Herstellung, Charakterisierung und Anwendung von monoklonalen und polyklonalen Antikörpern für Enzymtechnik und Umweltanalytik:
Gespeichert in:
1. Verfasser: | |
---|---|
Format: | Abschlussarbeit Buch |
Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
1995
|
Schlagworte: | |
Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
Beschreibung: | VI, 184 S. Ill., graph. Darst. |
Internformat
MARC
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INHALTSVERZEICHNIS
I
1.
EINLEITUNG
1.1
GRUNDLAGEN
1
1.1.1
ANWENDUNGEN
VON
ANTIKOERPERN
7
1.2
PENICILLIN
AMIDASE
UND
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
GEGEN
PENICILLIN
10
AMIDASE
1.3
ANTIKOERPER
GEGEN
POLYZYKLISCHE
AROMATISCHE
KOHLENWASSERSTOFFE
13
1.3.1
POLYZYKLISCHE
AROMATISCHE
KOHLENWASSERSTOFFE
13
1.3.2
IMMUNOASSAYS
IN
DER
UMWELTANALYTIK
16
1.3.3
ENTWICKLUNG
VON
IMMUNOASSAYS
ZUM
HAPTEN-NACHWEIS
19
1.3.4
STAND
DER
FORSCHUNG
ZU
BEGINN
DER
VORLIEGENDEN
ARBEIT
20
1.4
ZIELSETZUNGEN
DER
ARBEIT
21
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
2.1
ABKUERZUNGEN
22
2.2
CHEMIKALIEN
UND
GERAETE
23
2.3
PUFFER
26
2.4
IMMUNISIERUNGEN
27
2.5
ZELLKULTUR
27
2.5.1
VERWENDETE
ZELLINIEN
28
2.5.1.1
MYELOMZELLEN
28
2.5.1.2
HYBRIDOMZELLEN
28
2.5.2
MEDIEN
FUER
DIE
ZELLKULTUR
28
2.5.3
.
KULTUR
VON
HYBRIDOMZELLEN
29
2.5.3.1
KULTUR
VON
HYBRIDOMZELLEN
IN
PLASTIKEINMALFLASCHEN
29
2.5.3.2
MASSENKULTUR
VON
HYBRIDOMZELLEN
IN
ROLLFLASCHEN
29
2.5.4
TEST
DER
ZELLKULTUREN
AUF
MYKOPLASMENINFEKTIONEN
30
2.5.5
FUSIONEN
30
2.5.6
LINIENREINDARSTELLUNG
(REKLONIERUNGEN)
32
2.5.7
GEFRIERKONSERVIERUNG
VON
ZELLEN
32
2.6
SUBKLASSENBESTIMMUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
33
2.7
QUANTIFIZIERUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
33
2.8
REINIGUNG
VON
ANTIKOERPERN
34
II
INHALTSVERZEICHNIS
2.8.1
REINIGUNG
VON
IGG-ANTIKOERPEM
AUS
ZELLKULTURMEDIUM
34
DURCH
AMMONIUMSULFATFAELLUNG
UND
GELFILTRATION
2.8.2
REINIGUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
MIT
PROTEIN
G
34
SEPHAROSE
2.9
ELISA
ZUM
NACHWEIS
VON
ANTI-PENICILLIN
G
AMIDASE
35
ANTIKOERPERN
2.10
