Herstellung von virusspezifischen vitellinen Antikörpern und deren Einsatz im direkten Immunfluoreszenztest zum Nachweis der Erreger der Geflügelkrankheiten Newcastle Disease, Infektiöse Bronchitis und Gumboro Disease:
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1995
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
8
A.
EINLEITUNG
UND
ZIELSETZUNG
9
B.
LITERATURUEBERSICHT
12
1.
IMMUNFLUORESZENZ
12
2.
EIDOTTERANTIKOERPER
23
C.
MATERIAL
UND
METHODEN
26
1.
VERSUCHSTIERE
26
1.1.
LEGEHENNEN
ZUR
ERZEUGUNG
VITELLINER
ANTIKOERPER
26
1.2.
KUEKEN
ZUR
EXPERIMENTELLEN
INFEKTION
26
2.
VIRUSSTAEMME
27
2.1.
IMPFSTOFFE
ZUR
IMMUNISIERUNG
DER
LEGEHENNEN
27
2.2.
LABORSTAEMME
ZUR
VERMEHRUNG
IN
ZELLKULTUREN
27
2.3.
IMPFSTOFFE
ZUR
INFEKTION
VON
KUEKEN
28
3.
ZELLKULTUREN
ZUR
VIRUSVERMEHRUNG
28
3.1.
HUEHNEREMBRYOFIBROBLASTENKULTUREN
28
3.2.
DECKGLASZELLKULTUREN
29
4.
VIRUSKONZENTRIERUNG
31
5.
ENZYMKONJUGATE
UND
REFERENZSERA
32
6
INHALTSVERZEICHNIS
6.
GEWINNUNG
DIAGNOSTISCHER
ANTIKOERPER
32
6.1.
IMMUNISIERUNG
DER
LEGEHENNEN
32
6.2.
GEWINNUNG
VON
SERUM
UND
EIERN
34
6.3.
PRAEPARATION
DER
EIDOTTER
34
7.
INDIREKTER
ELISA
ZUR
MESSUNG
DER
AKTIVITAET
DER
ANTIVIRALEN
VITELLINEN
ANTIKOERPER
35
7.1.
DURCHFUEHRUNG
DES
ELISA
35
7.2.
BESTIMMUNG
DER
ANTIKOERPERTITER
VON
HUEHNERSEREN
UND
EIDOTTERN
37
8.
ISOLIERUNG
VON
GAMMAGLOBULINEN
AUS
DEM
EIGELB
39
9.
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHISCHE
REINIGUNG
DER
IMMUNGLOBULINE
41
9.1
IMMOBILISATION
DES
LIGANDEN
41
9.2.
ADSORPTION
DER
SPEZIFISCHEN,
ANTIVIRALEN
IMMUNGLOBULINE
42
9.3.
ELUTION
DER
SPEZIFISCHEN
ANTIVIRALEN
IMMUNGLOBULINE
42
10.
KONJUGATION
DER
IMMUNGLOBULINE
MIT
FLUORESZEINISOTHIOZYANAT
45
11.
ADSORPTION
DER
KONJUGATE
47
12.
PRUEFUNG
DER
SPEZIFITAET
UND
DER
SENSITIVITAET
DER
FITC-KONJUGATE
49
13.
EXPERIMENTELLE
INFEKTION
VON
KUEKEN
51
C.
ERGEBNISSE
53
1.
ANTIKOERPERTITER
IN
SERUM
UND
EIDOTTER
53
INHALTSVERZEICHNIS
7
2.
INDIREKTER
ELISA
ZUR
FESTSTELLUNG
DER
ANTIKOERPERBILDUNG
IN
SERUM
UND
EIDOTTER
61
3.
ISOLIERUNG
DER
IMMUNGLOBULINE
AUS
DEM
EIGELB
72
4.
SPEZIFITAET
UND
TITER
DER
IMMUNFLUORESZENZKONJUGATE
72
5.
EXPERIMENTELLE
INFEKTION
EMPFAENGLICHER
KUEKEN
77
E.
DISKUSSION
81
1.
ANTIKOERPERTITER
IN
SERUM
UND
DOTTER
81
2.
INDIREKTER
ELISA
ZUR
FESTSTELLUNG
DER
ANTIKOERPERBILDUNG
IN
SERUM
UND
EIDOTTER
85
3.
ISOLIERUNG
DER
IMMUNGLOBULINE
AUS
DEM
EIGELB
86
4.
SPEZIFITAET
UND
TITER
DER
IMMUNFLUORESZENZKONJUGATE
88
5.
EXPERIMENTELLE
INFEKTION
EMPFAENGLICHER
KUEKEN
90
F.
ZUSAMMENFASSUNG
94
G.
SUMMARY
95
H.
LITERATURVERZEICHNIS
96
ANHANG |
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| author | Gervelmeyer, Andrea |
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