Untersuchungen zur Aktivierung der ras-Onkogene bei humanen Melanomen:
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1995
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
1.1
ONKOGENE
UND
KANZEROGENESE
1
1.2
DIE
GRUPPE
DER
RAS-ONKOGENE
4
1.2.1
DAS
P21-RS
PROTEIN
ALS
EIN
G-PROTEIN
6
1.3
DAS
MALIGNE
MELANOM
11
1.3.1
DEFINITION
11
1.3.2
INZIDENZ
UND
EPIDEMIOLOGIE
12
1.3.3
KLINISCH-PATHOLOGISCHE
VARIANTEN
DES
PRIMAER
13
MALIGNEN
MELANOMS
1.3.4
PATHOLOGISCH-PROGNOSTISCHE
GESICHTSPUNKTE
14
1.4
DAS
MALIGNE
MELANOM
UND
DIE
AKTIVIERUNG
15
DER
RAS-ONKOGENFAMILIE
1.4.2
FRAGESTELLUNG
DER
VORLIEGENDEN
ARBEIT
17
2.
MATERIAL
&
METHODEN
19
2.1
TUMORMATERIAL
19
2.2
AUFARBEITUNG
DES
GEWEBES
ZUR
GEWINNUNG
23
HOCHMOLEKULARER,
GENOMTSCHER
DNA
2.3
AUFREINIGUNG
DER
ISOLIERTEN
GENOMISCHEN
DNA
24
2.3.1
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
25
2.3.1.1
CHEMIKALIEN
UND
GERAETE
25
2.3.1.2
PRINZIP
DER
DNA-AUFTRENNUNG
DURCH
ELEKTROPHORESE
25
2.3.1.3
DARSTELLUNG
DER
EINZELNEN
SCHRITTE
26
2.3.2
ISOLIERUNG
SPEZIFISCHER
DNA-FRAGMENTE
26
DURCH
ELEKTROELUTION
2.3.3
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
DER
DNA
28
2.4
SYNTHESE
VON
OLIGONUKLEOTIDEN
29
2.4.1
REAGENZIEN
UND
LOESUNGEN
29
2.4.2
DURCHFUEHRUNG
30
2.4.3
AUFARBEITUNG
DES
SYNTHESEPRODUKTES
31
2.5
POLYMERASE
CHAIN
REACTION
(PCR)
33
2.5.1
REAGENZIEN
UND
LOESUNGEN
33
2.5.2
DAS
PRINZIP
DER
PCR-METHODE
36
2.5.3
DURCHFUEHRUNG
37
2.5.4
GELELEKTROPHORETISCHE
BEURTEILUNG
DES
PCR-PRODUKTS
39
2.6
PCR
MIT
ALIELSPEZIFISCHEN
RESTRIKTIONSFRAGMENTANALYSEN
40
(RFLP/PCR)
2.6.1
DAS
PINZIP
DER
RFLP/PCR-METHODIK
40
2.6.2
METHODISCHE
ANFORDERUNGEN
42
2.6.3
VOR
UND
NACHTEILE
DER
RFLP/PCR-METHODIK
45
2.6.4
DURCHFUEHRUNG
49
2.7
REINIGUNG
DES
PCR-PRODUKTES
50
2.8
ASYMMETRISCHE
PCR
50
2.9
DIREKTE
DNA
SEQUENZIERUNG
VON
PCR-PRODUKTEN
51
2.9.1
CHEMIKALIEN
UND
LOESUNGEN
52
2.9.2
VORBEREITUNG
DES
SEQUENZIERGELS
53
2.9.3
DURCHFUEHRUNG
54
2.10
ANREICHERUNG
DES
MUTIERTEN
ALLELS
56
3.
ERGEBNISSE
57
3.1
HAEUFIGKEIT
DER
PUNKTMUTATIONEN
57
3.2
BETEILIGUNG
DER
DREI
RAS-GENE
57
3.3
RAS-MUTATION
UND
DER
HISTOPATHOLOGISCHE
TYP
DES
MELANOMS
57
3.4
CHARAKTERISIERUNG
DER
PUNKTMUTATION
58
3.5
LOKALISATION
DERTUMORIAESIONEN
58
4.
DISKUSSION
66
4.1
AUSWAHL
UND
ETABLIERUNG
DER
METHODIK
66
4.2
VERTEILUNG
DER
AKTIVIERUNGSHAEUFIGKEIT
EINZELNER
RAS-GENE
BEIM
MELANOM
67
4.3
ERWORBENE
NAEVI
ALS
VORSTUFE
DES
MELANOMS
?
FRAGE
NACH
AKTIVIERUNG
DES
RAS-GENS
IN
NAEVI.
68
4.3.1
DER
KONGENITAL-NAEVUS.
EIN
SONDERFALL?
70
4.4
DIE
BEDEUTUNG
DES
RAS-GENS
IM
MALIGNEN
MELANOM
72
4.5
BEZIEHUNGEN
ZWISCHEN
UV-STRAHLUNG,
MALIGNEM
MELANOM
UND
RAS-ONKOGEN
75
4.6
SCHLUSSFOLGERUNG
79
5.
ZUSAMMENFASSUNG
80
6.
LITERATURVERZEICHNIS
82 |
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