Charakterisierung der äusseren Membran und der extrazellulären polymeren Substanzen von freisuspendierten und aggregierten Zellen ammoniakoxidierender Bakterien:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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1995
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INHALTSVERZEICHNIS
1
ZUSAMMENFASSUNG
.
1
2
EINLEITUNG
.
3
3
MATERIAL
UND
METHODEN
.
9
3.1
BAKTERIENSTAEMME
.
9
3.2
NAEHRMEDIEN
.
10
3.3
KULTURFUEHRUNG
.
11
3.3.1
STAMMKULTUREN
.
11
3.3.2
ZWISCHENKULTUREN
.
11
3.3.3
KULTUREN
MIT
VERSCHIEDENEN
NAEHRMEDIEN
.
11
3.3.4
ARBEITSKULTUREN
.
12
3.3.4.1
ANZUCHT
VON
FREISUSPENDIERTEN
ZELLEN
UNTER
OPTIMALEN
SAUERSTOFFBEDINGUNGEN
12
3.3.4.2
ANZUCHT
VON
AGGREGIERTEN
ZELLEN
UNTER
LIMITIERTEN
SAUEISTOFFBEDINGUNGEN
.
12
3.4
REINHEITSPRUEFUNG
.
13
3.5
ERNTEN
UND
KONSERVIEREN
DER
BAKTERIENZELLEN
.
14
3.6
ISOLIERUNG
VON
AMMONIAK
OXIDIERENDEN
BAKTERIEN
.
14
3.6.1
STANDORTMATERIAL
.
14
3.6.2
ANREICHERUNG
UND
ISOLIERUNG
AMMONIAK
OXIDIERENDER
BAKTERIENSTAEMME
.
14
3.7
SEROLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
ISOLATE
.
15
3.8
ADSORPTIONSEIGENSCHAFTEN
GANZER
ZELLEN
.
15
3.8.1
ADSORPTIONANIONENAUSTAUSCHERHARZEN
.
16
3.8.2
ADSORPTION
AN
N-HEXADECAN
.
16
3.9
NITRITBESTIMMUNG
.
17
3.10
PROTEINBESTIMMUNG
.
17
3.11
ZUCKERBESTIMMUNG
.
18
3.12
URONSAEUREBESTIMMUNG
.
18
3.13
ISOLIERUNG
VON
GESAMTPROTEINEN
.
19
3.14
ISOLIERUNG
VON
MEMBRANEN
.
19
3.15
ISOLIERUNG
VON
MEMBRANPROTEINEN
.
20
3.15.1
DETERGENZ-EXTRAKTION
VON
MEMBRANPROTEINEN
.
20
3.15.2
ISOLIERUNG
SDS
STABILER
MEMBRANPROTEINE
.
21
3.15.3
MARKIERUNG
VON
MEMBRANPROTEINEN
MIT
N-HYDROXYSUCCINIMIDESTER-BIOTIN
.
21
3.16
ISOLIERUNG
VON
LIPOPOLYSACCHARIDEN
(LPS)
.
22
3.17
ISOLIERUNG
VON
EXTRAZELLULAEREN
POLYMEREN
SUBSTANZEN
(EPS)
.
23
3.18
LDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
(PAGE)
.
24
3.19
FAERBUNG
DER
GELE
.
24
3.19.1
SILBERFAERBUNG
DER
PROTEINE
.
24
3.19.2
SILBERFAERBUNG
DER
LIPOPOLYSACCHARIDE
.
26
3.20
WESTEM-BLOTTING
.
27
3.21
FAERBUNG
DER
BLOTMEMBRAN
.
28
3.21.1
IMMUNOFAERBUNG
VON
ZELL-LYSAT
UND
LIPOPOLYSACCHARIDEN
.
28
3.21.2
DIGOXIGENIN-MARKIERUNG
UND
IMMUNOFAERBUNG
VON
GLYKOKONJUGATEN
.
29
3.21.2.1
MARKIERUNG
VON
GLYKOKONJUGATEN
MIT
DIGOXIGENIN
.
29
3.21.2.2
IMMUNOFAERBUNG
VON
DIGOXIGENIN
MARKIERTEN
GLYKOKONJUGATEN
.
31
3.21.3
FAERBUNG
VON
BIOTIN
MARKIERTEN
PROTEINEN
.
