Trimerisierung des in-vitro-rekonstituierten Lichtsammelkomplexes höherer Pflanzen und spektroskopische Untersuchungen zur Pigmentorganisation:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Aachen
Mainz
1995
|
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| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Zugl.: München, Univ., Fak. f. Biologie, Diss., 1995 |
| Beschreibung: | 160 S. Ill. |
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
1
1.1
PRIMAERPROZESSE
DER
PHOTOSYNTHESE
UND
DARAN
BETEILIGTE
KOMPONENTEN
.
3
1.2
HINTERGRUENDE
ZU
EIGENSCHAFTEN
UND
FUNKTIONEN
DES
LHCII
.
4
1.2.1
VERWANDTSCHAFT
VON
ANTENNENPROTEINEN
UND
PHYLOGENETISCHER
HINTERGRUND
.
4
1.2.2
DIE
GENFAEMILIE
DER
LHCII-APOPROTEINE
.
5
1.2.3
MINORE UND
MAJORE
ANTENNEN
.
6
1.2.4
EXPRESSION
UND
BIOGENESE
VON
LHCII
.
7
1.2.5
STRUKTURELLE
UND
REGULATORISCHE
ROLLE
DES
LHCII
IM
ANTENNENSYSTEM
.
8
1.3
DREIDIMENSIONALE
STRUKTUR
DES
LHCII
UND
PIGMENTORGANISATION
.
10
1.3.1
DAS
APOPROTEIN
.
11
1.3.2
LIPIDE
.14
1.3.3
PIGMENTE
.
15
1.4
PROBLEMSTELLUNG
.17
2
ERGEBNISSE
UND
DISKUSSION
19
2.1
VERSUCHE
ZUR
OLIGOMERISIERUNG
IN
DER
REKONSTITUTIONSMISCHUNG
.
19
2.1.1
STABILITAET
VON
NATIVEN
TRIMEREN
.
19
2.1.2
REKONSTITUTIONEN
IN
VERSCHIEDENEN
DETERGENSLOESUNGEN
.
20
2.1.3
REKONSTITUTIONEN
IN GEGENWART
CHAOTROPER
ANIONEN
.
20
2.1.4
REKONSTITUTIONEN
MIT
ANSCHLIESSENDEM
DETERGENSWECHSEL
.
21
2.1.5
ZWEIWERTIGE
KATIONEN
OHNE
EINFLUSS
AUF
OLIGOMERISIERUNG
VON
LHCII
.
22
2.1.6
EINFLUSS
VON
LIPIDEN
AUF
DAS
AGGREGATIONSVERHALTEN
VON
REKONSTITUIERTEN
MONOMEREN
.
23
2.1.6.1
VERSUCHE
MIT
GEMISCHTEN
DETERGENS-LIPID-PHASEN
.
24
2.1.6.2
VERSUCHE
MIT
SPEZIFISCHER
EXTRAKTION
VON
DETERGENZIEN
AUS
DETERGENS
LIPIDMISCHUNGEN
.
25
2.1.6.2.1
KDS-FAELLUNG
IN
ANWESENHEIT
VON
LIPIDEN
.
25
2.1.6.2.2
ADSORPTION
VON
LM
AN
BIO-BEADS
IN
ANWESENHEIT
VON
LIPIDEN
.
25
2.1.7
DISKUSSION
.
26
2.2
TRIMERISIERUNG
VON
LHCII
IN
KONZENTRIERTEN,
LIPIDHALTIGEN
SUSPENSIONEN
NACH
ABREICHERUNG
VON
UNGEBUNDENEM
PIGMENT
.
28
2.2.1
PRAEPARATIVE
DARSTELLUNG
EINER
LHCUE-SUSPENSION
.
29
2.2.1.1
REKONSTITUTION
.
29
2.2.1.2
DETERGENSWECHSEL
.
29
2.2.1.3
GELFILTRATION
.
30
2.2.1.4
DEAE-ANIONENAUSTAUSCHERSAEULE
.
30
2.2.1.5
DIALYSE
UND
ULTRAFILTRATION
.
