Verfügbarkeit: Charakterisierung des Virushüllproteins von Sida-Mosaik-Virus (SiMV)

Charakterisierung des Virushüllproteins von Sida-Mosaik-Virus (SiMV):

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Bibliographische Detailangaben
1. Verfasser:	Müller-Scheffsky, Johanna (VerfasserIn)
Format:	Abschlussarbeit Buch
Sprache:	German
Veröffentlicht:	1995
Schlagworte:	Hüllproteine Sida-Mosaik-Virus Hochschulschrift
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adam_text	INHALTSVERZEICHNIS I ABKUERZUNGEN N ZUSAMMENFASSUNG 1 1. EINLEITUNG 3 2. MATERIAL UND METHODEN 10 2.1. MATERIAL 10 2.2. METHODEN 12 2.2.1. MINI - BZW. MAXIPRAEPARATIONEN VON PLASMID - DNA AUS E.COLI 12 2.2.2. CSCL - DICHTEGRADIENTENZENTRIFUGATION 13 2.2.3. RESTRIKTION UND AGAROSEGELELEKTROPHORESE VON PLASMID - DNA 13 2.2.4. VERDAUUNG VON PLASMID - DNA MIT EXONUKLEASE - III 13 2.2.5. FRAGMENTELUTION AUS AGAROSEGELEN 14 2.2.6. KLONIERUNG 15 2.2.6.1. LIGATION 15 2.2.6.2. HERSTELLUNG KOMPETENTER ECO/I-ZELLEN UND TRANSFORMATION 16 2.2.7. SEQUENZANALYSEN 16 2.2.8. EXPRESSION VON FUSIONSPROTEINEN AUS TRANSFORMIERTEN JM 10] -ZETTEN 17 2.2.8.I. EXTRAKTION VON "EINSCHLUSSKOERPEM" (INCLUSIONBODIES) 17 2.2.9. PROTEINMENGENBESTIMMUNG 18 2.2.10. DISKONTINUIERLICHE DENATURIERENDE SDS-POLYACRYLAMID GELELEKTROPHORESE (SDS - PAGE) 18 2.2.11. DNA-TRANSFER (SOUTHERN TRANSFER) 18 2.2.11.1. SOUTHEMHYBRIDISIERUNG 19 2.2.12. PROTEINTRANSFER (WESTERN TRANSFER) 20 2.2.13. "DOT-BLOT" IMMUN-BINDUNGSTEST 20 2.2.14. IMMUNOLOGISCHER NACHWEIS DES VIRUSHUELLPROTEINANTEILS IM FUSIONSPROTEIN 21 2.2.15. HERSTELLUNG VON DIGOXYGENIN - MARKIERTEN SONDEN 22 2.2.16. PROTEIN - DNA - BINDUNGSSTUDIEN (SOUTH - WESTERN - ANALYSEN) 23 2.2.16.1. DETEKTION NACH SOUTH - WESTERN DURCH ' ANTIKOERPER - SANDWICH 24 2.2.16.2. DETEKTION NACH SOUTH - WESTERN MIT NICHT MARKIERTEN PCR - SONDEN UEBER SOUTHEMHYBRIDISIERUNG MIT MARKIERTEN PCR - SONDEN 25 3. ERGEBNISSE 26 3.1. KLONIERUNG UND RESTRIKTIONSANALYSE DES ORF AVI VON SIMV 29 3.2. SEQUENZANALYSE DES KLONS PUEX16/2 29 3.3. STABILITAET DES PUEX16/2 - KONSTRUKTS IN DEN E.COLI STAEMMEN AG1 UND JM101 32 3.4. EXPRESSION DES PUEX16/2 KONSTRUKTS UND DES KONTROLL-PLASMIDS PUEX3 IN JM101 33 3.5. WESTEMBLOTANALYSE MIT MONOKLONALEN ANTIKOERPERN GEGEN ABMV UND SS - GALAKTOSIDASE 36 3.6. VERKUERZUNG DES LESERAHMENS AVI VON SIMV DURCH RESTRIKTION 37 3.7. EXPRESSION UND WESTEMBLOTANALYSEN DES RESTRIKTIONSKLONS STYL 38 3.8. WESTEMBLOTANALYSEN VON PUEX16/2 UND STYL MIT 2 MONOKLONALEN ANTIKOERPERN GEGEN ACMV 39 3.9. VERKUERZUNG DES LESERAHMENS DURCH EXONUKLEASE - III - VERDAUUNG 40 3.10. SEQUENZIERUNG DER VERKUERZTEN PUEX - KLONE 43 3.11. EXPRESSION UND WESTEMBLOTANALYSEN DER VERKUERZTEN PUEX16/2 KLONE 45 3.12. SOUTH - WESTERN ANALYSEN DER ENTSTANDENEN FUSIONSPROTEINE 47 3.12.1. UEBERPRUEFUNG DER PCR MARKIERUNGEN VON AMPLIFIZIERTER PUC44D2FB DNA 48 3.12.2. SOUTH - WESTERN ANALYSE VON PUEX16/2 UND PUEX3 MIT UEBER "RANDOM - PRIMING" MARKIERTEN SONDEN VON EINZEL UND DOPPELSTRAENGIGER PUC19-DNA UND DEM 2.700 BP PUC44D2FB - FRAGMENT 50 3.12.3. VERGLEICH VON DOPPELSTRAENGIGER UND EINZELSTRAENGIGER DIGOXYGENINMARKIERTER PCR SONDE AUS PUC44D2FB UND UEBERPRUEFUNG DES DNA BINDENDEN PROTEINS AUF DER HOEHE DER SS - GALAKTOSIDASE 52 3.12.4. SOUTH - WESTERN ANALYSE MIT EINEM ZUSAETZLICHEN ANTIMAUSIGAP 53 3.12.5. BINDUNG VON SONDEN DNA NACH INKUBATION MIT WESTEMBLOTS UEBER GLUTARDIALDEHYD 53 3.12.6. SOUTH - WESTERN DETEKTION UEBER SOUTHEMBLOTANALYSE 55 4. DISKUSSION 58 4.1. ETABLIERUNG EINES SYSTEMS ZUR EXPRESSION DES SIMV HUELLPROTEINS IN E. COLI 59 4.2. UNTERSUCHUNGEN ZUR FUNKTION DER HUELLPROTEINGENE VON GEMINI VIREN 60 4.3. NICHTRADIOAKTIVE SOUTH - WESTERN - ANALYSEN 62 4.4. STUDIEN ZUR NUKLEINSAEURE - BINDUNG VIRALER PROTEINE 63 4.5. AUSBLICK 64 5. LITERATURVERZEICHNIS 70 DANKSAGUNG
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