Untersuchungen zur Affinitätsmodulation der Beta3-Integrin-Ligand-Wechselwirkung:
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1995
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INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
.
1
1.1.
ZELL-ZELL
UND
ZELL-MATRIX-WECHSELWIRKUNGEN
.
1
1.2.
PHAENOMENOLOGISCHE
ASPEKTE
.
2
1.2.1.
BLUTGERINNUNG
UND
THROMBOSE
.
2
1.2.2.
TUMORMETASTASIERUNG
.
4
1.2.3.
OSTEOPENIE
.
5
1.3.
INTEGRINE
.
6
1.3.1.
STRUKTUR
UND
FUNKTION
.
6
1.3.2.
FIBRINOGENREZEPTOR
AJIBSS3
.
9
1.3.3.
VITRONEKTINREZEPTOR
A
V
SS3
.
12
1.4.
EXTRAZELLULAERE
MATRIXGLYKOPROTEINE
.
12
1.4.1.
VITRONEKTIN
.
13
1.4.2.
FIBRONEKTINE
.
14
1.4.3.
LAMININE
UND
KOLLAGENE
.
15
1.4.4.
FIBRINOGEN
.
16
1.5.
DISINTEGRINE
.
17
1.5.1.
STRUKTUR
UND
FUNKTION
.
17
1.5.2.
ECHISTATIN
.
20
1.6.
REZEPTOR-LIGAND-WECHSELWIRKUNG
.
22
1.6.1.
RGD
ALS
ERKENNUNGSSEQUENZ
.
22
1.6.2.
RGD-UNABHAENGIGE
LIGANDERKENNUNG
.
24
1.6.3.
ROLLE
DER
DIVALENTEN
KATIONEN
IN
DER
INTEGRIN-LIGAND-BINDUNG
.
24
1.7.
AKTIVIERUNG
DER
INTEGRINE:
MODULATION
DER
AFFINITAET
.
25
2.
FRAGESTELLUNG
.
28
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
29
3.1.
MATERIAL
.
29
3.1.1.
CHEMIKALIEN
UND
REAGENZIEN
.
29
3.1.2.
GERAETE
.
32
3.1.3.
EINWEGMATERIALIEN
.
33
3.1.4.
STANDARDPUFIER
.
:
.
34
3.1.5.
ANTIKOERPER
.
34
3.1.6.
PEPTIDE
.
34
3.1.7.
ZELLINIEN
.
35
3.1.8.
HUMANES
ZELL
UND
GEWEBEMATERIAL
.
35
INHALTSVERZEICHNIS
N
3.2.
METHODEN
.
36
3.2.1.
LIGANDENAUFREINIGUNG
.
36
3.2.1.1.
FIBRINOGEN
.
36
3.2.1.2.
VITRONEKTIN
.
37
3.2.I.3.
FIBRONEKTIN
.
37
3.2.2.
INTEGRINAUFREINIGUNG
.
38
3.2.2.I.
FIBRINOGENREZEPTORANBSS3
.
38
3.2.2.2.
VITRONEKTINREZEPTORA
V
SS3
.
39
3.2.3.
ELISA
.
40
3.2.4.
SDS-PAGE
.
40
3.2.5.
BCA-PROTEIN-ASSAY
(PIERCE)
.
41
3.2.6.
BIOTINYLIERUNG
DER
LIGANDEN
.
41
3.2.7.
REZEPTORTEST
.
41
3.2.8.
FACS-ANALYSE
DER
VERSCHIEDENEN
TUMORZELLINIEN
.
42
3.2.9.
ZELLADHAESIONSTEST
.
42
3.2.10.
ISOLIERUNG
HUMANER
THROMBOZYTEN
AUS
VOLLBLUT
.
44
3.2.11.
THROMBOZYTENADHAESIONSTEST
.
44
3.2.12.
THROMBOZYTENAGGREGATIONSTEST
.
45
3.2.13.
IMMUNPRAEZIPITATION
MIT
ANSCHLIESSENDEM
WESTEMBLOTTING
.
45
3.2.14.
QUALITAETSKONTROLLEN
UND
FUNKTIONALITAETSTESTS
DER
ISOLIERTEN
LIGANDEN
UND
INTEGRINE
.
47
3.2.14.1.
QUALITAET
UND
FUNKTIONALITAET
DER
LIGANDEN
.
