Untersuchung von zellulären Wechselwirkungen in der frühen Neurogenese von Drosophila melanogaster:
Gespeichert in:
1. Verfasser: | |
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Format: | Buch |
Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
1994
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Beschreibung: | Köln, Univ., Diss., 1995 |
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105
INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
1.1.
DETERMINATION
UND
REGULATIVE
KAPAZITAETEN
1
1.2.
NEUROGENESE
2
1.3.
GENETISCHE
ASPEKTE
DER
NEUROGENESE
2
1.4.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
UND
BIOCHEMISCHE
ASPEKTE
DER
NEUROGENESE
3
1.5.
DAS
MODELL
DER
LATERALEN
INHIBITION
4
1.6.
THEMENSTELLUNG:
5
2.
MATERIAL:
7
2.1.
MATERIAL
FUER
TRANSPLANTATIONSEXPERIMENTE
7
2.1.1.
CHEMIKALIEN:
7
2.1.2.
LOESUNGEN:
7
2.1.3.
GERAETE:
8
2.1.4.
MIKROSKOPIE
UND
DOKUMENTATION:
8
2.1.5.
SONSTIGES:
9
2.2.
MATERIALIEN
FUER
DIE
IN
SITU
RNA
HYBRIDISIERUNG
AN
EMBRYONEN
9
3.
METHODEN
11
3.1.
ARBEIT
MIT
FLIEGEN
11
3.1.1.
FLIEGENAUFZUCHT
11
3.1.2
FLIEGENSTAENUNE:
11
3.2.
KREUZUNGEN
12
3.2.1.
EINFUEHRUNG
EINES
EPIDERMALEN
SS-GALAKTOSIDASE
MARKERS
IN
EINEN
N55EL
1
HINTERGRUND
12
3.2.2.
EINFUEHRUNG
EINES
EPIDERMALEN
LACZ
MARKERS
IN EINEN
DLFX3
HINTERGRUND
14
3.2.3.
EINFUEHRUNG
DER
BIG
BRAIN
DELETION
IH9-5
IN
EINEN
NOTCH55EL
1
HINTERGRUND
15
3.2.4.
EINFUEHRUNG
MEHRERER
NOTCH
WILDTYP
KOPIEN
IN
EINEN
STAMM
17
3.2.4.I.
EIABLAGE:
19
3.3.
METHODEN
DER
TRANSPLANTATIONSTECHNIK
19
3.3.1.
VORBEREITUNG
DER
TRANSPLANTATION:
19
3.3.1.1.
HERSTELLUNG
DER
GLASKAPILLAREN
FUER
INJEKTION
UND
TRANSPLANTATION
19
3.3.2.
VORBEREITUNG
DER
EMBRYONEN
20
3.3.2.1.
DECHORIONISIEREN
DER
EMBRYONEN
20
3.3.2.2.
DIE
INJEKTION
DER
ZELLMARKER
20
3.3.3.
DIE
TRANSPLANTATIONSTECHNIK
21
3.3.4.
WEITERENTWICKLUNG
DER
EMBRYONEN
21
3.3.5.
PRAEPARATION,
FIXATION
UND
FAERBUNG
22
3.3.5.1.
PRAEPARATION
UND
FIXIERUNG
DER
EMBRYONEN:
22
3.3.5.2.
FAERBUNGEN:
23
3.3.5.2.1.NACHWEIS
VON
HRP:
23
3.3.5.2.2.NACHWEIS
VON
SS-GALAKTOSIDASE
23
3.3.5.2.3.NACHWEIS
VON
SS-GALAKTOSIDASE
UND
HRP
AN
EINEN
PRAEPARAT
23
3.3.6.
EINBETTENGEN:
23
3.3.6.1.
EINBETTUNG
DER
FIXIERTEN
PRAEPARATE
IN
KUNSTHARZ:
23
3.3.6.2.
AUFNAHME
DER
IN
KUNSTHARZ
EINGEBETTETEN
PRAEPARATE
IN
BOROSILIKATKAPILLAREN:
24
3.4.
IN
SITU
RNA-HYBRIDISIERUNG
AN
EMBRYONEN
24
3.4.1.
DIGOXIGENIN-MARKIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
24
3.4.2.
CHEMISCHE
DECHORIONISIERUNG
FIXIERUNG
UND
CHEMISCHE
DEVITELLINISIERUNG
VON
EMBRYONEN
24
106
3.4.3.
IN
SITU
RNA
HYBRIDISIERUNG
25
3.5.
DOKUMENTATION:
26
4.
ERGEBNISSE
27
4.1
AUSWERTUNG
DER
TRANSPLANTATIONEN:
27
4.1.1
.
EKTODERMALE
REGIONEN,
DIE
ANLAGEKARTE
VON
DROSOPHILA
MELANOGASTER
ZU
BEGINN
DER
GASTRULATION
27
4.1.2.
BESCHREIBUNG
DER
HISTOTYPCN
UND
KLONGROESSEN
28
4.1.3.
KRITERIEN
ZUR
BEURTEILUNG
MUTANTER
PHAENOTYPEN
VON
SPENDER-ODER
WIRTSEMBRYONEN:
30
4.2.