CHARAKTERISIERUNG
DER
LANGZEITSTABILITAET
VON
HYBRIDOMZELLEN
36
2.10.1
CHROMOSOMENANALYSE
36
2.10.2
BESTIMMUNG
DES
ANTEILS
VON
NICHTPRODUZENTEN
IN
EINER
38
HYBRIDOMZELLKULTUR
2.11
ULTRAFILTRATION
38
2.12
KOPPLUNG
VON
PROTEINEN
AN
TRAEGERMATERIALIEN
39
2.12.1
KOPPLUNG
VON
PROTEINEN
AN
CNBR-AKTIVIERTE
SEPHAROSE
39
2.12.2
KOPPLUNG
VON
PROTEINEN
AN
EUPERGIT
C250L
UND
EPOXY
39
TENTAKELTRAEGER
2.12.3
GERICHTETE
IMMOBILISIERUNG
VON
ANTIKOERPERN
AN
AH
39
SEPHAROSE
4B
UND
EAH-SEPHAROSE
4B
2.12.4
KOPPLUNG
VON
PENICILLIN
AMIDASE
AN
EAH-SEPHAROSE
4B
40
2.12.5
KOPPLUNG
VON
PENICILLIN
AMIDASE
AN PB
A-EUPERGIT
40
2.13
KOPPLUNG
VON
HAPTENEN
AN
PROTEINE
UND
FESTPHASEN
41
2.13.1
KOPPLUNG
VON
1-PYRENISOTHIOCYANAT
AN
BSA
41
2.13.2
KOPPLUNG
VON
1-PYRENBUTTERSAEURE AN
BSA
41
2.13.3
KOPPLUNG
VON
SUCCINIMIDYL-9-ANTHRACENPROPIONAT
AN
42
BSA
UND
KLH
2.13.4
KOPPLUNG
VON
2
ANTHRACENISOTHIOCYANAT
AN
BSA
UND
43
KLH
2.13.5
KOPPLUNG
VON
9
ANTHRYLDIAZOMETHAN
AN
BSA
43
2.13.6
KOPPLUNG
VON
9
ANTHRACENALDEHYD
AN
BSA
44
2.13.7
KOVALENTE
BINDUNG
VON
HAPTENEN
AN
COVALINK
NH
44
ELISA-PLATTEN
2.14
ELEKTROPHORETISCHE
METHODEN
UND
NACHWEISVERFAHREN
45
2.14.1
SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
45
2.14.2
ISOELEKTRISCHE
FOKUSSIERUNG
(IEF)
45
2.15
NACHWEIS
VON
PROTEINEN
NACH
ELEKTROPHORESEN
46
2.15.1
COOMASSIE-UND
SILBERFAERBUNG
46
INHALTSVERZEICHNIS
]H
2.15.2
AKTIVITAETSFAERBUNG
DER
PENICILLIN
AMIDASE
NACH
ISOELEK
47
TRISCHER
FOKUSSIERUNG
2.15.3
WESTERN-BLOT
UND
NACHWEIS
VON
PROTEINEN
AUF
EINEM
BLOT
47
2.16
SPEKTROSKOPISCHE
METHODEN
48
2.16.1
PROTEINBESTIMMUNG
(UV,
LOWRY)
48
2.16.2
AKTIVITAETSBESTIMMUNG
DER
PENICILLIN
AMIDASE
49
2.16.3
AUFNAHME
VON
FLUORESZENZEMISSIONSPEKTREN
50
2.17
IMMUNOASSAYS
ZUR
QUANTIFIZIERUNG
VON
HAPTENEN
51
2.17.1
ELISA
ZUR
QUANTIFIZIERUNG
VON
ANTHRACEN
51
2.17.2
ELISA
ZUR
QUANTIFIZIERUNG
VON
PYREN
54
2.17.3
PROBENVORBEREITUNG
UND
STANDARDHERSTELLUNG
FUER
55
DEN
ANTHRACEN-ELISA
UND
DEN
PYREN-ELISA
2.18
EXTRAKTION
VON
BODENPROBEN
MIT
ETHYLACETAT
56
2.19
UMGANG,
VERMEIDUNG
UND
ENTSORGUNG
VON
GEFAHRSTOFFEN
56
3.
ERGEBNISSE
I.
