Charakterisierung von Komponenten des SRP-abhängigen Proteintransportweges über die Membran des endoplasmatischen Retikulums in Pflanzenzellen:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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1995
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
.
5
A
ZUSAMMENFASSUNG
.
7
B
EINLEITUNG
.
9
1.
DER
SRP-ABHAENGIGE
PROTEINTRANSPORT
UEBER
DIE
MEMBRAN
DES
ER
.
9
2.
DAS
SIGNALERKENNUNGS-PARTIKEL
.
12
2.1.
DIE
SRP
RNA
.
12
2.2.
DIE
SRP-PROTEINE
.
13
3.
DAS
SRP
54
.
14
3.1.
DIE
FUNKTIONSANALYSE
DES
SRP54
.
14
4.
DIE
SRPS
VERSCHIEDENER
ORGANISMEN
.
16
5.
DIE
SRPS
UND
IHRE
MOEGLICHE
WECHSELWIRKUNG
MIT
VLROIDEN.
16
5.1.
DIE
7S
RNA
POPULATION
IN
TOMATE
.
17
5.2.
INDIREKTE
HINWEISE
AUF
EINE
VLROID/SRP
WECHSELWIRKUNG
.
18
6.
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
.
18
C
MATERIAL
UND
METHODEN
.
20
1.
MATERIAL
.
20
1.1.
PFLANZENMATERIAL
.
20
1.2.
BAKTERIEN
UND
VEKTOREN
.
20
1.3.
PLASMIDE
UND
ANTIKOERPER
.
20
1.4.
PRIMER
.
21
1.5.
LAENGENSTANDARTS
.
21
1.6.
CHEMIKALIEN
UND
ENZYME
.
21
1.7.
MEDIEN
UND
PUFFER
.
22
1.8.
GERAETE
.
22
1.9.
COMPUTERPROGRAMM
.
23
2
INHALTSVERZEICHNIS
1.9.
COMPUTERPROGRAMM
.
2.
METHODEN
.
2.1.
IN
VITRO
TRANSKRIPTION
.
2.2.
IN
VITRO
TRANSLATION
.
2.3.
FAERBUNG
VON
IM
GEL
FIXIERTEN
PROTEINEN
MIT
COOMASSIE,
BZW.
SILBEMITRAT
.
2.4.
BINDUNG
DES
IN
VITRO
TRANSLATLERTEN
SRP54
UND
SRP19
AN
DIE
7S
RNA
UND
ISOLIERUNG
DER
KOMPLEXE
MITTELS
DEAE-SEPHAROSE
.
2.5.
AUFTRENNUNG
DER
NACH
IN
VITRO
TRANSLATION
UND
PROTEIN/RNA
BLNDEANSATZ
GEBILDETEN
KOMPLEXE
DURCH
SACCHAROSEGRADIENTEN-ZENTRIFUGATION
.
2.6.
ISOLIERUNG
DER
PROTEIN/7S
RNA
KOMPLEXE
MIT
HILFE
VON
STREPTAVIDIN-DYNABEADS
.
2.7.
ISOLIERUNG
VON
GESAMT-RNA
AUS
WEIZENKEIMEN
.
2.8.
ISOLIERUNG
EINER
7S
RNA
SPEZIFISCHEN
CDNA
AUS
WEIZEN
KEIMEN
MIT
HILFE
DER
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
.
2.9.
NORTHERN
BLOT
ANALYSE
MIT
DER
7S
RNA
ALS
RADIOAKTIV
MARKIERTER
SONDE
.
2.10.
HERSTELLUNG
EINES
ANTIKOERPERS
GEGEN
DAS
SRP54
AUS
TOMATE
.
2.11.
ANTIKOERPERTEST
MIT
DEM
GEREINIGTEN
SRP54-T-AK
.
2.12.
ISOLIERUNG
EINES
11,8
S
PARTIKELS
AUS
WEIZENKEIMEN
.
2.13.
AFFINITAETS-CHROMATOGRAPHIE
MIT
DEM
SRP54-T-AK
.
2.14.
CHROMATOGRAPHIE
MIT
HYDROXYLAPATIT
.
D
ERGEBNISSE
.
35
1.
FUNKTIONELLE
CHARAKTERISIERUNG
DES
SRP54
AUS
TOMATE
.
35
1.1.
BINDUNG
DES
IN
VITRO
TRANSLATIERTEN
SRP54
UND
SRP19
AN
DIE
7S
RNA
UND
ISOLIERUNG
DER
KOMPLEXE
MITTELS
DEAE-SEPHAROSE
.
