Verfügbarkeit: Identifizierung und Charakterisierung der an der Adsorption von Pseudorabies-Virus (PrV) beteiligten viralen und zellulären Proteine

Identifizierung und Charakterisierung der an der Adsorption von Pseudorabies-Virus (PrV) beteiligten viralen und zellulären Proteine:

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Bibliographische Detailangaben
1. Verfasser:	Karger, Axel (VerfasserIn)
Format:	Buch
Sprache:	German
Veröffentlicht:	Insel Riems, Boddenblick 1 <<A.>> Karger 1995
Schlagworte:	Aujeszky Virus Hochschulschrift
Online-Zugang:	Inhaltsverzeichnis
Beschreibung:	Zugl.: Tübingen, Univ., Diss., 1995
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adam_text	INHALTSVERZEICHNIS L EINLEITUNG . 1 LA DAS PSEUDORABIESVIRUS . 1 I.B. ADSORPTION UND PENETRATION BEI HSV UND PRV . 5 IC. PROTEOGLYKANE . 7 ID. DER REZEPTORBEGRIFF. . 9 LE. ZIELSETZUNG . 9 II. MATERIAL UND METHODEN . 11 ILA MATERIAL . 11 AL ZELLEN . 11 A2. VIREN. . 11 A.3. ANTIKOERPER UND -SEREN . 13 A4. ENZYME UND ENZYMKONJUGATE, PROTEINE UND GROESSENSTANDARDS . 13 A5. SEREN UND MEDIEN FUER DIE ZELLKULTUR . 13 A.5.1. SEREN . 13 A5.2. MEDIEN . 14 A6. CHEMIKALIEN . 15 A7. RADIOCHEMIKALIEN . 16 A8. GLAS UND PLASTIKWAREN FFIR DIE ZELLKULTUR . 16 A9. GERAETE . 16 A 10. LOESUNGEN UND PUFFER . 18 A 10.1. ALLGEMEINE LOESUNGEN UND PUFFER . 18 A10.2. ADSORPTIONSVERSUCHE MIT BIOTINMARKIERTEM PRV . 18 A.10.3. ADSORPTIONSVERSUCHE MIT [ 3 H]THYMIDIN-MARKIERTEN PR-VIRIONEN . 19 A.10.4. AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE . 19 A10.5. ANIONENAUSTAUSCH-HPLC VON EDTA-EXTRAKTEN AUS MDBK-ZELLEN . 20 A10.6. ANIONENAUSTAUSCH-NIEDERDRUCKCHROMATOGRAPHIE VON HEK8/5.8-EXTRAKTEN AN DEAE-SEPHACEL R. 20 A 10.7. BIOTINYLIERUNG VON VIRIONEN, ZELLEN UND ZELLEXTRAKTEN . 20 A10.8. DNA-BESTIMMUNG NACH BURTON . 21 A.10.9. EXTRAKTION VON MDBK-ZELLEN . 21 A 10.10. IMMOBILISIERUNG VON PROTEINEN AN BRCN-AKTIVIERTER SEPHAROSE R 4B . 21 A 10.11. INFEKTIONSVERSUCHE MIT SS-GALAKTOSIDASE EXPRIMIERENDEN PRV-MUTANTEN (FACS-VERSUCHE) . 22 A 10.12. KOZENTRI&GATION [ 35 S]-MARKIERTER PERIPHERER MEMBRANPROTEINE AUS MDBK ZELLEN MIT PRV . 22 A 10.13. PROTEINBESTIMMUNG NACH PETERSON-LOWRY . 22 A. 10.14. PROTEINBESTIMMUNG NACH SMITH . 23 A. 10.15. PROTEINTRANSFER UND FAERBUNG TRANSFERIERTER PROTEINE AUF NITROZELLULOSEMEMBRANEN . 23 A10.16. SDS-POFYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE . 24 A 10.17. VIRUS OVERLAY PROTEIN BINDING ASSAY . 25 A 10.18. VIRUSREINIGUNG . 26 A. 10.19. ZELLFRAKTIONIERUNG . 26 ALL. ABKUERZUNGEN . 26 UE.B. METHODEN . 28 B. 1. ALLGEMEINE METHODEN . 28 B. 1.1. ZELLKULTUR . 28 B. 1.2. DNA UND PROTEINBESTIMINUNGEN . 28 B.1.3. GEFRIERTROCKNUNG, DIALYSE UND ULTRAFILTRATION . 29 B. 1.4. PROTEINELEKTROPHORESE UND -TRANSFER AUF NITROZELLULOSEMEMBRANEN . 31 B. 1.5. VIRUSANZUCHT UND -REINIGUNG, EXTRAKTION VIRALER GLYKOPROTEINE . 