TRANSPLANTATIONEN
ZUR
UNTERSUCHUNG
VON
ZELL-ZELL-INTERAKTIONEN
IM
EKTODERM
VON
WILDTYPEMBIYONEN
39
4.2.1.
TRANSPLANTATION
EINZELNER
ZELLEN
AUS
DER
PNR
VON
WT
EMBRYONEN
IN
DIE
PNR
VON
WT
EMBRYONEN
39
4.2.2.
TRANSPLANTATION
EINZELNER
ZELLEN
AUS
DER
VNR
VON
WT EMBRYONEN
IN
DIE
PNR
VON
WT
EMBRYONEN
40
4.2.3.
TRANSPLANTATION
VON
EINZELNEN
ZELLEN
AUS
DER
DEA
VON
WT
EMBRYONEN
IN
DIE
PNR
VON
WT
EMBRYONEN
41
4.2.4.
TRANSPLANTATION
EINZELNER
ZELLEN
AUS
DER
PNR
VON
WT
EMBRYONEN
IN
DIE
DEA
VON
WT
EMBRYONEN
43
4.2.5.
TRANSPLANTATION
EINZELNER
ZELLEN
AUS
DER
PNR
VON
WT
EMBRYONEN
IN
DIE
VNR
VON
WT
EMBRYONEN
44
4.2.6.
TRANSPLANTATION
EINZELNER
ZELLEN
AUS
DER
DEA
VON
WT
EMBRYONEN
IN
DIE
DEA
VON
WT
EMBRYONEN
45
4.2.7.
TRANSPLANTATION
EINZELNER
ZELLEN
AUS
DER
VNR
VON
WT
EMBRYONEN
IN
DIE
PROCTODAEUMANLAGE
VON
WT
EMBRYONEN
46
4.2.8.
TRANSPLANTATION
VON
GRUPPEN
VON
ZELLEN
AUS
DER
DEA
VON
WT
EMBRYONEN
IN
DIE
VNR
VON
WT
EMBRYONEN
47
4.2.9.
TRANSPLANTATION
EINZELNER
ZELLEN
AUS
DER
DEA
VON
WT
EMBRYONEN
IN
DIE
PROCTODAEUMANLAGE
VON
WT
EMBRYONEN
49
4.3.
TRANSPLANTATIONEN
AUS
UND
IN
NEUROGENE
MUTANTEN;
VERSUCH
EINER
FUNKTIONSANALYSE
50
4.3.1.
EINFUHRENDE
BEMERKUNG:
50
4.3.2.
ZUM
TRANSPLANTATIONSVERFAHREN
AUS
UND
IN
NEUROGENE
MUTANTEN
51
4.3.3.
TRANSPLANTATION
EINZELNER
ZELLEN
AUS
DER
VNR
VON
N8
EMBRYONEN
IN
DAS
VNR
VON
WT
EMBRYONEN
51
4.3.4.
TRANSPLANTATION
EINZELNER
ZELLEN
AUS
DER
VNR
VON
N55EL
1
EMBRYONEN
IN
DIE
VNR
VON
N55ELL
EMBRYONEN.
52
4.3.5.
TRANSPLANTATION
EINZELNER
ZELLEN
AUS
DER
VNR
VON
N55ELL
EMBRYONEN
IN
DIE
PNR
VON
WT
EMBRYONEN
54
4.3.6.
TRANSPLANTATION
EINZELNER
ZELLEN
AUS
DER
VNR
VON
N55EL
1
EMBRYONEN
IN
DAS
PROCTODAEUM
VON
WT
EMBRYONEN
56
4.3.7
TRANSPLANTATION
EINZELNER
ZELLEN
AUS
DER
VNR
VON
WILDTYP
EMBRYONEN,
IN
DIE
VNR
VON
N55EL
1
EMBRYONEN
57
4.3.8.
TRANSPLANTATION
VON
GRUPPEN
AUS
10
BIS
12
ZELLEN
AUS
DER
VNR
VON
N55ELL
EMBRYONEN
IN
DIE
VNR
VON
WT
EMBRYONEN
59
4.3.9.
TRANSPLANTATION
EINZELNER
ZELLEN
AUS
DER
VNR
EINES
STAMMES,
DER
MEHRERE
KOPIEN
DES
NOTCH
WILDTYPGENES
ENTHAELT,
IN
DIE
VNR
VON
WILDTYP
EMBRYONEN.
62
4.3.10.
TRANSPLANTATION
EINZELNER
ZELLEN
AUS
DER
VNR
EINES
STAMMES,
DER
MEHRERE
KOPIEN
DES
NOTCH
WILDTYPGENES
ENTHAELT
IN
DIE
PNR
VON
WILDTYP
EMBRYONEN.
63
4.3.11.
TRANSPLANTATION
EINZELNER
ZELLEN
AUS
DER
VNR
EINES
STAMMES,
DER
MEHRERE
KOPIEN
DES
NOTCH
WILDTYPGENES
ENTHAELT,
IN
DAS
PROCTODAEUM
VON
WILDTYP
EMBRYONEN.
