Aufbau eines Enzym-Immuno-Assays zur Bestimmung von Keratansulfat-Proteoglycan im Serum von Patienten mit entzündlichen und degenerativen Gelenkerkrankungen:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1995
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INHALTSVERZEICHNIS
VERZEICHNIS
DER
VERWENDETEN
ABKUERZUNGEN
1.
EINLEITUNG
1
1.1
FUNKTION
UND
AUFBAU
DES
GELENKKNORPELS
1
1.2
STRUKTUR
DER
PROTEOGLYCANE
IM
HUMANEN
GELENKKNORPEL
2
1.2.1
AUFBAU
DES
AGGRECAN
5
1.2.2
AUFBAU
DER
KLEINEN
PROTEOGLYCANE
AUS
GELENKKNORPEL
6
1.3
PROTEOGLYCANE
IN
HUMANEN
GEWEBEN
7
1.3.1
VORKOMMEN
UND
FUNKTION
DER
PROTEOGLYCANE
7
1.3.2
STRUKTUR
DER
GLYKOSAMINOGLYCAN-KETTEN
UND
DEREN
ANKNUEPFUNG
AN
DAS
CORE-PROTEIN
7
1.3.2.1
HYALURONAN
9
1.3.2.2
CHONDROITINSULFAT
UND
DERMATANSULFAT
9
1.3.2.3
HEPARANSULFAT
UND
HEPARIN
11
1.3.2.4
KERATANSULFAT
12
1.3.3
IMMUNCHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
PROTEOGLYCANE
14
1.2
PATHOMECHANISMEN
BEI
GELENKERKRANKUNGEN
15
1.2.1
ALTERSABHAENGIGE
VERAENDERUNGEN
IM
GELENKKNORPEL
15
1.2.2
VERAENDERUNGEN
DES
GELENKKNORPELS
BEI
DEGENERATIVEN
GELENKERKRANKUNGEN
17
1.2.3
VERAENDERUNGEN
DES
GELENKKNORPELS
BEI
ENTZUENDLICHEN
GELENKERKRANKUNGEN
18
1.3
KLINISCHE
ASPEKTE
VON
GELENKERKRANKUNGEN
20
1.3.1
RHEUMATOIDE
ARTHRITIS
20
1.3.1.1
KLINISCHE
BEFUNDE
20
1.3.1.2
LABORCHEMISCHE
UND
RADIOLOGISCHE
BEFUNDE
21
1.3.1.3
THERAPEUTISCHES
KONZEPT
21
1.3.2
REAKTIVE
ARTHRITIS
22
1.3.2.1
KLINISCHE
BEFUNDE
22
1.3.2.2
LABORCHEMISCHE
BEFUNDE
22
1.3.2.3
THERAPEUTISCHES
KONZEPT
22
1.3.3
OSTEOARTHROSE
-
23
1.3.3.1
KLINISCHE
BEFUNDE
23
1.3.3.2
LABORCHEMISCHE
UND
RADIOLOGISCHE
BEFUNDE
23
2.
