Inhibitoren der Leukotrienbiosynthese aus Pilzen:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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1995
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| adam_text | INHIBITOREN DER LEUKOTRIENBIOSYNTHESE AUS PILZEN VOM FACHBEREICH
BIOLOGIE DER UNIVERSITAET KAISERSLAUTERN ZUR ERLANGUNG DES AKADEMISCHEN
GRADES DOKTOR DER NATURWISSENSCHAFTEN GENEHMIGTE DISSERTATION (D 386)
VORGELEGT VON ANNETTE WUNDER VORSITZENDER: PROF. DR. H. HUBER 1.
BERICHTERSTATTER: PROF. DR. T. ANKE 2. BERICHTERSTATTER: PROF. DR. J.
CULLUM TAG DER WISSENSCHAFTLICHEN AUSSPRACHE 14. JULI 1995
KAISERSLAUTERN 1995 1. EINLEITUNG 1 2. MATERIAL UND METHODEN 12 2.1.
MEDIEN UND PUFFER 14 2.1.1. MEDIEN FUER PILZE UND BAKTERIEN 14 2.1.2.
MEDIEN UND PUFFER FUER ZELLKULTUREN 15 2.2. ORGANISMEN 18 2.2.1.
TESTSTAEMME FUER DEN AGARDIFFUSIONSTEST UND DEN REIHENVERDUENNUNGSTEST.. 18
2.2.2. TESTPFLANZEN 19 2.2.3. ZELLKULTUREN 19 2.2.4. NEMATODEN 19 2.3.
FERMENTATION UND SCREENING VON BASIDIO-, ASCO- UND ZYGOMYCETEN UND
IMPERFEKTEN PILZEN 20 2.3.1. FERMENTATION UND GEWINNUNG DER ROHEXTRAKTE
VON BASIDIO- UND ASCOMYCETEN SOWIE IMPERFEKTEN PILZEN FUER DAS SCREENING
20 2.3.2. FERMENTATION UND GEWINNUNG VON ROHEXTRAKTEN VON ZYGOMYCETEN
FUER DAS SCREENING 20 2.3.3. FERMENTATION DER PRODUZENTENSTAEMME 21 2.3.4.
FERMENTATIONSANALYSEN 21 2.3.4.1. ENZYMATISCHE BESTIMMUNG DES GLUCOSE-
UND MALTOSEGEHALTES .-...21 2.3.4.2. MYCELTROCKENGEWICHTSBESTIMMUNG 22
2.4. METHODEN ZUR REINIGUNG UND ZUR PHYSIKALISCH-CHEMISCHEN
CHARAKTERISIERUNG DER WIRKSTOFFE 22 2.4.1. GEWINNUNG VON ROHEXTRAKTEN
AUS FERMENTATIONEN DER PRODUZENTENSTAEMME 22 2.4.2. SAEULENCHROMATOGRAPHIE
22 2.4.3. DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE 23 2.4.4. SCHMELZPUNKTBESTIMMUNG 24
2.4.5. SPEKTROSKOPIE 24 2.5. ENTWICKLUNG EINES TESTSYSTEMES ZUR SUCHE
NACH INHIBITOREN DER LEUKOTRIENBIOSYNTHESE 25 2.5.1. ZELLINIE 25 2.5.2.
INDUKTION DER LEUKOTRIENBIOSYNTHESE 25 2.5.3. GEHALTSBESTIMMUNG VON
LEUKOTRIEN C4 MITTELS EINES RADIO- IMMUNOASSAYS 26 2.5.4. SCREENING 27
2.6. UNTERSUCHUNGEN ZUR CHARAKTERISIERUNG DER WIRKUNGSWEISE DER
ISOLIERTEN WIRKSTOFFE AUF DEN ARACHIDONSAEUREMETABOLISMUS 27 2.6.1.
5-LIPOXYGENASE 27 2.6.1.1. HERSTELLUNG DES ZELLEXTRAKTES 27 2.6.1.2.
TESTDURCHFUEHRUNG 28 2.6.1.3. HPLC-ANALYSE DER GEBILDETEN MENGE AN 5-HETE
28 2.6.2. 12-LIPOXYGENAESE AUS RINDERTHROMBOZYTEN ; 29 2.6.2.1.
ISOLIERUNG DER THROMBOZYTEN AUS RINDERSCHLACHTBLUT 29 2.6.2.2.
