Struktur- und Funktionsanalyse der ACP1-Genfamilie aus Cuphea lanceolata:
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1995
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INHALTSVERZEICHNIS
I.
EINLEITUNG
.
1
1.1
NACHWACHSENDE
ROHSTOFFE
.
2
I.2
FETTSAEURE
UND
LIPIDSYNTHESE
IN
PFLANZEN
.
4
I.3
DAS
ACYL
CARRIER
PROTEIN
(ACP)
.
6
I.4
ZIELSETZUNG
DER
VORLIEGENDEN
ARBEIT
.
9
II.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
11
11.1
CHEMIKALIEN,
ENZYME
UND
RADIOISOTOPE
.
12
II.2
MEDIEN
.
12
II.3
BAKTERIENSTAEMME,
BAKTERIOPHAGEN
UND
PLASMIDE
.
13
11.3.1
BAKTERIENSTAEMME
.
13
II.
3.2
BAKTERIOPHAGEN
.
14
II.
3.3
PLASMIDE
.
14
II.4
PFLANZENMATERIAL
.
14
II.5
ALLGEMEINE
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
15
11.5.1
ENZYMATISCHE
DNA-MODIFIKATION
.
15
II.5.2
PRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
.
15
II.
5.3
TRANSFORMATION
KOMPETENTER
E
COLI
ZELLEN
.
16
II.5.4
DNA
IN
AGAROSEGELEN:
AUFTRENNUNG
UND
ISOLATION
.
16
II.5.5
HERSTELLUNG
VON
RADIOAKTIV
MARKIERTEN
HYBRIDISIERUNGSSONDEN
.
16
II.
6
OLIGONUKLEOTIDE
.
16
11.6.1
AUFBEREITUNG
VON
OLIGONUKLEOTIDEN
.
16
II.6.2
LISTE
DER
VERWENDETEN
OLIGONUKLEOTIDE
.
17
II.
7
DNA-SEQUENZANALYSE
.
17
II.
8
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
.
17
II.9
ISOLATION
VON
CDNA-KLONEN
.
18
11.10
ISOLATION
VON
GENOMISCHER
DNA
AUS
C.
LANCEOLATA
UND
SOUTHERN
BLOT
.19
11.11
ARBEITEN
MIT
RNA
AUS
C.
LANCEOLATA
.
19
11.11.1
ISOLATION
VON
CESAMT-RNA
.
20
11.11.2
AUFREINIGUNG
VON
POLY(A)+
RNA
.
20
11.11.3
NORTHERN-ANALYSE
.
20
11.12
SYNTHESE
UND
NACHWEIS
VON
REKOMBINANTEM
ACP
.
21
11.12.1
AUFARBEITUNG
DES
REKOMBINANTEN
PROTEINS
AUS
E
CO//-ZELLEN
.
21
INHALTSVERZEICHNIS
H.12.2
SPALTUNG
DES
FUSIONSPROTEINS
.
22
11.12.3
EINDIMENSIONALE
SDS-POLYACRYLAMIDGELE
.
22
11.12.4
ZWEIDIMENSIONALE
POLYACRYLAMIDGELE
.
23
11.12.5
SILBERFAERBUNG
VON
PROTEINEN
.
.
23
11.12.6
.WESTERN
BLOT'
UND
IMMUNOFAERBUNG
.
23
11.13
FUNKTIONSNACHWEIS
FUER
REKOMBINANTES
ACP
.
25
11.13.1
ENZYMATISCHE
SYNTHESE
VON
ACYL-ACPS
UND
FILTERPAPIERTEST
.
25
11.13.2
IN
V/TRO-REKONSTITUTION
DER
FETTSAEUREBIOSYNTHESE
.
25
11.14
ERSTELLEN
EINER
GENOMISCHEN
BANK
VON
C.
LANCEOLATA
.
26
11.15
ARBEITEN
MIT
ACP-GENEN.
27
11.16
TRANSFORMATION
VON
RAPS
UND
ANALYSE
DER
TRANSGENEN
PFLANZEN
.
28
11.16.1
TRANSFORMATION
.
28
11.16.2
UEBERPRUEFEN
DER
F
1
-GENERATION
AUF
KANAMYCINRESISTENZ
.
