Identifizierung und Charakterisierung von Proteinen der Kernhülle:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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1995
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
1.1.
STRUKTUR
UND
FUNKTION
DER
KEMHUELLE
1
1.
1.
1.
KEMMEMBRANEN
UND
LAMINA
3
1.1.2.
STRUKTUR
UND
FUNKTION
DES
KEMPORENKOMPLEXES
4
KEMPORENPROTEINE
BEI
SAEUGERN
7
KEMPORENPROTEINE
BEI
HEFE
10
MODELLSYSTEME
FUER
DIE
UNTERSUCHUNG
VON
KEMPOREN
14
1.2.
NUKLEOCYTOPLASMATISCHER
TRANSPORT
14
1.2.
1.
PROTEINIMPORT
15
IN
VITRO
KEMTRANSPORT-TEST
16
MECHANISMUS
DES
PROTEINIMPORTS
16
1.
2.
2.
RNA-EXPORT
18
1.
2.
3.
KEMTRANSPORT
VON
USNRNP-KOMPLEXEN
18
1.
2.
4.
ROLLE
DER
NUKLEOPORINE
BEIM
NUKLEOCYTOPLASM.
TRANSPORT
18
1.3.
GLYKOPROTEINE
DER
KEMHUELLE
19
1.4.
ZIELE
DER
ARBEIT
20
2.
ERGEBNISSE
21
2.
1.
PRAEPARATE
21
PRAEPARATION
VON
ZELLKERNEN
AUS
NEURO-2A
ZELLEN
21
PRAEPARATION
VON
KEMHUELLEN
AUS
NEURO-2A
KERNEN
22
CHARAKTERISIERUNG
DES
KEMHUELLENPRAEPARATS
24
2.
2.
GLYKOPROTEINE
DER
KEMHUELLE
26
BINDUNG
VON
LEKTINEN
AN
PROTEINE
DER
KEMHUELLE
26
SIALYLIERTE
PROTEINE
DER
KEMHUELLE
26
EXTRAKTIONSVERHALTEN
DER
SIALYLIERTEN
KEMHUELLENPROTEINE
29
VERGLEICH
VON
SP66
UND
P62
MITTELS
2-D-GELELEKTROPHORESE
31
EINFLUSS
VON
SNA
AUF
DEN
PROTEINIMPORT
IN
DEN
ZELLKERN
32
2.3.
REINIGUNG
VON
P62
AUS
NEURO-2A
ZELLEN
34
2.
4.
REINIGUNG
VON
P62
AUS
RINDERCORTEX
35
REINIGUNG
AUS
RINDERCORTEX-HOMOGENAT
35
REINIGUNG
AUS
RINDERCORTEX-KEMHUELLEN
36
2.5.
IDENTIFIZIERUNG
VON
KEMHUELLENPROTEINEN
AUS
NEURO-2A
ZELLEN
39
IDENTIFIZIERUNG
VON
PROTEINEN
NACH
TRENNUNG
MITTELS
2-D
GELELEKTROPHORESE
39
IDENTIFIZIERUNG
VON
PROTEINEN
AUS
KEMHUELLENEXTRAKTEN
44
2.6.
IDENTIFIZIERUNG
VON
KEMHUELLENPROTEINEN
AUS
HEFE
51
3.
DISKUSSION
53
3.1.
CHARAKTERISIERUNG
DES
KEMHUELLENPRAEPARATS
53
MITOCHONDRIALE
KONTAMINATIONEN
?
53
3.2.
IDENTIFIZIERUNG
VON
KEMHUELLENPROTEINEN
55
IDENTIFIZIERTE
PROTEINE
55
METHODISCHE
SCHWIERIGKEITEN
56
ANDERE
STRATEGIEN
56
AUSBLICK
57
IDENTIFIZIERUNG
VON
PORENPROTEINEN
BEI
HEFE
58
3.3.
GLYKOPROTEINE
DER
KEMHUELLE
58
SNA-BINDENDE
PROTEINE
DER
KEMHUELLE
58
IDENTIFIZIERUNG
VON
SP66
ALS
P62
59
WIE
SIND
DIE
SIALINSAEURERESTE
MIT
DEN
KEMHUELLENPROTEINEN
VERKNUEPFT
?
