Regulation der Expression von Nervenwachstumsfaktor in vivo in Mäusen:
Gespeichert in:
1. Verfasser: | |
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Format: | Abschlussarbeit Buch |
Sprache: | German |
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1995
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
ZUSAMMENFASSUNG
L
2.
EINLEITUNG
3
2.1.
ENTDECKUNG
VON
NERVENWACHSTUMSFAKTOR
(NGF)
3
2.2.
PROTEINSTRUKTUR
VON
NGF
3
2.3.
NGF-REZEPTOREN
4
2.4.
RETROGRADER
TRANSPORT
VON
NGF
4
2.5.
NGF
UND
NATUERLICHER
ZELLTOD
6
2.6.
NGF
IM
PERIPHEREN
NERVENSYSTEM
8
2.7.
NGF
IM
ZENTRALEN
NERVENSYSTEM
9
2.8.
NGF
EXPRESSION
IN
VERSCHIEDENEN
GEWEBEN
10
2.8.1.
SPEICHELDRUESE
10
2.8.2.
HERZ
11
2.8.3.
MAXILLAERER
HAUTBEREICH
DES
GESICHTES
(WOTIRTER
PAD)
12
2.8.4.
ISCHIASNERV
14
2.8.5.
AUGE
15
2.8.6.
HIPPOKAMPUS
UND
GROSSHIRNRINDE
16
2.8.7.
BULBUS
OLFACTORIUS
17
2.8.8.
KLEINHIRN
18
2.9.
GENSTRUKTUR
VON
NGF
19
2.10.
NGF-PROMOTOR
UND
REGULATION
DES
NGF-GENS
IN
VERSCHIEDENEN
ZELLTYPEN
20
3.
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
24
4.
MATERIAL
UND
METHODEN
25
4.1.
MATERIAL
25
4.1.1.
ENZYME
25
4.1.2.
CHEMIKALIEN
UND
VERBRAUCHSMATERIAL
25
4.1.3.
ANTIKOERPER
27
4.1.4.
PLASMIDE
UND
RNA-SONDEN
27
4.1.5.
ZELLEN
28
4.2.
METHODEN
29
4.2.1.
KLONIERUNGSARBEITEN
29
4.2.1.1.
ANZUCHT
VON
E.COLI
ZUR
PLASMID-DNA-ISOLIERUNG
29
4.2.1.1.1.
VORKULTUR
29
4.2.1.1.2.
HAUPTKULTUR
29
4.2.1.2.
GEWINNUNG
DER
PLASMID-DNA
AUS
E.COLI
29
4.2.1.3.
DNA
UND
RNA-KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
29
4.2.1.4.
RESTRIKTIONSVERDAU
VON
DNA
30
4.2.I.5.
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
ZUR
AUFTRENNUNG
VON
DNA-MOLEKUELEN
30
4.2.1.6.
ISOLATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
AGAROSEGELEN
30
4.2.1.6.1.
REINIGUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
MIT
GLASMILCH
30
4.2.1.6.2.
REINIGUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
FUER
DIE
PRONUKLEUSINJEKTION
30
4.2.1.7.
DEPHOSPHORYLIERUNG
31
4.2.1.8.
LIGATION
VON
DNA-MOLEKUELEN
31
4.2.1.9.
TRANSFORMATION
VON
E.COLI
31
4.2.1.10.
BLAU-WEISS-SELEKTION
VON
BAKTERIENKOLONIEN
31
4.2.1.11.
SCREENING
EINER
GENOMISCHEN
PHAGEN-BANK
31
4.2.1.11.1.
IDENTIFIZIERUNG
UND
ISOLIERUNG
DER
PHAGEN-PLAQUES
31
4.2.1.11.2.
ISOLIERUNG
DER
PHAGEN
DNA
32
4.2.1.11.3.
RESTRIKTIONSANALYSE
DER
PHAGEN-DNA
32
4.2.2.
ANALYSE
DER
NGF-EXPRESSION
32
4.2.2.1.
NORTHEM-BLOT
32
4.2.2.1.1.