ZIEL
DER
VORLIEGENDEN
ARBEIT
24
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
25
3.1
CHEMIKALIEN
25
3.2
ZUSAMMENSETZUNG
DER
FUER
BIOCHEMISCHE
UND
IMMUN
CHEMISCHE
UNTERSUCHUNGEN
EINGESETZTE
PUFFER
26
3.3
ANALYTISCHE
METHODEN
UND
GERAETE
27
3.4
METHODEN
28
3.4.1
PRAEPARATION
DES
KERATANSULFAT-REICHEN
REGION
AUS
DEM
GROSSEN
AGGREGIERENDEN
PROTEOGLYCAN
28
3.4.1.1
CHROMATOGRAPHISCHE
AUFTRENNUNG
UND
ENZYMATISCHER
ABBAU
DES
AGGRECAN
28
3.4.1.1.1
ENZYMATISCHER
ABBAU
MIT
CHONDROITINSULFAT-LYASEN
28
3.4.1.1.2
GELPERMEATIONSCHROMATOGRAPHIE
AN
SUPERDEX
200
28
3.4.1.1.3
ENZYMATISCHER
ABBAU
MIT
TRYPSIN
28
3.4.1.1.4
AMONEN-AUSTAUSCH-CHROMATOGRAPHIE
AN
SEPHAROSE
QHP
30
3.4.1.2
BIOCHEMISCHE
UND
IMMUNCHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
PROTEOGLYCAN-FRAGMENTE
30
3.4.1.2.1
ANALYSE
DER
AMINOSAEUREN
UND
HEXOSAMIN-ZUSAMMENSETZUNG
30
3.4.1.2.2
DERIVATISIERUNG
VON
PROTEOGLYCANEN
MIT
BIOTIN
30
3.4.1.2.3
ENZYMATISCHER
ABBAU
MIT
KERATANASEN
UND
ENDO-SS
GALAKTOSIDASE
30
3.4.1.2.4
ANALYTISCHE
GELPERMEATIONSCHROMATOGRAPHIE
AN
TSK
4000
31
3.4.1.2.5
SLOT-BLOT-ENZYM-IMMUNO-ASSAY
31
3.4.1.2.6
SDS-POLYACRYLAMID-GEL-ELEKTROPHORESEN(SDS-PAGE)
32
3.4.1.2.6.1
DIFFUSIONS-BLOT
NACH
SDS-PAGE
32
3.4.1.2.6.2
IMMUNCHEMISCHER
NACHWEIS
VON
PEPTIDO-KERATANSULFAT
NACH
DIFFUSIONSBLOT
AUF
PVDF-MEMBRANEN
33
3.4.1.2.6.3
NACHWEIS
BIOTIN-MARKIERTER
KOMPONENTEN
AUF
PVDF
MEMBRANEN
MIT
PEROXIDASE-KONJUGIERTEM
AVIDIN
33
3.4.2
ENZYM-IMMUNO-ASSAY
ZUR
BESTIMMUNG
VON
KERATANSULFAT
PROTEOGLYCAN
34
3.4.2.1
BESTIMMUNG
VON
KERATANSULFAT-HALTIGEN
PROTEOGLYCANEN
IN
GEPUFFERTEN
SALZLOESUNGEN
34
3.4.2.2
BESTIMMUNG
VON
KERATANSULFAT-HALTIGEN
PROTEOGLYCANEN
IN
EINER
PROTEIMEICHEN
PROBENMATRIX
WIE
SERUM
35
3.4.2.2.1
KERATANSULFAT-DEPLETION
VON
SERUM
35
3.4.2.2.2
ERSTELLEN
EINER
KERATANSULFAT-STANDARDKURVE
36
3.4.2.3
METHODEN
DER
QUALITAETSKONTROLLE
36
3.4.2.3.1
BEURTEILUNG
DER
PRAEZISION
36
3.4.2.3.2
BEURTEILUNG
DER
RICHTIGKEIT
37
N
3.4.3
AUSWAHL
UND
GEWINNUNG
DER
PROBEN,
DEREN
KERATANSULFAT
GEHALT
MIT
HILFE
DES
ENZYM-IMMUNO-ASSAYS
BESTIMMT
WERDEN
SOLLTE
37
3.4.4
THOMPSON-GELENKINDEX
38
3.4.5
STATISTISCHE
DISKRIMINANZANALYSE
38
4.
