Molekularbiologische Feindifferenzierung biotechnologisch genutzter Laktobazillenstämme und ihre Abgrenzung von klinischen Isolaten mit der Arbitrarily-Primed-Polymerase-Chain-Reaction-Methode (AP-PCR):
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1995
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
I.
EINLEITUNG
1
II.
LITERATUROBERSICHT
2
1.
TAXONOMISCHE
STELLUNG
DER
LAKTOBAZILLEN
2
2.
VORKOMMEN
UND
BEDEUTUNG
VON
LAKTOBAZILLEN
3
2.1.
NATUERLICHES
VORKOMMEN
3
2.2.
LEBENSMITTEL
UND
FUTTERMITTEL
4
3.
BIOTECHNISCHER
EINSATZ
VON
LAKTOBAZILLENKULTUREN
4
3.1.
ALS
STARTER-BZW.
PRODUKTIONSKULTUREN
4
A)
IN
MILCHPRODUKTEN
4
B)
IN
FLEISCHPRODUKTEN
5
3.2.
ALS
PROBIOTIKA
6
3.3.
IN
PHARMAZEUTISCHEN
PRAEPARATEN
6
4.
GESUNDHEITLICH
BEDENKLICHE
LAKTOBAZILLEN
BZW.
POTENTIELLE
PATHOGENITAET
7
5.
MODERNE
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
ALS
INTRASPEZIFISCHE
DIFFERENZIERUNGSKRITERIEN
9
5.1.
DIE
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
9
5.1.1.
DAS
PRINZIP
DER
POLYMERASE-KETTENREAKTION
10
5.1.2.
ANWENDUNGSMOEGLICHKEITEN
DER
POLYMERASE-KETTENREAKTION
11
5.2.
DAS
AP-PCR-/RAPD-VERFAHREN
12
5.2.1.
DAS
PRINZIP
DER
AP-PCR
12
5.2.2.
ANWENDUNGSMOEGLICHKEITEN
DER
AP-PCR
12
5.3.
VERGLEICH
DER
AP-PCR-METHODE
MIT
ANDEREN
MOLEKULAR
BIOLOGISCHEN
DIFFERENZIERUNGSMETHODEN
14
5.4.
DIE
REAKTIONSKOMPONENTEN
15
5.4.1.
AUSWAHL
GEEIGNETER
PRIMER
15
5.4.1.1.
PRIMERIAENGE
15
5.4.1.2.
PRIMERDESIGN
16
5.4.1.3.
PRIMERKONZENTRATION
17
5.4.2.
POLYMERASE
17
III.
EIGENE
UNTERSUCHUNGEN
1.
MATERIAL
19
1.1.
BAKTERIENSTAEMME
19
1.2.
NAEHRMEDIEN
ZUR
STAMMHALTUNG
UND
KULTIVIERUNG
27
1.3.
REAGENZIEN
ZUR
ISOLIERUNG
DER
DNS
UND
FUER
DIE
PCR
27
1.4.
ARBEITSGERAETE
UND
MATERIAL
29
2.
METHODIK
31
3.
ERGEBNISSE
35
3.1.
GELELEKTROPHORETISCHE
AUSWERTUNG
DER
DNS-AMPLIFIKATE
35
3.1.1.
EIGNUNG
UNTERSCHIEDLICHER
PRIMER
35
3.1.2.
KONTROLLE
DER
WIEDERHOLBARKEIT
DER
ERGEBNISSE
35
3.1.2.1.
ANZAHL
VON
DNS-AMPLFFIKATEN
35
3.1.2.2.
INTENSITAET
NACHWEISBARER
DNS-AMPLIFIKATE
36
3.1.3.
TYPGRUPPENEINTEILUNG
36
3.2.
FEINDIFFERENZIERUNG
INNERHALB
DER
VERSCHIEDENEN
LAKTOBAZILLENSPEZIES
38
3.2.1.
INTRASPEZIFISCHE
FEINDIFFERENZIERUNG
VON
LACTOBACILLUS
RHAMNOSUS-STAEMMEN
MIT
DEM
PRIMER
4
38
3.2.2.
INTRASPEZIFISCHE
FEINDIFFERENZIERUNG
VON
LACTOBACILLUS
RHAMNOSUS-STAEMMEN
MIT
DEM
PRIMER
5
41
3.2.3.
VERGLEICHENDE
GEGENUEBERSTELLUNG
DER
TYPGRUPPEN
EINTEILUNGEN
BEI
LACTOBACILLUS
RHAMNOSUS
MIT
PRIMER
4
UND
PRIMER
5
46
3.2.4.
VERGLEICH
DER
BEIDEN
PRIMER
BEZUEGLICH
IHRER
FAEHIGKEIT
ZUR
SPEZIESIDENTIFIZIERUNG
VON
L.
RHAMNOSUS
47
3.2.5.
INTRASPEZIFISCHE
FEINDIFFERENZIERUNG
VON
LACTOBACILLUS
ACIDOPHILUS-STAEMMEN
MIT
DEM
PRIMER
4
48
3.2.6.
INTRASPEZIFISCHE
FEINDIFFERENZIERUNG
VON
LACTOBACILLUS
ACIDOPHILUS-STAEMMEN
MIT
DEM
PRIMER
5
51
3.2.7.
VERGLEICHENDE
GEGENUEBERSTELLUNG
DER
TYPGRUPPEN
EINTEILUNGEN
BEI
LACTOBACILLUS
ACIDOPHILUS
MIT
PRIMER
4
UND
PRIMER
5
55
3.2.8.
