Die Rolle von Pendulin aus Drosophila melanogaster und seines verwandten Proteins Srp1 aus Saccharomyces cerevisiae bei der Zellproliferation:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Medvode, Preska c. 26
<<P.>> Küssel
1995
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
.
1
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
9
2.1.
DROSOPHILA-MEUEIODEN
.
9
2.1.1.
ALLGEMEINE
DROSOPHILA-MEFHODEN
.
9
2.1.2.
P-ELEMENT-MUTAGENESE
UND
PLASMIDRETTUNG
.
9
2.1.3.
HERSTELLUNG
DER
PENDULIN-TRANSFORMANTE
.
10
2.1.4.
ANTIKOERPERFAERBUNG
VON
GANZEN
EMBRYONEN
.
10
2.1.5.
EINBAU
VON
5-BROMODESOXYURIDIN
IN
LARVALE
GEWEBE
.
11
2.1.6.
PRAEPARATION
GENOMISCHER
DNA
AUS
EMBRYONEN
UND
FLIEGEN
.
11
2.1.7.
PROTEINEXTRAKTE
AUS
EMBRYONEN
UND
FLIEGEN
.
12
2.1.8.
IN
SITU
HYBRIDISIERUNG
AN
RIESENCHROMOSOMEN
.
12
2.1.9.
GEHIM-QUETSCH-PRAEPARATE
.
13
2.1.10.
BESTIMMUNG
DER
ANZAHL
DER
HAEMOZYTEN
IN
DER
HAEMOLYMPHE
DER
LARVEN
.
13
2.2.
HEFE-METHODEN
.
13
2.2.2.
PRAEPARATION
GENOMISCHER
DNA
.
14
2.2.3.
TRANSFORMATION
.
14
2.2.4.
UNTERBRECHUNG
DES
SRPL-GENS
.
15
2.2.5.
KONSTRUKTE
FUER
DIE
KOMPLEMENTATIONSEXPERIMENTE
.
15
2.2.6.
HERSTELLUNG
DER
SRPL-ANTIKOERPER
.
16
2.2.7.
IMMUNFLUORESZENZ
AN
FIXIERTEN
HEFE-ZELLEN
.
16
2.2.8.
PROTEIN-EXTRAKTE
.
17
2.2.9.
FACS-ANALYSE
.
18
2.3.
DNA-METHODEN
.
18
2.3.1.
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA
.
18
2.3.2.
DIGOXYGENIN-MARKIERUNG
VON
DNA
.
19
2.3.3.
HYBRIDISIERUNG
VON
SOUTHEM-BLOTS
MIT
MARKIERTEN
DNA
PROBEN
.
19
2.3.4.
POLYMERASE-KETTEN-REAKTION
(PCR)
.
19
2.3.5.
DNA-SEQUENZIERUNG
.
20
2.4.
RNA-METHODEN
.
20
2.4.1.
ISOLIERUNG
VON
TOTALER
RNA
AUS
DROSOPHILA-LARVEN
.
20
2.4.2.
ISOLIERUNG
VON
POLY(A)
+
RNA
.
20
2.4.3.
NORTHERN-BLOT
.
20
2.5.
PROTEIN-METHODEN
.
21
2.5.1.
AFFINITAETSREINIGUNG
POLYKLONALER
ANTIKOERPER
.
21
2.5.2.
WESTEM-BLOT-ANALYSE
.
21
2.4.3.
IMMUNPRAEZIPITATION
.
'.
.
22
3.
ERGEBNISSE
.
23
A.
HERSTELLUNG
UND
IDENTIFIZIERUNG
VON
P-ELEMENT-INSERTIONEN
IM
PENDULIN-GEN
VON
DROSOPHILA
UND
ANALYSE
DER
MUTANTEN
PHAENOTYPEN
.
23
3.1.
P-ELEMENT-MUTAGENESE
.
23
3.1.1.
ANALYSE
DER
P155-22
INSERTION
.
24
3.1.2.
EXZISION
DES
P-ELEMENTES
155-22
.
25
3.1.3.
PHAENOTYP-ANALYSE
DER
P155-22-EXZISIONSMUTANTEN
.
28
3.2.
HERSTELLUNG
EINER
PENDULIN-TRANSFORMANTE
UND
RETTUNGSEXPERIMENTE
.
29
3.3.
P-ELEMENT-INSERTION
1(2)144/1
.
30
3.3.1.
EXZISION
DES
P-ELEMENTES
144/1
.
33
3.3.2.
PHAENOTYP-ANALYSE
DER
PENDULIN-MUTANTE
.
33
3.4.