33 B.2. SPEZIELLE METHODEN . 35 B.2.1 ADSORPTIONSVERSUCHE . 35 B.2.2. INFEKTIONSVERSUCHE MIT SS-GALAKTOSIDASE EXPRIMIERENDEN PRV-MUTANTEN . 40 B.2.3. ZELLFRAKTIONIERUNG . 41 B.2.4. FRAKTIONIERUNG VON HEK8/5.8 EXTRAKTEN AUS MDBK-ZELLEN AN ANIONENAUSTAUSCHEM . 43 B.2.5. PRAEPARATION PERIPHERER UND INTEGRALER MEMBRANPROTEINE AUS MDBK-ZELLEN . 44 B.2.6. AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE AN IMMOBILISIERTEN PRV-GLYKOPROTEINEN . 46 B.2.7. KOZENTRIFIIGATION VON RADIOAKTIV MARKIERTEN PERIPHEREN MEMBRANPROTEINEN AUS MDBK-ZELLEN MIT PR-VIRIONEN . 47 B.2.8. METABOLISCHE MARKIERUNG ZELLULAERER PROTEINE MIT [ 3S S]-MARKIERTEN VORLAEUFERN. 48 B.2.9. VIRUS OVERLAY PROTEIN BINDING ASSAY MIT BIOTINYUEERTEN PR-VIRIONEN . 48 HL ERGEBNISSE. 51 HL A ADSORPTIONSVERSUCHE MIT [ 3 H]THYMIDIN-MARKIERTEN VIRIONEN AN GANZEN ZELLEN . 51 AL. ADSORPTIONSHEMMUNG DURCH HEPARIN . 51 A2. DIFFERENZIERUNG DES ADSORPTIONSVORGANGES DER A-HERPESVIREN PRV UND BHV-1 IN VERSCHIEDENE BINDUNGSTYPEN . 56 A3. DAS ADSORPTIONSVERHALTEN VON PRV-WT UND GLYKOPROTEIN-DELETIONSMUTANTEN . 59 A4. KONVERSIONSKINETIK . 62 A5. ADSORPTIONSVERSUCHE BEI RAUMTEMPERATUR, AUF EIS UND AN FIXIERTE ZELLEN . 65 A6. ADSORPTIONSVERSUCHE AN MDBK-ZELLEN NACH VERDAU DURCH HEPARINASE UND HEPARITINASE . 68 A7. ADSORPTIONSVERSUCHE AN NACLOJ-BEHANDELTEN MDBK-ZELLEN . 72 A8. ANTISEREN UND MONOKLONALE ANTIKOERPER . 74 M.B. CHARAKTERISIERUNG DER WECHSELWIRKUNG ZWISCHEN VIRALEN GLYKOPROTEINEN UND ZELLULAEREN HEPARANSULFATTRAGENDEN PROTEOGLYKANEN . 75 B. 1. ADSORPTIONSVERSUCHE AN L UND GRO2C-ZELLEN MIT PRV-WT, PRV-GC UND PRV-GD'. 75 B.2. INFEKTIONSVERSUCHE AN L-, GRO2C UND SOG9-ZELLEN MIT SS-GALAKTOSIDASE EXPRIMIERENDEN PRV-MUTANTEN . 78 M C. IDENTIFIZIERUNG PRV-BINDENDER PROTEINE UND PROTEOGLYKANE IN MDBK-ZELLEN . 81 C. 1. VOPBA AN ZELLFRAKTIONEN UND ZELLEXTRAKTEN . 81 C. 1.1. VOPBA AN FRAKTIONEN VON MDBK-ZELLEN . 82 C. 1.2. VOPBA AN HEK8/5.8-EXTRAKTEN VON MDBK-ZELLEN . 85 C. 1.3. VOPBA AN PERIPHEREN MEMBRANPROTEINEN AUS MDBK-ZELLEN . 95 C.2. AFFIMTAETSCHROMATOGRAPHIE VON EXTRAKTEN AUS MDBK-ZELLEN AN IMMOBILISIERTEN PRV-GLYKOPROTEINEN . 102 C.2.1. EDTA-LOESLICHE PERIPHERE MEMBRANPROTEINE . 102 C.2.2 INTEGRALE MEMBRANPROTEINE . 104 C.3. KOZENTRIFIIGATION VON PRV-WT UND PRV-GC' MIT NA2[ 35 S]SO 4 - UND [ 35 S]METHIONIN MARKIERTEN PERIPHEREN MEMBRANPROTEINEN AUS MDBK-ZELLEN . 107 IV. DISKUSSION. - . 110 IV. A. DIE HEPARINABHAENGIGE ADSORPTION . 110 IVB. ADSORPTION OHNE WECHSELWIRKUNG ZWISCHEN GC UND HEPARANSULFATTRAGENDEN PROTEOGLYKANEN (HEPARINUNABHAENGIGE BINDUNG) . 114 IV.C. DURCH HEPARIN VERMITTELTE BINDUNG VON WACHSTUMSFAKTOREN AN IHRE REZEPTOREN. 115 IV.D. ADSORPTION UND PENETRATION VON PRV UND ANDEREN VIREN . 115 IV.E. KRITISCHE BETRACHTUNG DES VOPBA . 119 IV.F. EIN ADSORPTIONSMODELL FUER PRV . 119 V. ZUSAMMENFASSUNG. 121 VI. 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