Regulation der Proenkephalin Genexpression in chromaffinen Zellen des Rindes:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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1995
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INHALT
1.
EINLEITUNG
1
1.1
AUFGABENSTELLUNG
8
2.
MATERIAL
9
2.1
CHEMIKALIEN
9
2.2
ENZYME
9
2.3
NUKLEINSAEUREN
10
2.4
BAKTERIENSTAEMME
11
2.5
PROTEINE
11
2.6
KULTURMEDIEN,
PUFFER
UND
LOESUNGEN
12
3.
METHODEN
13
3.1
BAKTERIENKULTUR
13
3.2
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
3.3
METHODEN
ZUR
IN-VITRO
REKOMBINATION
VON
DNA
13
3.4
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA
13
3.5
KOLONIEHYBRIDISIERUNG
14
3.6
DNA-SEQUENZIERUNG
14
3.7
RNA-ISOLIERUNG
14
3.8
HERSTELLUNG
VON
RADIOAKTIV-MARKIERTERTEN
RNA-SONDEN
15
3.9
NORTHERN-BLOT
HYBRIDISIERUNGEN
15
3.10
ISOLIERUNG
UND
KULTIVIERUNG
CHROMAFFINER
ZELLEN
AUS
16
NEBENNIEREN
VON
RINDERN
3.11
EXPRESSION
VON
FREMD-DNA
IN
CHROMAFFINEN
ZELTEN
16
3.12
ISOLIERUNG
DES
ZELLEXTRAKTES
UND
CAT-ASSAY
17
3.13
ISOLIERUNG
VON
KEMPROTEINEXTRAKTEN
18
3.14
IN-VITRO
TRANSLATION
VON
PROTEINEN
18
3.15
PAGE-RETARDATIONSANALYSE
19
3.16
WESTERN-BLOT
20
3.17
IMMUNZYTOCHEMISCHE
FAERBUNG
20
4.
ERGEBNISSE
21
4.1.
ZEITVERLAUF
DER
INDUKTION
DER
MRNAS
VON
PROENKEPHALIN
UND
VON
21
"
IMMEDIATE-EARLY
"
-GENEN
4.1.1
-
INDUKTION
DURCH
KCL
22
4.1.2
-
INDUKTION
DURCH
PHORBOLESTER
23
4.1.3
-INDUKTION
DURCH
FORSKOLIN
24
INHALT
4.2
ABHAENGIGKEIT
DER
INDUKTION
DER
PENK-EXPRESSION
VON
DER
PROTEIN-BIOSYNTHESE
25
4.3
UNTERSUCHUNG
DER
REGULATION
DES
PENK-GENES
DURCH
TRANSIENTE
EXPRESSION
VON
PENKCAT-REPORTERGENEN
26
4.3.1
KONSTRUKTION
VON
PENKCAT-FUSIONSGENEN
26
4.3.2
KARTIERUNG
DER
FUER
DIE
BASALE
UND
KCL-INDUZIERTE
EXPRESSION
NOTWENDIGEN
PROMOTORSEQUENZEN
DES
PENK-GENS
DER
RATTE
28
4.3.3
INDUKTION
DER
EXPRESSION
VON
PENKCAT-REPORTERGENEN
DURCH
KCL,
TPA
UND
FORSKOLIN
30
4.3.4
DER
EFFEKT
VON
C-JUN
UND
C-FOS-UEBEREXPRESSION
AUF
DIE
EXPRESSION
VON
PENKCAT-REPORTERGENEN
32
4.3.5
DER
EFFEKT
VON
PKA
UND
CREB-UEBEREXPRESSION
AUF
DIE
EXPRESSION
VON
PENKCAT-REPORTERGENEN
32
4.4
UNTERSUCHUNG
DER
PROTEIN/DNA-WECHSELWIRKUNG
AM
ENKCRE-2
ELEMENT
34
4.4.1
PAGE-RETARDATIONSANALYSE
MIT
IN-VITRO-TRANSLATIERTEM
JUN-,
FOS
UND
CREB-PROTEIN
34
4.4.2
VERGLEICH
DER
BINDUNG
VON
AP-1
UND
CREB
AN
DAS
ENKCRE-2-ELEMENT
DURCH
HETEROLOGE
KOMPETITION
36
4.4.3
PAGE-RETARDATIONSANALYSE
MIT
KEMEXTRAKTEN
AUS
KCL-,
TPA
UND
FORSKOLIN-STIMULIERTEN
CHROMAFFINEN
ZELLEN
37
4.4.4
DENSITOMETRISCHE
AUSWERTUNG
DER
PAGE-RETARDATIONSANALYSEN
42
4.5
ZEIT
VERLAUF
DER
FOS-PROTEIN-INDUKTION
UND
DER
PHOSPHORYLIERUNG
VON
CREB
44
4.6
IMMUNHISTOCHEMISCHER
NACHWEIS
VON
PHOSPHO-CREB
46
5.
DISKUSSION
49
5.1
DIE
"SECOND
MESSENGER"-INDUZIERTE
EXPRESSION
VON
PENK
UND
DER
"IMMCDIATE-EARLY"-GENE
51
5.2
DIE
"SECOND
MESSENGER
"
-INDUZIERTE
PENK-EXPRESSION
WIRD
VOM
ENKCRE-2
-ELEMENT
VERMITTELT
53
INHALT
5.3
AP-1
BESTEHEND
AUS
FOS/JUN
TRANSAKTIVIERT
DIE
PENK-EXPRESSION
56
5.4
"SECOND
MESSENGER"
INDUZIEREN
DIE
BINDUNG
VON
57
AP-L-PROTEINEN
AM
ENKCRE-2
-ELEMENT
6.
ZUSAMMENFASSUNG
63
7.
LITERATUR
64
8.
ANHANG
73
ABKUERZUNGEN
73 |
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