RNA
ISOLIERUNG
32
4.2.2.1.2.
RNA-GELELEKTROPHORESE
33
4.2.2.I.3.
TRANSFER
DER
RNA
AUF
EINE
NYLONMEMBRAN
33
4.2.2.1.4.
DETEKTION
SPEZIFISCHER
SEQUENZEN
33
4.2.2.3.
NICHT
RADIOAKTIVE
IN
SI/U-HYBRIDISIERUNG
34
4.2.2.3.I.
BESCHICHTUNG
VON
OBJEKTTRAEGERN
MIT
TESPA
34
4.2.2.3.2.
HERSTELLUNG
DER
SONDE
34
4.2.2.3.3.
PRAEPARATION
DER
GEWEBE
34
4.2.2.3.4.
VORBEHANDLUNG
DER
SCHNITTE
35
4.2.2.3.S.
HYBRIDISIERUNG
36
4.2.2.3.6.
DETEKTION
37
4.2.3.
TEST
DER
TRANSGEN-KONSTRUKTE
IN
KULTIVIERTEN
FIBROBLASTEN
38
4.2.3.1.
KULTUR
VON
FIBROBLASTEN
38
4.2.3.2.
TRANSFEKTION
VON
FIBROBLASTEN
38
42.3.3.
LACZ
FAERBUNG
VON
ZELLEN
38
42.4.
TRANSGENE
MAEUSE
38
42.4.1.
PRONUKLEUSINJEKTION
UND
TRANSFER
IN
ANUNENMUETTER
38
42.4.2.
ZUCHT
39
42.4.3.
GENOTYPISIERUNG
39
42.4.3.1.
ISOLIERUNG
GENOMISCHER
DNA
39
4.2.4.32.
RESTRIKTIONSVERDAU
GENOMISCHER
DNA
UND
SOUTHERN
BLOT
40
42.4.3.3.
HERSTELLEN
DER
RADIOAKTIVEN
SONDE
40
42.4.3.4.
HYBRIDISIERUNG
UND
DETEKTION
40
42.4.4.
GEWEBEENTNAHME
UND
VORBEHANDLUNG
41
42.4.5.
BESCHICHTEN
VON
OBJEKTTRAEGERN
MIT
GELATINE
41
42.4.6.
LACZ-FAERBUNG:
WHOLE
MOUNT
UND
SCHNITTE
42
42.4.7.
GEGENFAERBUNG
42
42.4.8.
RT-PCR
42
42.4.9.
LAESION
DES
ISCHIASNERVS
43
42.4.10.
IRISKULTUR
43
4.2.4.11.
PRAEPARATION
PRIMAERER
NIERENFIBROBLASTEN
44
5.
ERGEBNISSE
45
5.1.
TRANSGENE
FUER
DIE
PRONUKLEUSINJEKTION
ZUR
HERSTELLUNG
TRANSGENER
MAEUSE
45
5.1.1.
2
KB-PROMOTOR-KONSTRUKT
(PNZ)
45
5.12.
5
KB
PROMOTOR-KONSTRUKT
(RNZ)
46
5.
1
.3.
TEST
DER
TRANSGEN-KONSTRUKTE
IN
TRANSIENT
TRANSFIZIERTEN
FIBROBLASTEN
46
52.
TRANSGENE
MAEUSE
-
GRUENDERTIERE
UND
LINIEN
47
5.3.
KONTROLLE
DER
IN
DAS
GENOM
DER
MAEUSE
INTEGRIERTEN
TRANSGENE
50
53.1.
KONTROLLE
DER
INTEGRATION
50
5.32.
KONTROLLE
DES
SPLEISSENS
52
5.4.
EXPRESSIONSANALYSE
DES
ENDOGENEN
NGF-GENS
IN
WILDTYP-MAEUSEN
UND
DES
REPORTERGENS
IN
DEN
VERSCHIEDENEN
LINIEN
TRANSGENER
MAEUSE
52
5.4.1.
NORTHERN-BLOT
ANALYSE
DER
NGF-GENEXPRESSION
54
5.4.2.