VERGLEICH
DER
BEIDEN
PRIMER
BEZUEGLICH
IHRER
FAEHIGKEIT
ZUR
SPEZIESIDENTIFIZIERUNG
VON
L.
ACIDOPHILUS
56
3.2.9.
INTRASPEZIFISCHE
FEINDIFFERENZIERUNG
VON
LACTOBACILLUS
GASSERI-STAEMMEN
MIT
DEM
PRIMER
4
57
3.2.10.
INTRASPEZIFISCHE
FEINDIFFERENZIERUNG
VON
LACTOBACILLUS
GASSERI-STAEMMEN
MIT
DEM
PRIMER
5
60
3.2.11.
VERGLEICHENDE
GEGENUEBERSTELLUNG
DER
TYPGRUPPEN
EINTEILUNGEN
BEI
LACTOBACILLUS
GASSERI
MIT
PRIMER
4
UND
PRIMER
5
63
3.2.12.
VERGLEICH
DER
BEIDEN
PRIMER
BEZUEGLICH
IHRER
FAEHIGKEIT
ZUR
SPEZIESIDENTIFIZIERUNG
VON
L.
GASSERI
64
3.2.13.
INTRASPEZIFISCHE
FEINDIFFERENZIERUNG
VON
LACTOBACILLUS
CRISPATUS-STAEMMEN
MIT
DEM
PRIMER
4
65
3.2.14.
INTRASPEZIFISCHE
FEINDIFFERENZIERUNG
VON
LACTOBACILLUS
CRISPATUS-STAEMMEN
MIT
DEM
PRIMER
5
67
3.2.15.
VERGLEICHENDE
GEGENUEBERSTELLUNG
DER
TYPGRUPPEN
EINTEILUNGEN
BEI
LACTOBACILLUS
CRISPATUS
MIT
PRIMER
4
UND
PRIMER
5
69
3.2.16.
VERGLEICH
DER
BEIDEN
PRIMER
BEZUEGLICH
IHRER
FAEHIGKEIT
ZUR
SPEZIESIDENTIFIZIERUNG
VON
L.
CRISPATUS
69
3.2.17.
INTRASPEZIFISCHE
FEINDIFFERENZIERUNG
VON
LACTOBACILLUS
CASEI
UND
LACTOBACILLUS
PARACASEF-STAEMMEN
MIT
DEM
PRIMER
4
71
3.2.18.
INTRASPEZIFISCHE
FEINDIFFERENZIERUNG
VON
LACTOBACILLUS
CASEI
UND
LACTOBACILLUS
PARACASEI-STAEMMEN
MIT
DEM
PRIMER
5
73
3.2.19.
VERGLEICHENDE
GEGENUEBERSTELLUNG
DER
TYPGRUPPEN
EINTEILUNGEN
BEI
LACTOBACILLUS
CASEI
UND
LACTOBACILLUS
PARACASEI
MIT
PRIMER
4
UND
PRIMER
5
75
3.2.20.
VERGLEICH
DER
BEIDEN
PRIMER
BEZUEGLICH
IHRER
FAEHIGKEIT
ZUR
SPEZIESIDENTIFIZIERUNG
VON
L.
CASEI/L.
PARACASEI
76
3.2.21.
INTRASPEZIFISCHE
FEINDIFFERENZIERUNG
VON
LACTOBACILLUS
JOHNSONII-STAEMMEN
MIT
DEM
PRIMER
4
77
3.2.22.
INTRASPEZIFISCHE
FEINDIFFERENZIERUNG
VON
LACTOBACILLUS
JOHNSONII-STAEMMEN
MIT
DEM
PRIMER
5
77
3.2.23.
VERGLEICHENDE
GEGENUEBERSTELLUNG
DER
TYPGRUPPEN
EINTEILUNGEN
BEI
LACTOBACILLUS
JOHNSONII
MIT
PRIMER
4
UND
PRIMER
5
80
3.3.
KENNZEICHNENDE
DNS-AMPLIFIKATE
FUER
DIE
IDENTIFIZIERUNG
AUF
SPEZIESEBENE
81
IV.
DISKUSSION
83
1.
BEWERTUNG
DER
ERGEBNISSE
BEI
DEN
L.
RHAMNOSUS-STAEMMEN
83
2.
BEWERTUNG
DER
ERGEBNISSE
BEI
DEN
L.
ACIDOPHILUS-STAEMMEN
86
3.
BEWERTUNG
DER
ERGEBNISSE
BEI
DEN
L.
GASSERI-STAEMMEN
88
4.
BEWERTUNG
DER
ERGEBNISSE
BEI
DEN
L.
CRISPATUS-STAEMMEN
90
5.
BEWERTUNG
DER
ERGEBNISSE
BEI
DEN
L.
CASEI-/PARACASEI
STAEMMEN
91
6.
BEWERTUNG
DER
ERGEBNISSE
BEI
DEN
L.
JOHNSONII-STAEMMEN
92
7.
ZUR
STAMMAUSWAHL
93
8.
ZUR
METHODENWAHL
93
9.
ZUR
ANWENDUNG
DER
AP-PCR-METHODE
95
10.
DIE
ZUVERLAESSIGKEIT
DER
METHODE
BEEINFLUSSENDE
FAKTOREN
96
V.
SCHLUSSFOLGERUNGEN
99
VI.
ZUSAMMENFASSUNG
100
VII.
SUMMARY
103
VIII.
ANHANG
106
IX.
LITERATURVERZEICHNIS
114 |
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| author | Piehl, Irene |
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