Identifizierung und Analyse genregulatorischer Sequenzen im ersten Intron des Glutamin-Synthetase-Gens:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1995
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INHALT
A.
EINLEITUNG
1.
HETEROGENITAET
DES
LEBERPARENCHYMS
1
2.
HETEROGENITAET
DER
GLUTAMIN-SYNTHETASE
3
3.
TRANSKRIPTIONSREGULATION
EUKARYOTISCHER
GENE
4
4.
LEBER-SPEZIFISCHE
TRANSKRIPTIONSREGULATION
5
5.
STRUKTUR
UND
FUNKTIONALE
CHARAKTERISIERUNG
DES
GLUTAMIN-SYNTHETASE
GENS
6
6.
ZIEL
DER
ARBEIT
7
B.
MATERIAL
UND
METHODEN
MATERIAL
0.0.
BEZUGSQUELLEN
9
0.1.
MEDIEN
,
AGARPLATTEN,
STAMMLOESUNGEN
12
0.2.
PUFFER
15
0.3.
VERSUCHSTIERE
16
0.4.
HEPATOZYTEN-PRIMAERKULTUREN
16
0.5.
ZELLINIEN
16
0.6.
BAKTERIENSTAEMME
17
0.7.
PLASMIDE
17
METHODEN
1.1.
KULTIVIERUNG
VON
HEPATOZYTEN-PRIMAERKULTUREN
18
1.2.
KULTIVIERUNG
VON
ZELLINIEN
18
2.
ISOLIERUNG
VON
GENOMISCHER
DNA
AUS
HEPATOZYTEN
UND
ZELLINIEN
19
3.1.
ISOLIERUNG
VON
REKOMBINANTER
DNA
19
3.2.
REINIGUNG
VON
PLASMID-DNA
DURCH
CSCL-GRADIENTENZENTRIFUGATION
20
3.3.
ENTFERNUNG
VON
ETHIDIUMBROMID
AUS
DNA-PRAEPARATIONEN
NACH
DER
CSCL
GRADIENTENZENTRIFUGATION
20
4.
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
DNA
21
5.
VERDAU
VON
DNA
MIT
RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN
21
6.
SEQUENZIERUNG
21
7.
KLONIERUNG
VON
DNA
22
7.1.
VEKTORPRAEPARATION
22
7.2.
LIGATION
22
7.3.
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
BAKTERIEN
UND
TRANSFORMATION
22
7.3.1.
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
BAKTERIEN
NACH
DER
CALCIUMCHLORID-METHODE
22
7.3.2.
TRANSFORMATION
VON
DNA
IN
KOMPETENTE
BAKTERIEN
23
8.
GELELEKTROPHORESE
23
8.1.
ANALYTISCHE
UND
PRAEPARATIVE
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
23
8.1.1.
HORIZONTALE
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
FUER
RESTRIKTIONSKARTIERUNG
23
8.1.2.
VERTIKALE
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
FUER
DNASE
I
-
ANALYSEN
23
8.2.
POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
FUER
SEQUENZIERUNGEN
24
9.
ISOLIERUNG
VON
DNA
AUS
AGAROSEGELEN
24
10.
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA
MIT
HILFE
VON
HEXANUKLEOTID-PRIMEM
25
11.
TRANSFER
VON DNA
AUF
NYLONMEMBRANEN
25
12.
HYBRIDISIER
UND
WASCHBEDINGUNGEN
26
13.
AUTORADIOGRAPHIE
26
14.
DNASE
I-VERDAU
IN
ZELLKULTUR
27
15.
VORBEHANDLUNG
DER
DNA
FUER
DIE
TRANSFEKTION
VON
PRIMAERKULTUREN
UND
ZELLINIEN
28
16.
TRANSFEKTION
VON
HEPG2-ZELLEN
UND
PRIMAERKULTUREN
UND
GLYZERINSCHOCK
28
17.
HERSTELLUNG
VON
ZELLEXTRAKTEN
29
18.