VERGLEICH
DER
EXPRESSION
DES
REPORTERGENS
MIT
DER
DES
ENDOGENEN
NGF-GENS
54
5.42.1.
ANALYSE
VERSCHIEDENER
GEWEBE
56
5.4.2.1.1.
SPEICHELDRUESE
(GLANDULA
SUBMAXILLARIS)
57
5.4.2.1.2.
MAXILLAERER
HAUTBEREICH
DES
GESICHTES
(WHISKER
PAD)
60
5.42.1.3.
HERZ
63
5.4.2.1.4.
AUGE
66
5.4.2.I.5.
GEHIRN
69
5.4.2.1.5.1.
HIPPOKAMPUS
69
5.4.2.1.5.2.
GROSSHIRNRINDE
73
5.4.2.1.5.3.
BULBUS
OLFACTORIUS
75
5.4.2.1.5.4.
KLEINHIMRINDE
78
5.4.2.2.
UNTERSUCHUNG
DER
EXPRESSION
IN
VERSCHIEDENEN
EXPERIMENTELLEN
MODELLSYSTEMEN
80
5.4.2.2.I.
IRISKULTUR
80
5.4.2.2.2.
FIBROBLASTENKULTUR
81
5.4.2.2.3.
ISCHIASLAESION
82
6.
DISKUSSION
83
6.1.
TRANSKRIPTIONSREGULATION
BEI
EUKARYONTEN
83
6.1.1.
PROMOTOREN
UND
ENHANCER
83
6.1.2.
CHROMATIN
UND
GENREGULATION
85
6.1.3.
LCRSUNDMARS
85
6.3.1.1.
LCRS
85
6.1.3.2.
MARS
86
6.1.4.
METHYLIERUNG
86
6.2.
DISKUSSION
DER
ERGEBNISSE
DER
VORLIEGENDEN
ARBEIT
88
6.2.1.
ANALYSE
VON
PROMOTORREGIONEN
88
6.2.1.1.
ANALYSE
VON
PROMOTORREGIONEN
IN
TRANSFEKTIONSEXPERIMENTEN
88
6.2.I.2.
ANALYSE
VON
PROMOTORREGIONEN
IN
TRANSGENEN
MAEUSEN
91
6.2.I.2.I.
WAHL
DES
REPORTERGENS
91
6.2.1.2.2.
INTEGRATIONSORT
UND
KOPIENZAHL
EINES
TRANSGENS
93
6.2.2.
ERSCHEINUNGSBILD
DER
LACZ-FAERBUNG
95
6.2.3.
VERGLEICH
DER
EXPRESSIONSMUSTER
DES
REPORTERGENS
MIT
DEM
EXPRESSIONSMUSTER
DES
ENDOGENEN
NGF-GENS
96
6.2.3.1.
EXPRESSIONSSTAERKE
96
6.2.3.2.
EXPRESSION
IN
DEN
VERSCHIEDENEN
LINIEN
97
6.2.3.2.1.
EXPRESSION
IN
VERSCHIEDENEN
GEWEBEN
98
6.2.3.2.1.1.
SPEICHELDRUESE
(GLANDULA
SUBMAXILLARIS)
98
OE.2.3.2.
1.2.
MAXILLAERER
HAUTBEREICH
DES
GESICHTES
(WHISKER
PAD)
99
6.2.3.2.
1.3.
HERZ
UND
BLUTGEFAESSE
101
6.2.3.2.1.4.
AUGE
102
62.32.1.5.
GEHIRN
103
6.2.32.1.6.
ALLGEMEINE
BETRACHTUNG
DER
FAERBUNGEN
105
62.32.2.
EXPRESSION
IN
KULTIVIERTEN
FIBROBLASTEN
UND
NACH
ISCHIASLAESION
106
62.4.
NGF-EXPRESSION:
WEITERE
MOEGLICHKEITEN
DER
ANALYSE
108
62.4.1.
INSITU-PCR.
108
62.4.2.
HOMOLOGE
REKOMBINATION
109
62.4.3.
YACS
109
7.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
HO
8.
LITERATURVERZEICHNIS
112 |
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