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
GEGEN
PENICILLIN
AMIDASE
3.1
CHARAKTERISIERUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
GEGEN
PENICILLIN
57
AMIDASE
3.1.1
BESTIMMUNG
DER
SUBKLASSEN
UND
DER
BINDUNGSEIGEN
57
SCHAEFTEN
AN
PENICILLIN
AMIDASE
3.1.2
ISOELEKTRISCHE
FOKUSSIERUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
58
GEGEN
PENICILLIN
AMIDASE
3.2
SELEKTION
VON
MONOKLONALEN
ANTIKOERPERN
FUER
DIE
AFFINITAETS
59
CHROMATOGRAPHISCHE
REINIGUNG
VON
PENICILLIN
AMIDASE
3.3
PRODUKTION
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
62
3.3.1
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
ZELL-UND
PRODUKTSTABILITAET
62
3.3.2
ZELLIDENTITAET
UND
ZELLSTABILITAET
62
3.3.3
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
ZELLSTABILITAET
64
3.3.4
PRODUKTQUALITAET
68
3.3.5
REINIGUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
70
3.4
ANWENDUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
GEGEN
PENICILLIN
AMIDASE
74
3.4.1
IMMOBILISIERUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
74
IV
INHALTSVERZEICHNIS
3.4.2
BESTIMM
UN
G
DER
PH-ABHAENGIGKEIT
DER
DISSOZIATIONS
KONSTANTEN
FUER
DIE
BINDUNG
ZWISCHEN
ANTIKOERPER
UND
PENICILLIN
AMIDASE
75
3.4.3
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHISCHE
REINIGUNG
VON
PENICILLIN
AMIDASE
77
3.4.4
CHARAKTERISIERUNG
DER
HERGESTELLTEN
AFFINITAETSMATERIALIEN
80
3.4.4.1
BESTIMMUNG
DER
EXPERIMENTELLEN
BODENHOEHEN
80
3.4.4.2
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
LIGANDENDICHTE
82
3.4.4.3
FLUORESZENZSPKETROSKOPISCHE
UNTERSUCHUNGEN
84
II.
ANTIKOERPER
GEGEN
POLYZYKLISCHE
AROMATISCHE
KOHLENWASSERSTOFFE
86
3.5
ANTIKOERPER
GEGEN
2-ANTHRACENISOTHIOCYANAT-KLH
90
3.5.1
HERSTELLUNG
VON
2-ANTHRACENISOTHIOCYANAT
-
PROTEIN
KONJUGATEN
ZUR
IMMUNISIERUNG
91
3.5.2
HERSTELLUNG
POLYKLONALER
ANTIKOERPER
GEGEN
2-ANTHRACEN
ISOTHIOCYANAT-KLH
92
3.5.2.1
IMMUNANTWORT
BEI
KANINCHEN
92
3.5.2.2
VERSUCHE
ZUR
ETABLIERUNG
EINES
KOMPETITIVEN
ELISA
ZUM
ANTHRACENNACHWEIS
MIT
POLYKLONALEN
SEREN
GEGEN
2-ANTHRACENISOTHIOCYANAT-KLH
94
3.5.3
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
GEGEN
2-ANTHRACENISOTHIOCYANAT
KLH
94
3.5.3.1
IMMUNANTWORT
BEI
MAEUSEN
94
3.5.3.2
HERSTELLUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
95
3.5.3.3
VERSUCHE
ZUR
ETABLIERUNG
EINES
KOMPETITIVEN
ELISA
ZUM
ANTHRACENNACHWEIS
MIT
MONOKLONALEN
ANTIKOERPERN
GEGEN
2-ANTHRACENISOTHIOCYANAT-KLH
97
ANTIKOERPER
GEGEN
9-ANTHRACENPROPIONAT-KLH
97
3.6.1
HERSTELLUNG
VON
9-ANTHRACENPROPIONAT-PROTEIN