60
HEMMUNG
DES
PROTEINIMPORTS
IN
DEN
KEM
DURCH
SNA
61
MECHANISMUS
DER
SIALYLIERUNG
VON
P62
61
REINIGUNG
VON
P62
61
STRUKTUR
UND
FUNKTION
VON
P62
62
FUNKTION
DER
GLYKOSYLIERUNG
VON
P62
64
AUSBLICK
65
4.
ZUSAMMENFASSUNG
67
5.
MATERIAL
UND
METHODEN
68
5.
1.
ZELLKULTUR
68
5.2.
SUBZELLULAERE
FRAKTIONIERUNG
VON
NEURO-2A
ZELLEN
68
KEMPRAEPARATION
68
PLASMAMEMBRANPRAEPARATION
69
PRAEPARATION
VON
MITOCHONDRIEN,
MIKROSOMEN
UND
CYTOSOL
69
KEMHUELLENPRAEPARATION
NACH
OTTO
70
KEMHUELLENPRAEPARATION
NACH
KAUFMANN
70
KEMHUELLENPRAEPARATION
NACH
THOMPSON
71
5.
3.
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
72
5.4.
EXTRAKTION
VON
KEMHUELLEN
AUS
NEURO-2A
ZELLEN
72
5.
5.
SUBFRAKTIONIERUNG
VON
KEMHUELLEN
AUS
NEURO-2A
ZELLEN
73
5.
6.
SUBFRAKTIONIERUNG
VON
MITOCHONDRIEN
UND
MIKROSOMEN
AUS
NEURO-2A
ZELLEN
74
5.
7.
PRAEPARATION
VON
KEMHUELLEN
AUS
RINDERCORTEX
75
KEMPRAEPARATION
75
KEMHUELLENPRAEPARATION
76
5.8.
REINIGUNG
VON
P62
AUS
RINDERCORTEX
76
REINIGUNG
AUS
RINDERCORTEX-KEMHUELLEN
76
REINIGUNG
AUS
RINDERCORTEX-HOMOGENAT
78
5.9.
REINIGUNG
VON
P62
AUS
NEURO-2A
ZELLEN
79
5.10.
DNA-BESTIMMUNG
80
5.11.
PROTEINBESTIMMUNG
80
METHODE
NACH
BRADFORD
80
BCA-METHODE
81
METHODE
NACH
SCHAFIHER
UND
WEISSMANN
81
5.12.
PROTEINFAELLUNG
MIT
TRICHLORESSIGSAEURE
82
5.13.
IN
VITRO
TRANSPORT-TEST
82
5.14.
EINDIMENSIONALE
(ID)
GELELEKTROPHORESE
84
5.15.
ZWEIDIMENSIONALE
(2D)
GELELEKTROPHORESE
85
5.16
SILBERFAERBUNG
88
5.17.
COOMASSIE-FAERBUNG
88
5.18.
BLOTTMG
NACH
DEM
SEMIDRY
VERFAHREN
89
5.19.
PROTEINFAERBUNG
AUF
DER
BLOTMEMBRAN
89
5.20.
IMMUNOBLOTS
90
5.21.
NACHWEIS
VON
GLYKOPROTEINEN
MIT
LEKTINEN
91
5.22.
GLYKOSIDASEVERDAU
VON
GLYKOPROTEINEN
AUF
DER
BLOTMEMBRAN
92
5.23.
KOMPETITION
BZW.
INHIBITION
DER
SIALIDASEAKTIVITAET
93
5.24.
TRYPTISCHE
SPALTUNG
VON
PROTEINEN
IM
GEL
94
5.25.
TRENNUNG
VON
PEPTIDGEMISCHEN
MIT
REVERSEDPHASE
HPLC
94
5.26.
SEQUENZIERUNG
VON
PEPTIDEN
94
5.27.
MASSENANALYSE
VON
PEPTIDEN
95
5.28.
VERWENDETE
ENZYME,
LEKTINE
UND
ANTIKOERPER
95
6.
LITERATUR
96
7.
ANHANG
108
ABKUERZUNGEN
108
VEROEFFENTLICHUNGEN
109
LEBENSLAUF
110
DANKSAGUNGEN
111 |
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