ANREINIGUNG DER 12-LIPOXYGENASE 29 2.6.2.3. SPEKTROSKOPISCHER ENZYMTEST
29 2.6.3. 15-LIPOXYGENASE (SOJABOHNE) 30 2.6.4. TEST AUF AKKUMULATION
VON LEUKOTRIEN C4 IN RBL-1 ZELLEN 30 2.6.5. UNTERSUCHUNGEN MIT HUMANEN
PERIPHEREN BLUTLEUKOZYTEN 31 2.6.5.1. ISOLIERUNG VON HUMANEN PERIPHEREN
BLUTLEUKOZYTEN 31 2.6.5.2. INDUKTION DER LEUKOTRIEN- UND
PROSTAGLANDINBIOSYNTHESE 31 2.6.6. PHOSPHOLIPASE A2-ASSAYS .-. 31
2.6.6.1. SEKRETORISCHE PHOSPHOLIPASE A2 (TYP II, SYNOVIAL) 32 2.6.6.2.
CYTOSOLISCHE PHOSPHOLIPASE A2 (TYP IV) 33 2.6.7. CARRAGEENIN-INDUZIERTES
RATTENPFOTENOEDEM 33 2.7. WEITERE BIOLOGISCHE TESTS . . 34 2.7.1.
ZYTOTOXIZITAETSTEST 34 2.7.1.1. SUSPENSIONSKULTUREN 35 2.7.1.2.
MONOLAYERKULTUREN 35 2.7.2. EINBAU VON RADIOAKTIV MARKIERTEN VORSTUFEN
DER MAKROMOLEKUELBIO- SYNTHESEN IN SAEUREFAELLBARES MATERIAL VON
VERSCHIEDENEN ORGANISMEN 36 2.7.2.1. RBL-1 ZELLEN 36 2.7.2.2.
NEMATOSPORA CORYLI UND MUCOR MIEHEI 36 2.7.3. ATMUNGSHEMMUNG 37 2.7.4.
TEST AUF INDUKTION DER DIFFERENZIERUNG VON HL-60 ZELLEN 37 2.7.5.
THROMBOZYTENAGGREGATION 37 2.7.6. HAEMOLYSETEST 37 2.7.7.
AGARDIFFUSIONSTEST MIT PILZEN UND BAKTERIEN 38 2.7.8. BESTIMMUNG DER
MINIMALEN HEMMKONZENTRATION IM REIHEN- VERDUENNUNGSTEST 38 2.7.9. TEST
AUF NEMATIZIDE WIRKUNG 39 2.7.10. PFLANZENKEIMUNGSTEST . 39 2.7.11.
REAKTION MIT CYSTEIN 39 3. ERGEBNISSE 40 3.1. TESTSYSTEM 40 3.1.1.
LEUKOTRIENBIOSYNTHESE IN INTAKTEN RBL-1 ZELLEN 40 3.1.2. WIRKUNG
HAEUFIGER PILZMETABOLITEN AUF DIE LEUKOTRIENBIOSYNTHESE IN RBL-1 ZELLEN
43 3.1.3. WIRKUNG VON VERSCHIEDENEN STANDARDHEMMSTOFFEN DES
ARACHIDONSAEURE- STOFFWECHSELS AUF DIE LEUKOTRIENBIOSYNTHESE IN RBL-1
ZELLEN 45 3.2. LIPOXYGENASE-ASSAYS 47 3.2.1. 5-LIPOXYGENASE-ASSAY NACH
ZELLAUFSCHLUSS VON RBL-1 ZELLEN 47 3.2.2. 12-LIPOXYGENASE-ASSAY 49 3.2.3.
15-LIPOXYGENASE-ASSAY 7. 50 3.3. SCREENING UND AUSWAHL DER
PRODUZENTENSTAEMME 51 3.4. FERMENTATION UND ISOLIERUNG VON INHIBITOREN
DER LEUKOTRIENBIOSYNTHESE.. 53 3.4.1. WIRKSTOFFE AUS LENTINELLUS
COCHLEATUS TA 90321 53 3.4.1.1. PRODUKTIONSSTAMM LENTINELLUS COCHLEATUS
TA 90321 53 3.4.1.2. FERMENTATION VON LENTINELLUS COCHLEATUS TA 90321 53
3.4.1.3. ISOLIERUNG VON VERBINDUNGEN AUS LENTINELLUS COCHLEATUS TA 90321
55 3.4.1.4. PHYSIKALISCH-CHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG 56 3.4.2.
