Isolierung und Charakterisierung einer filamentspezifisch exprimierten Cellulase aus Ustilago maydis:
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1.
EINLEITUNG
.
1
1.1.
USTILAGO
MAYDIS
-
SCHAEDLING,
DELIKATESSE
UND
STUDIENOBJEKT
.
1
1.2.
DER
LEBENSZYKLUS
VON
U.MAYDIS
.
1
1.3.
DIE
INKOMPATIBILITAETSLOCI
A
UND
B
.
1
1.4.
DIE
KOMPONENTEN
DES
A-LOCUS
UND
DIE
DURCH
A
VERMITTELTE
ZELL-ZELL-ERKENNUNG
.
2
1.5.
DIE
KOMPONENTEN
DES
B-LOCUS
.
3
1.6.
MODELLVORSTELLUNGEN
ZUM
MECHANISMUS
DER
VON
B
VERMITTELTEN
KONTROLLE
DER
PATHOGENITAET
.
3
1.7.
ZIELSETZUNG
UND
WAHL
EINES
GEEIGNETEN
SYSTEMS
ZUR
EXPERIMENTELLEN
ANALYSE
.
4
2.
ERGEBNISSE
.
5
2.1.
KLONIERUNG
EINES
FBD1
1
-SPEZIFISCH
EXPRIMIERTEN
GENS
.
5
2.2.
DAS
EGZI-GEN
WIRD
IM
DIKARYON
EXPRIMIERT
.
8
2.3.
DIE
EG/7-EXPRESSION
IST
FILAMENTSPEZIFISCH
.
9
2.4.
ISOLIERUNG
EINES
GENOMISCHEN
EGZI-KLONS
.
11
2.5.
SEQUENZANALYSE
DES
EGZI-GENS
.
12
2.6.
TEST
DER
UNMITTELBAR
VOR
DEM
EGLL-GEN
LIEGENDEN
GENOMISCHEN
SEQUENZ
AUF
PROMOTORAKTIVITAET
.
15
2.7.
KONSTITUTIVE
EXPRESSION
VON
EGLL
IN
U.MAYDIS
UND
NACHWEIS
DER
CELLULOLYTISCHEN
ENZYMAKTIVITAET
VON
EGI
.
15
2.8.
IMMUNOLOGISCHER
NACHWEIS
UND
ENZYMAKTIVITAET
DES
MIT
EINEM
C-MYC-EPITOP
VERSEHENEN
EGI-DERIVATES
EGI-MYC
.
16
2.9.
LOKALISATION
VON
EGI-MYC
DURCH
ELEKTRONENMIKROSKOPISCHE
ANALYSE
VON
HYPHEN
.
19
2.10.
KONSTRUKTION
VON
HAPLOIDEN
EGLL
-NULL-MUTANTEN
.
21
2.11.
ISOLIERUNG
UND
ANALYSE
EINER
ZU
EGLL
HOMOLOGEN
U.MAYDIS
SEQUENZ
.
23
2.12.
DER
EINFLUSS VON
EGI
AUF
FILAMENTBILDUNG
UND
PATHOGENITAET
.
24
3.
DISKUSSION
.
26
3.1.
EGLL
KODIERT
FUER
EINE
ENDOGLUCANASE
DER
FAMILIE
K
.
26
3.2.
EGLL
WIRD
FILAMENTSPEZIFISCH
EXPRIMIERT
.
27
3.3.
DIE
BEDEUTUNG
VON
CELLULASEN
FUER
PHYTOPATHOGENE
ORGANISMEN
.
29
3.4.
DIE
BEDEUTUNG
VON
EGLL
FUER
DIE
PATHOGENITAET
VON
U.MAYDIS
.
30
3.5.
BESITZT
U.MAYDIS
MEHRERE
CELLULASEN
?
.
31
3.6.
DIE
PROBLEMATIK,
EINE
BETEILIGUNG
LYTISCHER
ENZYME
BEI
DER
PATHOGENITAET
NACHZUWEISEN
.
33
4.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
35
4.1.
PUFFER
UND
LOESUNGEN
.
35
4.2.
PLASMIDE
UND
PLASMIDKONSTRUKTIONEN
.
35
4.3.
BESCHREIBUNG
DER
VERWENDETEN
E.COLI
UND
U.MAYDIS
STAEMME
.
38
4.4.
MIKROBIOLOGISCHE
UND
GENETISCHE
METHODEN
.
39
4.4.1.