65
107
4.3.12.
TRANSPLANTATION
EINZELNER
ZELLEN
AUS
DER
VNR
VON
EMBRYONEN,
DIE
DIE
MUTATIONEN
N55EL
1
UND
BIBIII9-5
HOMOZYGOT
TRUGEN,
IN
DIE
VNR
VON
WT
EMBRYONEN.
66
4.3.13.
TRANSPLANTATION
EINZELNER ZELLEN
AUS
DER
VNR
VON
NOTCH55ELL
EMBRYONEN
IN
DIE
VNR
VON
DORSAL2
EMBRYONEN
68
4.3.14.
TRANSPLANTATION
EINZELNER
ZELLEN
AUS
DER
VNR
VON
WT
EMBRYONEN
IN
DIE
VNR
VON
DELTA
FX3
EMBRYONEN
69
4.4.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
BEDEUTUNG
DER
GENE
LETHAL
OF
SCUTE
UND
DAUGHTERLESS
BEI
DER
DICHOTOMEN
ENTSCHEIDUNGSFINDUNG
IN
DER
VENTRALEN
NEUROGENEN
REGION
71
4.4.1.
TRANSPLANTATION
EINZELNER
ZELLEN
AUS
DER
PROCTODAEUMANLAGE
VON
SPENDEREMBTYONEN,
DIE
DIE
GENE
DAUGHTERLESS
UND
LETHAL
OF
SCUTE
UBIQUITAER
EXPRIMIEREN,
IN
DIE
VNR
VON
WILDTYPEMBRYONEN.
71
4.4.2.
TRANSPLANTATION
EINZELNER
ZELLEN
AUS
DER
PROCTODAEUMANLAGE
VON
SPENDEREMBTYONEN,
DIE
DAS
GEN
LETHAL
OF
SCUTE
UBIQUITAER
EXPRIMIEREN,
IN
DIE
VNR
VON
WILDTYPEMBRYONEN.
73
5.
DISKUSSION
76
5.1.
GRENZEN
UND
REGIONEN IM
EKTODERM
76
5.2.
DETERMINATION
UND
REGULATORISCHE
SIGNALE
IM
EKTODERM
76
5.3.
CHARAKTERISIERUNG
VERSCHIEDENER
REGIONEN DES
EKTODERMS
ANHAND
DES
VERHALTENS
IHRER
KONSTITUIERENDEN
ZELLEN
IN
SITU
UND
NACH
HETEROTOPER
TRANSPLANTATION.
77
5.4.
DIE
PNR
IST
EINE
REGION
OHNE
EPIDERMOGENEN
KAPAZITAETEN
UND
BESITZT
NEURALISIERENDE
QUALITAETEN
78
5.5.
DIE
DEA
IST
EINE
REGION
MIT
EPIDERMOGENER
KAPAZITAET
UND
BESITZT
EPIDERMALISIERENDE
QUALITAET
79
5.6.
DAS
PROCTODAEUM
IST
EINE
REGION,
IN
DER
WEDER
NEURALISIERENDE
NOCH
EPIDERMALISIERENDE
SIGNALE
AKTIV
SIND
80
5.7.
DIE
VNR
IST
EINE
REGION,
IN
DER
SOWOHL
NEURALISIERENDE
ALS
AUCH
E
PIDERMALISIERENDE
SIGNALE VORLIEGEN
81
5.8.
EINZELNE
NOTCH
DEFIZIENTE
ZELLEN
VERHALTEN
SICH
NICHT ZELLAUTONOM
81
5.9.
ZELLEN
OHNE
AKTIVE
NOTCH
-
FUNKTION
KOMMUNIZIEREN
MIT
IHREN
NACHBARN
83
5.10.
GROESSERE
TRANSPLANTATE
VON
NOTCH
DEFIZIENTEN
ZELLEN
VERHALTEN
SICH
ZELLAUTONOM
84
5.11.
HINWEISE
FUER
EINE
REZEPTORFIMKTION
FUER
NOTCH
85
5.12.
BESTEHEN
IM
VENTRALEN
NEUROEKTODERM
REDUNDANTE
REZEPTORFUKTIONEN
FUER
DAS
LATERAL
INHIBIERENDE
SIGNAL?
86
5.13.
EINFLUESSE
DES
MESODERMS
AUF
DIE
ENTWICKLUNG
DES
EKTODERMS
88
5.14.
DELTA
IST
DAS
SIGNAL
DER
LATERALEN
INHIBITION
89
5.15.
DIE
BEDEUTUNG
DER
GENE
DAUGHTERLESS
UND
LETHAL
OF
SCUTE
FUER
DAS
NCUROEKTODERMALE
ZELLSCHICKSAL
90
5.16.
DIE
METHODE:
92
5.16.1.
DIE
VERWENDUNG
VON
HRP
ALS
LINEAGE-MARKER:
92
5.16.2.
DIE
TRANSPLANTATIONSTECHNIK:
92
6.
ZUSAMMENFASSUNG
95
6.
LITERATURVERZEICHNIS
97 |
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