47
3.2.14.2.
QUALITAET
UND
FUNKTIONALITAET
DER
INTEGRINE
.
49
4.
ERGEBNISSE
.
53
4.1.
EINFLUSS
VON
ZWEIWERTIGEN
KATIONEN
AUF
DIE
REZEPTOR-LIGAND-INTERAKTION
.53
4.1.1.
EINFLUSS
ZWEIWERTIGER
KATIONEN
AUF
DAS
ADHAESIONSVERHALTEN
HUMANER
THROMBOZYTEN
.
53
4.1.2.
EINFLUSS
ZWEIWERTIGER
KATIONEN
AUF
DAS
ADHAESIONSVERHALTEN
VON
M21-TRANSFEKTANTEN
.
59
4.1.2.1.
CHARAKTERISIERUNG
DER
INTEGRINEXPRESSION
AUF
M21-L-ANB
UND
M21-L4
ZELLEN
.
59
4.1.2.1.L
FACS-ANALYSE
.
59
4.1.2.1.2.
ADHAESIONSPROFIL
.
61
4.1.2.2.
MODULATION
DER
ZELLADHAESION
DURCH
DIVALENTE
KATIONEN
UND
ANDERE
STIMULIERENDE
AGENZIEN
.
62
INHALTSVERZEICHNIS
III
4.1.3.
AFFINITAETSPRAEZIPITATIONEN
VON
M21-L-AJIB
UNC
*
M21-L4-ZELLEN
UNTER
CA2+
UND
MN2
+
-EINFLUSS
.
69
4.1.4.
EINFLUSS
VON
MN^
+
AUF
ANDERE
RGD-ABHAENGIGE
INTEGRINE
.
71
4.2.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
WIRKUNGSWEISE
VON
ECHISTATIN
BEI
DER
REZEPTOR*
LIGAND-WECHSELWIRKUNG
.
80
4.3.
PEPTIDSYNTHESESTRATEGIE
.
80
4.4.
INHIBITORISCHE
WIRKUNG
DES
ECHISTATIN
UND
SEINER
C-TERMINALEN
PEPTIDE
.
81
4.4.1.
EFFEKTE
VON
ECHISTATIN
UND
GRGDSPK-PEPTID
IM
ISOLIERTEN
REZEPTORTEST
.
81
4.4.2.
EFFEKTE
C-TERMINALER
ECHISTATINPEPTIDE
.
82
4.4.2.1.
EFFEKTE
C-TERMINALER
ECHISTATINPEPTIDE
IM
ISOLIERTEN
REZEPTORTEST
.
82
4.4.2.2.
IDENTIFIZIERUNG
DER
MINIMALEN
FUNKTIONELLEN
EINHEIT
DES
PEPTIDS
NR.
9
(KTADC(TRT)PRNPHKGPAT)
.
86
4.4.3.
EFFEKTE
C-TERMINALER
ECHISTATINPEPTIDE
AUF
DIE
CQIBSS3
ODER
A
V
SS3-INTEGRIN-GESTEUERTE
THROMBOZYTEN
UND
ZELLADHAESION
.
88
4.4.3.1.
INHIBITION
DER
THROMBOZYTENADHAESION
DURCH
C-TERMINALE
ECHISTATINPEPTIDE
.
88
4.4.3.2.
EINFLUSS
VON
C-TERMINALEN
ECHISTATINPEPTIDEN
UND
ECHISTATIN
AUF
DIE
THROMBOZYTENAGGREGATION
.
89
4.4.3.3.
INHIBITION
DER
ZELLADHAESION
DURCH
C-TERMINALE
ECHISTATINPEPTIDE
.
90
4.4.4.
REVERSIBILITAETSTEST
MIT
C-TERMINALEM
ECHISTATINPEPTID
UND
ECHISTATIN
.
92
5.
DISKUSSION
.
96
5.1.
MODULATION
DES
AKTIVITAETSZUSTANDES
RGD-ABHAENGIGER
INTEGRINE
DURCH
MN^
+
.
96
5.2.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
INHIBITION
DER
XNBSS3-FIBRINOGEN-WECHSELWIRKUNG
DURCH
ECHISTATIN
UND
C-TERMINALE
ECHISTATINPEPTIDE
.
104
6.
ZUSAMMENFASSUNG
.
114
7.
LITERATURVERZEICHNIS
.
115 |
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