NACHWEIS
DER
SS-GALACTOSIDASE-AKTIVITAET
IN
ZELLEXTRAKTEN
30
19.
NACHWEIS
DER
LUCIFERASE-AKTIVITAET
31
20.
PROTEINBESTIMMUNG
NACH
LOWRY
32
21.
BERECHNUNG
DER
RELATIVEN
EXPRESSIONSSTAERKE
32
22.
IN
SITU
NACHWEIS
VON
SS-GALACTOSIDASE-AKTIVITAET
IN
TRANSFIZIERTEN
ZELLEN
33
C.
ERGEBNISSE
1.
KONSERVIERUNG
DER
ECORL-RESTRIKTIONSSCHNITTSTELLE
IN
DER
GENOMISCHEN
DNA
DES
GS-GENS
IN
DEN
VERWENDETEN
ZELLSYSTEMEN
35
2.
NACHWEIS
DNASEL-HYPERSENSITIVER
BEREICHE
IN
DER
PROMOTER-REGION
UND
DEM
1.
INTRON
DES
GS-GENS
36
3.
SEQUENZANALYSEN
DES
1.
INTRONS
40
3.1.
SEQUENZIERUNG
40
3.2.
ANALYSE
DER
SEQUENZ
44
3.2.1.
G/C-PROFIL
44
3.2.2.
SEQUENZHOMOLOGIE
ZU
ANDEREN
GENEN
44
3.2.3.
MOEGLICHE
ERKENNUNGSSEQUENZEN
FIIR
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
45
3.2.4.
VERGLEICH
DER
NUDEOTIDSEQUENZ
DES
ERSTEN
INTRONS
MIT
DER
DES
5'-BEREICHS
DES
GS-GENS
47
4.
KLONIERUNG
VERSCHIEDENER
SUBFRAGMENTE
DES
1.
INTRONS
IN
GALACTOSIDASE
REPORTERGEN-VEKTOREN
47
5.
FUNKTIONELLE
ANALYSE
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
DEM
1.
INTRON
MITTELS
CALDUMPHOSPHAT-VERMITTELTEM
GENTRANSFER
49
5.1.
TRANSFEKTION
IN
HEPG2-ZELLEN
51
5.2.
TRANSFEKTION
IN
RATTEN-PRIMAERKULTUREN
52
5.2.1.
TRANSFEKTION
IN
NORMAL
PRAEPARIERTE
HEPATOZYTEN
52
5.2.2.
TRANSFEKTION
IN
PERIPORTALE
HEPATOZYTEN
53
5.2.3.
TRANSFEKTION
IN
ANGEREICHERTE
PERICENTRALE
HEPATOZYTEN
56
6.
IN
SITU
NACHWEIS
DER
BETA-GALACTOSIDASE
-AKTIVITAET
IN
HEPATOZYTEN
PRIMAERKULTUREN
UND
DER
HEPATOM-ZELLINIE
HEPG2
58
D.
DISKUSSION
1.
VERGLEICH
DER
SEQUENZANALYSEN
DES
KLONIERTEN
BEREICHS
DES
1.
INTRONS
MIT
DEM
AUFTRETEN
DNASEL-HYPERSENSITIVER
STELLEN
60
2.
VERGLEICH
DER
EXPRESSIONSSTAERKEN
DER
INTRONKONSTRUKTE
IN
PERIPORTALEN,
PERICENTRALEN
UND
GESAXNT-HEPATOZYTEN-PRIMAERKULTUREN
64
3.
VERGLEICH
DER
EXPRESSIONSSTAERKEN
DER
INTRONKONSTRUKTE
IN
TRANS
FEKTIONSVEKTOREN
MIT
HOMOLOGEM
GS-PROMOTER
MIT
TRANS
FEKTIONSVEKTOREN
MIT
HETEROLOGEM
PROMOTER
IN
HEPG2-ZELLEN
67
4.
AUSBLICK
71
E.
ZUSAMMENFASSUNG
74
F.
LITERATUR
76 |
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| author | Gaunitz, Christine |
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