WIRKSTOFFE AUS D/RIO/ASP. TA 91010 65 3.4.2.1. PRODUKTIONSSTAMM DITIOLA
SP. TA 91010 7. 65 3.4.2.2. FERMENTATION VON DITIOLA SP. TA 91010 67
3.4.2.3. ISOLIERUNG DER VERBINDUNGEN AUS DITIOLA SP. TA 91010 68
3.4.2.4. CHEMISCH-PHYSIKALISCHE CHARAKTERISIERUNG 70 3.4.3. BIOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG DER ISOLIERTEN VERBINDUNGEN 75 3.4.3.1. EINFLUSS DER
WIRKSTOFFE AUF DIE LEUKOTRIENBIOSYNTHESE IN INTAKTEN RBL-1 ZELLEN 75
3.4.3.2. ZYTOTOXITZITAETSTEST 79 3.4.3.3. EINFLUSS VON DESOXYLACTARORUFIN
A, BLENNIN A, ALLOHEDYCARIOL UND SS-EUDESMOL AUF DEN EINBAU VON
RADIOAKTIV MARKIERTEN VORSTUFEN IN RBL-1 ZELLEN 80 3.4.3.4.
5-LIPOXYGENASE-ASSAY 83 3.4.3.5. 12-LIPOXYGENASE-ASSAY 84 3.4.3.6.
15-LIPOXYGENASE-ASSAY 84 3.4.3.7. WIRKUNG DER ISOLIERTEN VERBINDUNGEN
AUF DIE LEUKOTRIENBIOSYNTHESE BEI ARACHIDONSAEUREZUGABE 85 3.4.3.8.
PHOSPHOLIPASE A2-ASSAYS 86 3.4.3.8.1. SEKRETORISCHE PHOSPHOLIPASE A 2
(SPLA2) 86 3.4.3.8.2. CYTOSOLISCHE PHOSPHOLIPASE A2 (CPLA2) .86 3.4.3.9.
EINFLUSS DER ISOLIERTEN WIRKSTOFFE AUF DEN LTC4-EXPORT 87 3.4.3.10.
EINFLUSS DER WIRKSTOFFE AUF DIE LEUKOTRIEN- UND PROSTAGLANDIN-
BIOSYNTHESE IN HUMANEN PERIPHEREN BLUTLEUKOZYTEN 88 3.4.3.11.
CARRAGEENIN-INDUZIERTESRATTENPFOTENOEDEM 91 3.4.3.12. ANDERE BIOLOGISCHE
TESTS 93 3.5. BILDUNG VON ANTIFUNGISCHEN ANTIBIOTIKA DURCH STAEMME AUS
DER ORDNUNG DACRYMYCETALES 94 3.5.1. UNTERSUCHTE STAEMME AUS DER ORDNUNG
DACRYMYCETALES 94 3.5.2. PRODUKTIONSSTAMM DACRYMYCES STILLATUS TA 93151
96 3.5.3. FERMENTATION VON DACRYMYCES STILLATUS TA 93151 97 3.5.4.
ISOLIERUNG 99 3.5.5. PHYSIKALISCH-CHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG 100 3.5.6.
BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG VON AW 93151-4 102 3.5.6.1.
AGARDIFFUSIONSTEST 102 3.5.6.2. TEST ZUR ERMITTLUNG DER MINIMALEN
HEMMKONZENTRATION BEI BAKTERIEN UND PILZEN 102 3.5.6.3. EINBAU VON
RADIOAKTIV MARKIERTEN VORSTUFEN IN N.EMATOSPORA CORYLI UND MUCORMIEHEI
104 3.5.6.4. ZYTOTOXIZITAETSTEST :. 107 3.5.6.5. ANDERE BIOLOGISCHE TESTS
107 4. DISKUSSION 108 4.1. TESTSYSTEM 108 4.2. INHIBITOREN DER
LEUKOTRIENBIOSYNTHESE AUS LENTINELLUS COCHLEATUS UND DITIOLA SP 113
4.2.1. VERBINDUNGEN AUS LENTINELLUS COCHLEATUS TA 90321 114 4.2.2.
VERBINDUNGEN AUS DITIOLA SP. TA 91010 115 4.2.3. UNTERSUCHUNGEN ZUR
WIRKUNGSWEISE DER AUS LENTINELLUS COCHLEATUS UND DITIOLA SP. ISOLIERTEN
INHIBITOREN DER LEUKOTRIENBIOSYNTHESE 117 4.3. VERGLEICH DER WIRKUNGEN
MIT STRUKTURVERWANDTEN SESQUITERPENEN UND ANDEREN PILZMETABOLITEN 122
4.4. ANTIFUNGISCHE ANTIBIOTIKA 129 4.4.1. DACRYMYCES STILLATUS TA 93151,
EIN PRODUZENT VON ANTIFUNGISCHEN WIRKSTOFFEN 130 5. ZUSAMMENFASSUNG 134
6. LITERATURVERZEICHNIS 136
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