32
2.2.2
VERSCHIEDENE
METHODEN
DER
TRIMERISIERUNG
.
35
2.2.2.1
DIALYSE
.
35
2.2.2.2
SCHUETTELN
.
35
2.2.2.3
KONZENTRIEREN
.
37
2.2.3
DISKUSSION
.
38
2.2.3.1
HERSTELLUNG
DER
LHCII-SUSPENSION
.
38
2.2.3.2
TRIMERISIERUNGSMETHODEN
.
40
2.3
LIPIDABHAENGIGKEIT
DER
TRIMERISIERUNG
VON
LHCII
.
41
2.3.1
DISKUSSION
.
45
2.4
EIN
KURZES
SEQUENZMOTIV
AM
N-TERMINUS
STABILISIERT
LHCII-TRIMERE
.
47
2.4.1
C-TERMINALE
DELETIONSMUTANTEN
.
47
2.4.2
N-TERMINALE
DELETIONS
UND
AUSTAUSCHMUTANTEN
.
48
2.4.3
DISKUSSION
.
50
2.4.3.1
MOEGLICHE
FUNKTIONEN
DES
TRIMERISIERUNGSMOTIVES
.
50
2.4.3.2
DAS
TRIMERISIERUNGSMOTIV
IM
KONTEXT
DER
ORGANISATION
DER
PSII-ANTENNE
.
52
2.5
SPEKTROSKOPISCHE
CHARAKTERISIERUNG
UND
KRISTALLISATION
DER
REKONSTITUIERTEN
TRIMERE
.
56
2.5.1
ZIRKULARDICHROISMUS
VON
NATIVEN
UND
REKONSTITUIERTEN
LHCII-TRIMEREN
.
56
2.5.2
PIGMENTZUSAMMENSETZUNG
UND
WEITERE
SPEKTROSKOPISCHE
CHARAKTERISIERUNG
.
57
2.5.3
ZWEIDIMENSIONALE
KRISTALLE
DER
REKONSTITUIERTEN
TRIMERE
.
59
2.5.3.1
PRAEPARATION
DER
KRISTALLISATIONSPROBE
.
59
2.5.3.1.1
FAELLUNG
IN
KCL
NACH
VERDUENNUNG
UNTER
DIE
DETERGENS-CMC
.
59
2.5.3.1.2
FAELLUNG
IN
KCL
DURCH
ADSORPTION
DES
DETERGENS
AN
BIOBEADS-SM2
.
60
2.5.3.2
CHARAKTERISIERUNG
DER
2D-KRISTALLE
.
61
2.5.4
DISKUSSION
.
62
2.6
UNTERSUCHUNGEN
ZU
PIGMENTWECHSELWIRKUNGEN
IM
LHCII
.
65
2.6.1
CD-SPEKTREN
VON
LHCII-MONOMEREN
MIT
VARIIERTEN
PIGMENTZUSAMMENSETZUNGEN.
67
2.6.1.1
KONTROLLSPEKTREN
.
67
2.6.1.2
LHCII-SPEKTREN
.
71
2.6.2
VERGLEICH
DES
ZIRKULARDICHROISMUS
VON
LHCII-TRIMEREN
UND
MONOMEREN
.
76
2.6.3
DISKUSSION
.
85
2.7
REKONSTITUTION
UND
SPEKTROSKOPISCHE
ANALYSE
VON
LHCB6
(CP24)
.
92
2.7.1
LHCB6-REKONSTITUTIONEN
MIT
PIGMENTVARIATIONEN
.
92
2.7.2
VERGLEICH
DER
SPEKTROSKOPISCHEN
EIGENSCHAFTEN
VON
LHCB6
UND
LHCBL-MONOMEREN
.
93
2.7.3
SPEKTROSKOPISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
REKONSTITUIERTEN
LHCB6-KOMPLEXE
MIT
VERSCHIEDENEN
PIGMENTZUSAMMENSETZUNGEN
.
96
2.7.4
DISKUSSION
.
98
2.8
ABSCHLUSSDISKUSSION
.