KONJUGATEN
ZUR
IMMUNISIERUNG
98
3.6.2
HERSTELLUNG
POLYKLONALER
ANTIKOERPER
GEGEN
9-ANTHRACEN
PROPIONAT-KLH
100
3.6.3
VERSUCHE
ZUR
ETABLIERUNG
EINES
KOMPETITIVEN
HOMOLOGEN
ELISA
ZUM
ANTHRACENNACHWEIS
MIT
SEREN
GEGEN
9-ANTHRACENPROPIONAT-KLH
101
V
INHALTSVERZEICHNIS
3.6.4
ETABLIERUNG
EINES
HETEROLOGEN
ELISA
ZUR
BESTIMMUNG
VON
ANTHRACEN
MIT
SEREN
GEGEN
9-ANTHRACENPROPIONAT
KLH
102
3.6.4.1
HERSTELLUNG
HETEROLOGER
ANTHRACEN-PROTEIN
KONJUGATE
FUER
DIE
ELISA-PLATTENBESCHICHTUNG
UND
KOVALENTE
KOPPLUNG
VON
9-ANTHRACENPROPIONAT
AN
ELISA-PLATTEN
103
3.6.4.2
VERGLEICH
DER
IMMUNANTWORT
EINES
KANINCHENS
BEI
VERWENDUNG
VON
9-ANTHRACENPROPIONAT-BSA
ODER
ADAM-BSA
ZUR
ELISA-PLATTENBESCHICHTUNG
106
3.6.4.3
ABHAENGIGKEIT
DER
SIGNALSTAERKE
IM
ELISA
VON
DER
SERUMVERDUENNUNG
UND
DER
BESCHICHTUNGSMENGE
107
3.6.4.4
EINSATZ
VON
ORGANISCHEN
LOESUNGSMITTELN
UND
LOESUNGSVERMITTLERN
IN
ENZYMIMMUNOASSAYS
108
3.6.4.5
EINFLUSS
ORGANISCHER
LOESUNGSMITTEL,
LOESUNGSVERMITTLER
UND
DER
BSA-KONZENTRATION
IM
ANALYSENPUFFER
AUF
DEN
ANTHRACEN-ELISA
110
3.6.5
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
KREUZREAKTION
VERSCHIEDENER
POLYZYKLISCHER
AROMATISCHER
KOHLENWASSERSTOFFE
IM
ANTHRACEN-ELISA
112
3.6.5.1
EINFLUSS
DER
PROBENBEHANDLUNG
112
3.6.5.2
KREUZREAKTION
VERSCHIEDENER
POLYZYKLISCHER
AROMATISCHER
KOHLENWASSERSTOFFE
IM
ANTHRACEN-ELISA
114
3.7
POLYKLONALE
ANTIKOERPER
GEGEN
1-PYRENIODACETAMID-KLH
115
3.7.1
ETABLIERUNG
EINES
HETEROLOGEN
KOMPETITIVEN
ELISA
ZUR
BESTIMMUNG
VON
PYREN
115
3.7.2
HERSTELLUNG
HETEROLOGER
1-PYREN-PROTEIN
KONJUGATE
FUER
DIE
ELISA-PLATTENBESCHICHTUNG
116
3.7.3
ABHAENGIGKEIT
DER
SIGNALSTAERKE
IM
PYREN-ELISA
VON
DER
SERUMVERDUENNUNG
117
3.7.4
EINFLUSS
ORGANISCHER
LOESUNGSMITTEL
AUF
DEN
PYREN-ELISA
118
3.7.5
KREUZREAKTION
VERSCHIEDENER
POLYZYKLISCHER
AROMATISCHER
KOHLENWASSERSTOFFE
IM
PYREN-ELISA
120
3.8
UNTERSUCHUNGEN
VON
BODENPROBEN
MIT
IMMUNOASSAYS
121
3.8.1
EINFLUSS
DER
PROBENMATRIX
AUF
DEN
PYREN-ELISA
UND
DEN
ANTHRACEN-ELISA
122
3.8.2
NACHWEIS
POLYZYKLISCHER
AROMATISCHER
KOHLENWASSER
STOFFE
IN
BODENPROBEN
MIT
DEM
ANTHRACEN-ELISA
UND
DEM
PYREN-ELISA
124
VI
INHALTSVERZEICHNIS
4.
DISKUSSION
128
4.1
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
GEGEN
PENICILLIN
AMIDASE
128
4.2
POLYKLONALE
ANTIKOERPER
GEGEN
POLYZYKLISCHE
AROMATISCHE
147
KOHLENWASSERSTOFFE
5.
ZUSAMMENFASSUNG
161
6.
LITERATURVERZEICHNIS
164 |
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author | Schmieding, Jörg |
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