UND
TAPL-ALLELEN
197
3.2.5.7
KOMBINATION
VON
DQB1
UND
TAP2-ALLELEN
202
3.2.5.8
KOMBINATION
VON
DQB1
UND
ERWEITERTEN
TAP2-ALLELEN
207
3.3
ZUSAMMENFASSUNG
DER
ERGEBNISSE
212
4.
DISKUSSION
214
4.1
TNF-GENE
215
4.2
HLA
DRA-GEN
218
4.3
HLA
DQ-GENE
221
4.4
TAP-GENE
226
4.5
SEGREGATIONSANALYSEN
244
5.
ZUSAMMENFASSUNG
247
6.
LITERATUR
250 |
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| spelling | Nicolay, Annette Verfasser aut Immungenetische Analysen von Polymorphismen der Antigentransporter bei Typ 1 Diabetes-mellitus- und Morbus Basedow-Patienten vorgelegt von Annette Nicolay 1994 XVI, 277 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Frankfurt (Main), Univ., Diss., 1995 (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=007045062&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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