102
2.8.1
PIGMENTBEDARF
DER
LHCBL
UND
LHCBOE
REKONSTITUTIONEN
UND
DIE
ORGANISATION
DER
PSII-ANTENNE
.
102
2.8.2
FUNKTION
VON
LIPIDEN
BEI
DER
TRIMERISIERUNG
.103
2.8.3
DER
EINFLUSS
VON
LIPIDEN
AUF
DIE
STRUKTUR
DES
LHCII-MONOMERS
.105
2.8.4
MOEGLICHE
IMPLIKATIONEN
DER
BIOCHEMISCHEN
UND
SPEKTROSKOPISCHEN
ERGEBNISSE
FUER
ORGANISATION
UND
REGULATION
DER
PSII-ANTENNE
.105
3
ZUSAMMENFASSUNG
_
109
4
MATERIAL
UND
METHODEN
_
112
4.1
ALLGEMEINES
.
112
4.2
GERAETE
.
112
4.3
LIPIDISOLIERUNG
.113
4.4
DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE
VON
LIPIDLOESUNGEN
.
114
4.4.1
EINDIMENSIONALE
ENTWICKLUNG
IN
CHLOROFORM/METHANOL/WASSER
(65:25:4)
.
114
4.4
2
EINDIMENSIONALE
ENTWICKLUNG
MIT
ZWEI
AUFEINANDERFOLGENDEN
LAUFMITTELN
.
114
4.5
FAERBUNG
DER
AUFGETRENNTEN
LIPIDE
.
114
4.5.1
8-ANILINONAPHTHALIN-L-SULFONSAEURE
(ANS)
.
114
4.5.2
1.3
%
MOLYBDAEN-(VI)-OXID
IN
4.2
M
SCHWEFELSAEURE
.115
4.5.3
JOD
.115
4.6
ISOLIERUNG
UND
AUFREINIGUNG
VON
CHLOROPHYLLEN
UND
XANTOPHYLLEN
.115
4.6.1
AUFREINIGUNG
VON
CHLOROPHYLL
A
UND
CHLOROPHYLL
B
.
116
4.6.2
AUFREINIGUNG
DER
XANTHOPHYLLE
.
116
4
7
ENTFERNEN
VON
LIPIDEN
AUS
PIGMENTMISCHUNGEN
.
117
4.8
PIGMENTBESTIMMUNGEN
.
117
4.8.1
PHOTOMETRISCHE
BESTIMMUNG
.
118
4.8.2
HPLC
.
118
4.9
ISOLIERUNG
VON
LHCP-EINSCHLUSSKOERPEM
IM
GROSSEN
MASSSTAB
.
119
4.10
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
LHCP-LOESUNGEN
.
120
4.11
ISOLIERUNG
VON
NATIVEM
LHCII
AUS
ERBSE
(NACH
BURKE
ET
AL.,
1978)
.
121
4.12
POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESEN
.
122
4.12.1
PARTIELL
DENATURIEREND
.
122
4.12.2
DENATURIEREND
.
122
4.13
FAERBUNG
VON
PROTEINEN
IM
POLYACRYLAMIDGEL
.
122
4.14
MUTAGENESE
AM
AB80-GEN
.123
4.15
REKONSTITUTION
UND
TRIMERISIERUNG
.123
4.16
NACHWEIS
UND
ISOLIERUNG
DER
TRIMERE
.125
4.16.1
GELELEKTROPHORESE
.125
4.16.2
SACCHAROSEGRADIENTEN
.
125
4.17
PRAEPARATIVE
DARSTELLUNG
VON
REKONSTITUIERTEN
LHCII
TRIMEREN
FUER
DIE
2D-KRISTALLISATION
.
125
4.18
RELATIVE
QUANTIFIZIERUNG
VON
FREIEM
PIGMENT,
MONOMEREN
UND
TRIMEREN
IN
SACCHAROSEGRADIENTEN
.
126
4.19
REKONSTITUTION
MIT
PIGMENTVARIATIONEN
ZUR
CD-ANALYSE
.
127
5
LITERATURVERZEICHNIS
_
128 |
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