35
1.2.
SACCHAROSEGRADIENTEN-ZENTRIFUGATLON
ZUR
ABTRENNUNG
DER
SRP54-T-ENTHALTENDEN
AGGREGATE
.
38
1.3.
ISOLIERUNG
DER
PROTEIN/7S
RNA
KOMPLEXE
MIT
HILFE
VON
STREPTAVIDIN-DYNABEADS
.
42
INHALTSVERZEICHNIS
3
1.4.
ERHOEHUNG
DER
BINDEEFFIZIENZ
DES
SRP54-T
AN
DEN
SRP19-M/7S-TOMI
KOMPLEX
DURCH
ANWESENHEIT
EINES
SIGNALPEPTIDES
.
44
1.5.
EINFLUSS
DER
SEKUNDAERSTRUKTUR
VERSCHIEDENER
VARIANTEN
DER
7S
RNA
AUS
TOMATE
AUF
DIE
BINDUNG
DES
SRP19-M
UND
DES
SRP54-T
.
46
1.6.
DAS
SRP54-T
BINDET
NICHT
AN
DAS
VIROID
PSTVD
.
49
2.
BIOCHEMISCHE
REINIGUNG
VON
KOMPONENTEN,
DIE
GEMEINSAM
MIT
DER
7S
RNA
IN
EINEM
KOMPLEX
GEBUNDEN
SIND
.
53
2.1.
ISOLIERUNG
DER
7S
RNA
AUS
WEIZENKEIMEN
.
53
2.2.
HERSTELLUNG
EINES
SRP54-T
SPEZIFISCHEN
ANTIKOERPERS
.
56
2.3.
ISOLIERUNG
EINES
11,8
S
PARTIKELS
AUS
WELZENKEIMEN
.
61
2.4.
REINIGUNG
DES
11,8
S
PARTIKELS
MIT
HILFE
CHROMATOGRAPHISCHER
METHODEN
.
66
2.5.
SEQUENZANALYSE
DER
7S
RNA-ASSOZLIERTEN
WEIZENKEIM
PROTEINE,
DIE
VON
DER
HYDROXYLAPATIT-SAEULE
ELUIERT
WURDEN.
72
E
DISKUSSION.
79
1.
DIE
STRUKTUR
UND
FUNKTION
DES
SRP54
IM
TRANSLOKATIONSPROZESS
IST
EVOLUTIONAER
KONSERVIERT
.
79
1.1.
DAS
SRP54
AUS
TOMATE
BINDET
AN
DIE
7S
RNA
AUS
TOMATE
UND
AUS
MENSCH
.
79
1.2.
DIE
ANWESENHEIT
EINES
SIGNALPEPTIDES
ERHOEHT
DIE
EFFIZIENZ
DER
BINDUNG
DES
IN
VITRO
TRANSLATIERTEN
SRP54
AUS
TOMATE
AN
DEN
SRP
19/
7S
RNA
KOMPLEX
.
80
2.
DIE
UNTERSCHIEDLICHEN
SEKUNDAERSTRUKTUREN
DER
IN
VIVO
VORKOMMENDEN
7S
RNA
VARIANTEN
AUS
TOMATE
BEEINFLUSSEN
DIE
BINDUNG
DER
PROTEINE
SRP
19
UND
SRP54
.
82
3.
DIE
DOMAENE
T2
DES
VLROLDS
PSTVD
AEHNELT
IN
IHRER
SEKUNDAERSTRUKTUR
DER
BINDEDOMAENE
DES
SRP
19
DER
7S
RNA
.
86
4.1.
CALRETICULIN
IN
WEIZEN
.
89
4.2.
HINWEISE
AUF
DAS
SRP14
AUS
WELZEN
.
91
4
INHALTSVERZEICHNIS
4.2.
HINWEISE
AUF
DAS
SRP14
AUS
WEIZEN
.
91
4.3.
ZWEI
PROTEINE,
DIE
ZUSAMMEN
MIT
DEM
11,8
S
KOMPLEX
AUFGEREINIGT
WURDEN,
HABEN
AEHNLICHKEIT
ZU
KOMPONENTEN
DES
SRP-ABHAENGIGEN
PROTEINTRANSPORTWEGES
UEBER
DIE
ER
MEMBRAN
.
93
5.
AUSBLICK
.
97
F
LITERATURVERZEICHNIS
.
98
DANKSAGUNG
.
114
LEBENSLAUF.
.
115 |
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