ERGEBNISSE
40
4.1
PRAEPARATION
DER
KERATANSULFAT-REICHEN
REGION
DES
GROSSEN
AGGREGIERENDEN
PROTEOGLYCANS
AUS
HUMANEM
GELENKKNORPEL
40
4.1.1
CHROMATOGRAPHISCHE
AUFTRENNUNG
UND
ENZYMATISCHER
ABBAU
DES
GROSSEN
AGGREGIERENDEN
PROTEOGLYCANS
40
4.1.1.1
ENZYMATISCHER
ABBAU
MIT
CHONDROITINASEN
40
4.1.1.2
GELPERMEATIONSCHROMATOGRAPHIE
AN
SUPERDEX
200
40
4.1.1.3
ENZYMATISCHER
ABBAU
MIT
TRYPSIN
41
4.1.1.4
ANIONENAUSTAUSCH-CHROMATOGRAPHIE
AN
SEPHAROSE
Q
HP
41
4.1.2
BIOCHEMISCHE
UND
IMMUNCHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
PROTEOGLYCAN-FRAGMENTE
44
4.1.2.1
SLOT-BLOT-ENZYM-IMMUNO-ASSAY
44
4.1.2.2
ANALYSE
DER
AMINOSAEUREN-UND
HEXOSAMIN-ZUSAMMENSETZUNG
44
4.1.2.3
ANALYTISCHE
GELPERMEATIONSCHROMATOGRAPHIE
AN
TSK
4000
44
4.1.2.4
SDS-PAGE
UND
DIFFUSIONSBLOT
47
4.1.2.4.1
SDS-PAGE
UND
IMMUNOBLOT
MIT
DEN
MAK
5D4
UND
4B3/D10
47
4.1.2.4.2
SDS-PAGE
UND
DIFFUSIONS-BLOT
DER
MIT
BIOTIN-MARKIERTEN
PROBEN
55
4.2
AUFBAU
EINES
ENZYM-IMMUNO-ASSAYS
ZUR
BESTIMMUNG
VON
KERATANSULFAT
55
4.2.1
AUSWAHL
EINES
GEEIGNETEN
ASSAY-TYPS
55
4.2.1.1
BINDUNGSASSAY
55
4.2.1.2
SANDWICH-IMMUNO-ASSAY
MIT
ZWEI
ANTIKOERPERN
57
4.2.1.3
ANTIGEN-INHIBITIONS-ASSAY
57
4.3
QUALITAETSKONTROLLE
DES
KERATANSULFAT-IMMUNOASSAY
58
4.3.1
BINDUNG
DES
MARKIERTEN
ANTIGENS
UNTER
VERSCHIEDENEN
BEDINGUNGEN
58
4.3.2
BINDUNGS-INHIBITION
58
4.3.3
PRAEZISION
UND
RICHTIGKEIT
59
4.3.4
SPEZIFITAET
59
4.3.5
WIEDERFINDUNG
UND
NACHWEISGRENZEN
59
4.4
KONZENTRATION
VON
KERATANSULFAT
IM
SERUM
59
4.4.1
KERATANSULFAT-SPIEGEL
DER
VERSCHIEDENEN
DIAGNOSE-GRUPPEN
59
M
4.4.2
STATISTISCHE
DISKRIMINANZANALYSE
70
4.4.3
LONGITUDINAL-BEOBACHTUNG
VON
PATIENTEN
MIT
RHEUMATOIDER
ARTHRITIS
70
5.
DISKUSSION
79
5.1
PRAEPARATION
UND
CHARAKTERISIERUNG
DES
ANTIGENS
FUER
DEN
ENZYM-IMMUNOASSAY
80
5.2
AUFBAU
DES
ENZYM-IMMUNOASSAYS
81
5.3
QUANTIFIZIERUNG
VON
KERATANSULFAT-PROTEOGLYCAN
IM
SERUM
MIT
DEN
MAK
5D4
UND
4B3/D10
82
5.3.1
KERATANSULFAT-GEHALT
IN
SEREN
VON
PATIENTEN
MIT
VERSCHIEDENEN
GELENKERKRANKUNGEN
82
5.3.2
VERGLEICH
DER
MESSWERTE
IN
DEN
EINZELNEN
DIAGNOSE-GRUPPEN
82
5.3.2
VERHALTEN
DES
KERATANSULFAT-SPIEGELS
IM
KRANKHEITSVERLAUF
83
6.
ZUSAMMENFASSUNG
85
7.
ANHANG
87
8.
LITERATURVERZEICHNIS
94
IV |
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| author | Kolbe-Busch, Susanne |
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