28
11.16.3
UEBERPRUEFEN
DER
TRANSGENEN
PFLANZEN
AUF
SS-GLUCURONIDASE-AKTIVITAET.28
11.17
SSCP-GELE
.
29
11.17.1
AUSWAHL
VON
OLIGONUKLEOTIDEN
.
29
11.17.2
PROBENVORBEREITUNG
.
29
11.17.3
ELEKTROPHORETISCHE
AUFTRENNUNG
.
29
N.
ERGEBNISSE
.
31
11.1
SYNTHESE
EINER
SPEZIFISCHEN
HYBRIDISIERUNGSSONDE
FUER
CDNAS
UND
GENE
VON
ACYL
CARRIER
PROTEINEN
(ACPS)
.
32
III.2
ISOLATION
UND
KLASSIFIZIERUNG
VON
ACP-CDNAS
AUS
C.
LANCEOLATA
.
33
III.3
MOLEKULARBIOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
VON
VERTRETERN
DER
ACP-SUBKLASSEN
.
.35
111.3.1
ANALYSE
UND
VERGLEICH
DER
ISOLIERTEN
ACP-SEQUENZEN
.
35
III.
3.2
KOPIENZAHL
DER
ACP-GENE
IM
C.
LANCEOLATA
GENOM
.
42
III.
3.3
EXPRESSIONSMUSTER
IN
VERSCHIEDENEN
PFLANZLICHEN
GEWEBEN
.
43
III.4
BIOCHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
VON
REKOMBINANTEM
ACP
.
46
111.4.1
HERSTELLEN
EINES
EXPRESSIONSSYSTEMS
FUER
REKOMBINANTES
ACP
.
47
III.4.2
AUFREINIGUNG
VON
REKOMBINANTEM
ACP
UND
HERSTELLUNG
EINES
ANTISERUMS
.
47
III.4.3
VERGLEICH
MIT
AUS
C.
LANCEOLATA
ISOLIERTEM
ACP
.
48
INHALTSVERZEICHNIS
111.4.4
FUNKTIONSANALYSE
VON
REKOMBINANTEM
ACP
.
50
111.5
ISOLATION
VON
ACP-GENEN
AUS
C.
LANCEOLATA
.
51
111.5.1
ERSTELLEN
EINER
GENOMISCHEN
BANK
VON
C.
LANCEOLATA
.
52
III.
5.2
.SREENING'
DER
GENOMISCHEN
BANK
UND
KLASSIFIZIERUNG
ISOLIERTER
ACP-KLONE.
52
III.5.3
RESTRIKTIONSKARTIERUNG
EINES
ACP-CENS
.
53
III.5.4
SEQUENZANALYSE
DES
ACP-CENS/C/7,
-CL-G1
.
55
III.6
ACP-PROMOTOR-ANALYSE
.
58
III.
6.1
KLONIERUNG
EINES
ACP-PROMOTORFRAGMENTES
IN
DEN
TRANSFORMATIONSVEKTOR
PRE2
.
59
II1.6.2
TRANSFORMATION
VON
RAPS
MIT
AGROBACTERIUM
TUMEFACIENS
.
59
III.6.3
UNTERSUCHUNG
DER
TRANSGENEN
RAPSPFLANZEN
.
60
III.7
CHROMOSOMEN-KARTIERUNG
ZWEIER
ACP-GENE
.
60
111.7.1
PRINZIP
DER
PCR-SSCP-ANALYSE
.
61
III.7.2
AUSWAHL
GEEIGNETER
.PRIMER'
ZUR
PCR-SSCP-ANALYSE
.
62
III.
7.3
POLYACRYLAMIDGEL
ZUR
DETEKTION
DER
SSCPS
.
63
LIL.7.4
COMPUTERGESTUETZTE
AUSWERTUNG
DER
SSCP-GELE
.
64
IV.
DISKUSSION
.
65
V.
ZUSAMMENFASSUNG
.
77
VI.
LITERATURVERZEICHNIS
_
_
_
.81 |
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| topic_facet | Sequenzanalyse Chemie Genfamilie Fettsäure-Synthase Cuphea lanceolata Genklonierung Hochschulschrift |
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