Charakterisierung etablierter Burkitt-Lymphom-Zellinien durch npRNA-Hybridisierungsmuster:
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1994
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1.
INHALTSVERZEICHNIS
1.
INHALTSVERZEICHNIS
-
.
-----
2
2.
EINLEITUNG.
4
2.1.
ALLGEMEINES
.
4
2.2.
DEFINITION
DES
BURKITT
LYMPHOMS
.
6
2.3
ZYTOGENETISCHE
MERKMALE
.
8
2.4.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
MERKMALE
.
11
2.5.
NPRNA
UND
CHROMATINSTRUKTUR
.
16
2.6.
ZIELE
DER
ARBEIT
.
26
3.
MATERIAL
.-----
.
-
.-------
.28
3.1.
GERAETE
.
28
3.2.
ZELLINIEN
.
28
3.3.
REAGENTIEN
UND
ENZYME
.
29
3.4.
LOESUNGEN
UND
PUFFER
.
30
4.
METHODEN
.34
4.1.
ZELLKULTUR
.
34
4.1.1.
ZELLZUECHTUNG
.
34
4.1.2.
ZOLLAGERUNG
.
34
4.2.
NPRNA-PRAEPARATION
.
35
4.2.1.
EINBETTUNG
IN
AGAROSEMIKROKUGELN
.
35
4.2.2.
LYSIS
.
36
4.2.3.
ERZEUGUNG
VON
EINZELSTRANGBRUECHEN
IN
DER
GENOMISCHEN
DNA
.
36
4.2.4.
ELEKTROELUTION
DER
NPRNA
.
36
4.2.5.
REINIGUNG
DER
NPRNA
.
38
4.3.
AUFTRENNUNG
DER
NPRNA
DURCH
ELEKTROPHORESE
.
39
4.3.1.
HERSTELLUNG
DER
POLYACRYLAMIDGELE
.
39
4.3.2.
VORELEKTROPHORESE
.
39
4.3.3.
PROBENVORBEREITUNG
UND
AUFTRAGUNG
.
39
4.3.4.
ELEKTROPHORESE
.
40
4.4.
ELEKTROTRANSFER
VON
NPRNA
AUF
NYLONMEMBRAN
.
41
4.5.
FIXIERUNG
DER
NPRNA
AUF
NYLONMEMBRANEN
.
42
4.6.
NACHWEIS
VON
NPRNA-BANDENMUSTER
.
43
4.6.1.
5'-ENDMARKIERUNG
MIT
[
Y-32P]-ATP
DURCH
T4
POLYNUKLEOTID
KINASE
.
43
4.6.2.
HYBRIDISIERUNG
MEMBRANGEBUNDENER
NPRNA
MIT
RADIOAKTIV
MARKIERTEN
RNA-SONDEN
.
43
4.7.
AUTORADIOGRAPHIE
.
46
4.8.
AUSWERTUNG
DER
AUTORADIOGRAPHISCHEN
DATEN
.
46
4.8.1.
DENSITOMETRIE
.
46
4.8.2.
GRAPHISCHE
REPRAESENTATION
DER
NPRNA-BANDENMUSTER
.
46
4.8.3.
EXPLORATIVE
DATENANALYSE
(EDA)
.
48
4.8.4.
DARSTELLUNG
DER
UNTERSCHIEDE
ZWISCHEN
DEN
NPRNA
BANDENMUSTEM
IM
KLADOGRAMM
.
53
5.
ERGEBNISSE
_
_
.55
5.1.
ERGEBNISSE
DER
METHODISCHEN
OPTIMIERUNG
.
55
5.1.1.
ZUR
NPRNA-PRAEPARATION
.
55
5.1.2.
ZUM
PROBLEM
EINER
KONZENTRATIONSABSCHAETZUNG
.
56
5.1.3.
ZU
ELEKTROTRANSFER
UND
UV-BINDUNG
.
56
5.1.4.
ZUR
SPEZIFISCHEN
RADIOAKTIVEN
MARKIERUNG
DER
HYBRIDISIERUNGS
SONDEN
.
57
5.1.5.
ZU
HYBRIDISIERUNGS
UND
WASCHBEDINGUNGEN
.
59
5.1.6.
ZUR
REPRODUZIERBARKEIT
DER
NPRNA-BANDENMUSTER
BEI
UNABHAEN
GIGEN
ELEKTROPHORETISCHEN
AUFTRENNUNGEN
UNTER
GLEICHEN
BEDINGUNGEN
.
62
5.1.7.
ZUR
REPRODUZIERBARKEIT
VON
NPRNA-BANDENMUSTER
BEI
REHYBRIDISIERUNG
AUF
DER
SELBEN
MEMBRAN
.
64
5.1.8.
ZUR
VERAENDERUNG
VON
NPRNA-BANDENMUSTEM
BEI
UNTERSCHIEDLICHEN
PROLIFERATIONSPHASEN
.
67
5.1.9.
ZUR
IDENTIFIZIERBARKEIT
VON
ZELLINIEN
AUFGRUND
IHRES
NPRNA
BANDENMUSTERS
.
69
5.1.10.
ZUR
OPTIMIERUNG
DER
NPRNA-BANDENMUSTER
DURCH
EINSATZ
VERSCHIEDENER
MYC-HYBRIDISIERUNGSSONDEN
.
72
5.2.
DARSTELLUNG
UND
EXPLORATIVE
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
DER
HYBRIDISIERUNGSERGEBNISSE
.
75
5.2.1.
DIGITALISIERUNG
DER
DATEN
.
75
5.2.2. ABLEITUNG
VON
ZWEI
BESCHREIBENDEN
PARAMETERN
AUS
DEN
DIGITALISIERTEN
DATEN
.
83
5.2.3.
SIGNIFIKANZ
DER
PARAMETER
DIFFERENZIERUNGSWERT
UND
AEHNLICHKEITSINDEX
.
91
5.2.4.
UNTERSCHEIDBARKEIT
VON
NPRNA-BANDENMUSTEM
ANHAND
VON
DIFFERENZIERUNGSWERT
UND
AEHNLICHKEITSINDEX
.
97
5.2.5. DARSTELLUNG
VON
DIFFERENZIERUNGSWERTEN,
AHNLICHKEITSINDIZES
UND
TRANSLOKATIONSPAARUNGEN
IN
EINEM
DREIDIMENSIONALEN
KOORDINATENSYSTEM
.
99
5.2.6.
DARSTELLUNG
DER
AEHNLICHKEIT
VON
ZELLINIEN
ALS
KIADOGRAMME
AUS
DIFFERENZIERUNGSWERTEN
ODER
AEHNLICHKEITSINDIZES
.
111
6.
DISKUSSION
_
.
_
._
114
7.
ZUSAMMENFASSUNG
.
121
8.
ABKUERZUNGEN
.
122
9.
LITERATUR
.
124
10.
ANHANG
.
134
11.
DANKSAGUNG
.
_
._
163
12.
LEBENSLAUF
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