31
3.22
PHOTOGRAPHIE
DER
GELE
UND
BLOTMEMBRANEN
.
31
3.23
PHASENKONTRASTMIKROSKOPIE
.
32
3.24
RASTERELEKTRONENMIKROSKOPIE
.
32
3.25
ANFAERBEN
VON
ZELLEN
MIT
FITC
KONJUGIERTEN
LEKTINEN
.
32
3.26
FLUORESZENZMIKROSKOPIE
.
34
3.27
GASCHROMATOGRAPHIE
.
34
3.28
MASSENSPEKTROSKOPIE
.
35
3.29
GELFILTRATION
.
35
4
ERGEBNISSE
.
37
4.1
ISOLIERUNG
UND
SEROLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
AMMONIAK
OXIDIERENDER
BAKTERIEN
.
37
4.2
AGGREGATBILDUNG
.
38
4.2.1
EINFLUSS
EINER
SUBKULTIVIERUNG
.
40
4.2.2
EINFLUSS
DER
WACHSTUMSBEDINGUNGEN
.
40
4.2.2.1
ANZUCHT
MIT
VERSCHIEDENEN
NAEHRMEDIEN
.
41
4.2.2.2
ANZUCHT
BEI
VERSCHIEDENEN
SAUERSTOFFKONZENTRATIONEN
.
41
4.3
PHYSIKOCHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
ZELLOBERFLAECHE
.
42
4.3.1
ELEKTROSTATISCHE
EIGENSCHAFTEN
.
43
4.3.2
HYDROPHOBIZITAET
.
47
4.4
CHARAKTERISIERUNG
DER
AEUSSEREN
MEMBRAN
.
48
4.4.1
GLYKOKONJUGATE
.
48
4.4.2
LIPOPOLYSACCHARIDE
.
49
4.4.3
PROTEINE
DER
AEUSSEREN
MEMBRAN
.
50
4.4.3.1
DETERGENZ-EXTRAKTION
.
50
4.4.3.2
SDS
STABILE
MEMBRANPROTEINE
.
52
4.4.3.3
BIOTIN-MARKIERUNG
DER
ZELLOBERFLAECHE
.
54
4.4.4
ANTIGENE
DETERMINANTEN
.
55
4.5
RASTERELEKTRONENMIKROSKOPISCHE
UNTERSUCHUNGEN
.
57
4.6
ISOLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DER
EXTRAZELLULAEREN
POLYMEREN
SUBSTANZEN
(EPS)
.
59
4.6.1
EPS-GEHALT
.
60
4.6.1.1
EXOPOLYSACCHARIDE
.
60
4.6.1.2
EXOPROTEINE
.
62
4.6.2
ZUSAMMENSETZUNG
DER
EPS
.
63
4.6.2.1
URONSAEUREGEHALT
DER
EPS
.
63
4.6.2.2
REAKTION
DER
ZELLEN
MIT
SPEZIFISCHEN
LEKTINEN
.
64
4.6.2.3
NEUTRALZUCKERZUSAMMENSETZUNG
DER
EPS
.
65
4.6.2.4
MOLEKULARGEWICHTSBESTIMMUNG
DER
EXOPOLYSACCHARIDE
.
70
4.6.2.5
EXOPROTEINE
.
73
5
DISKUSSION
.
75
5.1
AGGREGATIONSEIGENSCHAFTEN
DER
UNTERSUCHTEN
BAKTERIENSTAEMME
.
75
5.1.1
BEDEUTUNG
FUER
DIE
BIOFILMBILDUNG
AM
NATUERLICHEN
STANDORT
.
75
5.1.2
EINFLUSS
DER
WACHSTUMSBEDINGUNGEN
AUF
DIE
AGGREGATBILDUNG
.
76
5.2
AGGREGATIONSRELEVANTE
KOMPONENTEN
DER
ZELLOBERFLAECHE
.
77
5.2.1
PHYSIKOCHEMISCHE
EIGENSCHAFTEN
DER
BAKTERIENZELLEN
.
77
5.2.2
SPEZIFISCHE
ZELLOBERFLAECHENKOMPONENTEN
.
78
6
SCHLUSSFOLGERUNGEN
UND
AUSBLICK
.
83
7
LITERATURVERZEICHNIS
.
84 |
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