IMMUNPRAEZIPITATION
.
41
B.
PENDULIN-HOMOLOGE
GENE
IN
HEFE
UND
MAUS
.
43
3.5.
DAS
PENDULIN-HOMOLOGE
GEN
IN
HEFE
(SRP1)
.
43
3.6.
DAS
PENDULIN-GEN
IN
DER
MAUS
.
45
3.7.
PRIMAERSTRUKTUR
DER
PENDULINE
UND
SRPLP
UND
IHRE
PHYLOGENETISCHE
KONSERVIERUNG
.
48
3.8.
PENDULIN
IST
MITGLIED
EINER
PROTEIN-FAMILIE
MIT
ARMADILLO-REPEATS
.
52
C.
ROLLE
DES
PENDULIN-HOMOLOGEN
IN
HEFE
(SRP1)
UND
KOMPLEMENTATIONSEXPERIMENTE
MIT
DROSOPHILA
UND
MAUS-PENDULIN
.
54
3.9.
SRPLP
BEFINDET
SICH
IM
ZELLKERN
.
54
3.9.1.
SPEZIFITAET POLYKLONALER
SRPLP-ANTIKOERPER
.
54
3.9.2.
INTRAZELLULAERE
LOKALISIERUNG
VON
SRPL-PROTEIN
.
54
3.10.
SRP1
IST
EIN
ESSENTIELLES
GEN
.
57
3.10.1.
GEN-UNTERBRECHUNG
.
57
3.10.2.
TETRADENANALYSE
.
57
3.11.
DIE
SRP1
-GEN-FUNKTION
KANN
NICHT
MIT
DROSOPHILA
ODER
MAUS
PENDULIN
KOMPLEMENTIERT
WERDEN
.
60
3.12.
PHAENOTYP-ANALYSE
DER
SRPL
MUTANTEN
.
63
3.12.1.
WACHSTUMSKURVE
.
63
3.12.2.
HEFEZELLEN
OHNE
SAEPF-GENFUNKTION
ZEIGEN
EINEN
CELL
DIVISION
CYCLE
(CDC)
PHAENOTYP
.
64
3.12.3.
FACS-ANALYSE
.
69
3.12.4.
PHAENOTYP
DER
ZELLEN
MIT
SRPLP-UEBEREXPRESSION
.
69
4.
DISKUSSION
.
73
4.1.
DIE
FUNKTION
VON
PENDULIN
(PHO3I)
IN
DROSOPHILA
.
73
4.1.1.
P-ELEMENT-INSERTION
PI
55-22
.
73
4.1.2.
P-ELEMENT-INSERTION
P144/1
.
74
4.1.3.
PENDULIN
SPIELT
IN
MITOTISCH
AKTIVEN
GEWEBEN
EINE
ESSENTIELLE
ROLLE
.
75
4.1.4.
PENDULIN
ALS
TUMORSUPPRESSOR
IN
HAEMATOPOETISCHEN
ZELLEN
.
78
4.1.5.
UEBERLEGUNGEN
ZUM
ZELLZYKLUSREGULIERTEN
KEM-CYTOPLASMA
TRANSPORT
VON
PENDULIN
.
79
4.1.6.
SPEKULATIONEN
UEBER
DIE
FUNKTION
VON
PENDULIN
IM
KEMPROTEIN-IMPORT
.
81
4.2.
SRPZ-FUNKTION
IN
S.CEREVISIAE
.
83
4.2.1.
SRPL
IST
EIN
KEMPROTEIN
.
83
4.2.2.
SRPLP
WIRD
BEI
ALLEN
DURCH
DIE
MIKROTUBULI
VERMITTELTEN
BEWEGUNGSPROZESSEN
DER
MITOSE
BENOETIGT
.
84
4.2.3.
SRPLP
IST
ESSENTIELL
FUER
DIE
STRUKTURELLE
INTEGRITAET
DES
ZELLKERNS
.
86
4.2.4.
SPEKULATIONEN
UEBER
DIE
ZELLULAERE
FUNKTION
VON
SRPL-PROTEIN
.
87
4.3.
PHYLOGENETISCHE
KONSERVIERUNG
UND
ZELLULAERE
FUNKTION
VON
PENDULIN
AEHNLICHEN
PROTEINEN
.
89
4.4.
PENDULIN-AEHNLICHE
PROTEINE
SIND
MITGLIEDER
EINER
GROESSEREN
SUPERFAMILIE
VON
PROTEINEN
MIT
ARMADILLO-REPEATS
.
92
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
97
6.
LITERATURVERZEICHNIS
.
99
7.
LEBENSLAUF
.
115 |
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