WACHSTUMSBEDINGUNGEN
UND
MEDIEN
.
39
4.4.2.
KOMPATIBILITAETSTESTS
UND
FILAMENTOESES
WACHSTUM
.
39
4.4.3.
TEST
AUF
PATHOGENITAET
.
39
4.4.4.
TRANSFORMATION
VON
U.MAYDIS
.
39
4.4.5.
TRANSFORMATION
VON
E.COLI
.
39
4.4.6.
INFEKTION
UND
AMPLIFIKATION
VON
XGTLO-PHAGEN
IN
E.COLI
.
40
4.5.
DNA
UND
RNA-METHODEN
.
40
4.5.1.
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
.
40
4.5.2.
ISOLIERUNG
VON
DNA
AUS
AGAROSEGELEN
.
40
4.5.3.
PRAEPARATION
VON
DNA
UND
RNA
AUS
U.MAYDIS
.
41
4.5.4.
PRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
AUS
E.COLI
.
41
4.5.5.
PRAEPARATION
VON
DNA
AUS
XGTLO-PHAGEN
.
41
4.6.
BESTIMMUNG
VON
NUKLEOTIDSEQUENZEN
.
42
4.6.1.
SEQUENZIERUNG
VON
DNA
.
42
4.6.2.
SEQUENZIERUNGSGELE
.
42
4.6.3.
SEQUENZIERUNG
DES
EGLL-GENS
.
42
4.7.
ANALYSE
VON
AUF
NYLONMEMBRANEN
GEBUNDENEN
NUKLEINSAEUREN
.
43
4.7.1.
32
P-MARKIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
.
43
4.7.2.
HYBRIDISIERUNG
UND
WASCHBEDINGUNGEN
.
43
4.7.3.
ANALYSE
VON
DNA
IM
"SOUTHEM-BLOT"
.
44
4.7.4.
ANALYSE
VON
RNA
IM
"NORTHERN-BLOT"
.
44
4.7.5.
ANALYSE
VON
DNA
IM
"DOT-BLOT"
.
44
4.7.6.
IDENTIFIKATION
VON
PLASMIDEN
DURCH
KOLONIEHYBRIDISIERUNG
.
44
4.7.7.
HERSTELLUNG
UND
ANALYSE
VON
PHAGENFIITEM
.
44
4.8.
NACHWEIS
UND
BESTIMMUNG
DER
CELLULASEAKTIVITAET
.
45
4.8.1.
NACHWEIS
DER
CELLULASEAKTIVITAET
AUF
CMC-PLATTEN
.
45
4.8.2.
BESTIMMUNG
DER
CELLULASEAKTIVITAET
IN
KULTURUEBERSTAENDEN
.
45
4.9.
KONSTRUKTION
EINER
XGTLO-CDNA-BANK
DES
STAMMES
FBD1
1
.
45
4.10.
SUBTRAKTIVE
CDNA-MRNA-HYBRIDISIERUNG
.
46
4,10.1.
SYNTHESE
VON
RADIOAKTIV
MARKIERTER,
EINZELSTRAENGIGER
CDNA
.
46
4.10.2.
HYBRIDISIERUNG
VON
CDNA
MIT
MRNA
.
47
4.10.3.
TRENNUNG
EINZELSTRAENGIGER
CDNA
VON
CDNA-MRNA-HYBRIDEN
.
48
4.10.4.
ISOLIERUNG
FBD1
L-SPEZIFISCH
EXPRIMIERTER
GENE
AUS
EINER
XGTLO-CDNA-BANK
.
48
4.11.
EINFUHREN
EINER
DAS
C-MYC-EPITOP
KODIERENDEN
SEQUENZ
IN
DAS
EGLL-GVTI
DURCH
"POLYMERASE
CHAIN
REACTION"
(PCR)
.
49
4.12.
IMMUNOLOGISCHER
NACHWEIS
UND
ANALYSE
DES
MIT
EINEM
C-MYC
EPITOP
VERSEHENEN
EGI-DERIVATES
EGI-MYC
.
50
4.12.1.
NACHWEIS
VON
EGI-MYC
IM
"WESTERN-BLOT"
UND
"DOT-BLOT"
.
50
4.12.2
ELEKTRONENMIKROSKOPISCHER
NACHWEIS
VON
EGI-MYC
AN
HYPHEN.
50
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
52
6.
LITERATURVERZEICHNIS
.
53
7.
ABKUERZUNGEN
.
59
8.
LEBENSLAUF
.
60 |
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