Klonierung und Charakterisierung neuer Mitglieder der ClC-Chloridkanal-Familie aus der Niere:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Hamburg, Treudelberg 33
<<S.>> Kieferle
1995
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| Beschreibung: | Zugl.: Tübingen, Univ., Diss., 1995 |
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INHALTSVERZEICHNIS
ZUSAMMENFASSUNG
1
1.
EINLEITUNG
3
1.1.
MEMBRANTRANSPORT
3
1.2.
CHLORIDKANAELE
4
1.3.
DIE
CIC-FAMILIE
DER
SPANNUNGSABHAENGIGEN
CHLORIDKANAELE
7
1.4.
CHLORIDKANAELE
IN
DER
NIERE
9
1.4.1.
FUNKTION
UND
MORPHOLOGIE
DER
NIERE
9
1.4.2.
FUNKTION
UND
CHARAKTERISIERUNG
VON
CHLORIDKANAELEN
IN
DER
NIERE
11
1.4.3.
BARTTEFS
SYNDROM
13
1.5.
AUFGABENSTELLUNG
15
2.
ERGEBNISSE
16
2.1.
IGONIERUNG
DER
PUTATIVEN
CIC-K-KANAELE
16
2.2.
SEQUENZANALYSE
DER
PUTATIVEN
CIC-K-KANAELE
20
2.3.
GEWEBEVERTEILUNG
DER
PUTATIVEN
CIC-K-KANAELE
21
2.3.1.
NORTHERN-BLOT-ANALYSE
21
2.3.2.
RT-PCR
AN
MIKRODISSIZIIERTEN
NEPHRONSEGMENTEN
22
2.4.
FUNKTIONELLE
EXPRESSION
DER
PUTATIVEN
CIC-K-KANAELE
24
2.4.1.
OPTIMIERUNG
DER
TRANSLATIONSEFFIZIENZ
25
2.4.2.
EXPRESSION
VON
CHIMAEREN
26
2.4.3.
EXPRESSION
VON
D3-MUTANTEN
26
2.4.4.
EXPRESSION
DER
CIC-K-PROTEINE
IN
ZELLINIEN
28
2.5.
ALTERNATIVES
SPLEISSEN
HUMANER
CIC-K-TRANSKRIPTE
30
2.6.
GLYKOSYLIERUNG
DER
CIC-KANAELE
33
2.7.
HCIC-K-SPEZIFISCHE
MARKER
FUER
HUMANGENETISCHE
LINKAGE
ANALYSEN
35
2.7.1.
RFLP-MARKER
36
2.7.2.
MIKROSATELLITEN-MARKER
37
3.
DISKUSSION
41
3.1.
KLONIERUNG
UND
EIGENSCHAFTEN
PUTATIVER
CIC-K-KANAELE
41
3.2.
VORKOMMEN
DER
PUTATIVEN
CIC-K-KANAELE
44
3.3.
FUNKTION
DER
PUTATIVEN
CIC-K-KANAELE
46
3.4.
ALTERNATIVES
SPLEISSEN
VON
HCIC-K-TRANSKRIPTEN
52
3.5.
DIE
TRANSMEMBRAN-TOPOLOGIE
DER
CIC-FAMILIE
53
3.6.
DIE
HCIC-K-GENE
ALS
KANDIDATENGENE
FUER
NIERENERKRANKUNGEN
57
4.
MATERIALIEN
59
4.1.
PUFFER
UND
LOESUNGEN
59
4.2.
CHEMIKALIEN
UND
ENZYME
59
4.3.
FILMMATERIAL
59
4.4. BAKTERIENSTAEMME
60
4.5.
MEDIEN
UND
PLATTEN
FUER
BAKTERIEN
60
4.6.
ZELLINIEN,
MEDIEN
UND
GEFAESSE
FUER
DIE
ZELLKULTUR
60
4.7.
VEKTOREN
61
4.8.
CDNA
BIBLIOTHEKEN
61
5.
METHODEN
62
5.1.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
62
5.1.1.
DURCHMUSTERN
VON
CDNA-BIBLIOTHEKEN
62
5.1.2.
PRAEPARATION
VON
NUKLEINSAEUREN
62
5.1.2.1.
PRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
62
5.1.2.2.
PRAEPARATION
VON
GENOMISCHER
DNA
63
5.1.2.3.
PRAEPARATION
VON
X-PHAGEN-DNA
63
5.1.2.4.
PRAEPARATION
VON
RNA
63
5.1.3.
REINIGUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
64
5.1.3.1.
ISOLIERUNG
VON
DNA
AUS
AGAROSEGELEN
64
5.1.3.2.
REINIGUNG
VON
SYNTHETISCHEN
OLIGONUKLEOTIDEN
64
5.1.4.
GELELEKTROPHORETISCHE
AUFTRENNUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
64
5.1.4.1.
AGAROSE-GELE
64
5.1.4.2.
POLYACRYLAMID-GELE
65
5.1.5.
KLONIERUNGSTECHNIKEN
65
5.1.5.1.
LIGATION
65
5.1.5.2.
TRANSFORMATION
65
5.1.6.
ENZYMATISCHE
MODIFIKATION
VON
DNA
65
5.1.6.1.
RESTRIKTIONSHYDROLYSE
65
5.1.6.2.
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
66
5.1.6.3.
TERMINALE
TRANSFERASEREAKTION
66
5.1.7.
IN
VITRO
SYNTHESE
VON
NUKLEINSAEUREN
66
5.1.7.1.
IN
VITRO
CRNA-SYNTHESE
66
5.1.7.2.
IN
VITRO
CDNA-SYNTHESE
67
5.1.8.
SEQUENZIERUNG
VON
PLASMID-DNA
67
5.1.9.
BLOT- UND HYBRIDISIERUNGSTECHNIKEN
67
5.1.9.1.
GENOMISCHER
SOUTHERN-BLOT
67
5.1.9.2.
NORTHEM-BLOT-ANALYSE VON
RNA
AUS
GEWEBE
68
5.1.9.3.
DOT-BLOT
ZUR
ANALYSE
VON
RNA
AUS
ZELLEN
68
5.1.9.4.
HYBRIDISIERUNG
68
5.1.10.
POLYMERASE-KETTEN-REAKTION
(PCR)
69
5.1.10.1.
RT-PCR
69
5.1.10.1.1.
RT-PCR
FUER
DIE
KLONIERUNG
NEUER
CIC-KANAELE
69
5.1.10.1.2.
RT-PCR
FUER
DIE
ANALYSE
DER
CIC-K-VERTEILUNG
71
5.1.10.2.
REKOMBINANTE
PCR
72
5.1.10.3.
PCR
ZUR
MIKROSATELLITENANALYSE
73
5.1.11.
KONSTRUKTION
VON
MUTANTEN
UND
CHIMAEREN
74
5.1.11.1.
T-CIC-K-KANAELE
74
5.1.11.2.
N
UND
C-TERMINALE CHIMAEREN
75
5.1.11.3.
CIC-K-MUTANTEN
FUER
GLYKOSYLIERUNGSEXPERIMENTE
78
5.1.11.4.
D3-MUTANTEN
79
5.1.11.5.
DELETIONSMUTANTEN
VON
C1C-0
81
5.1.11.6.
KONSTRUKTION
VON
C1C-K1
AUS
RCIC-KL
82
5.2.
PROTEINCHEMISCHE
METHODEN
83
5.2.1.
HERSTELLUNG
UND
AUFREINIGUNG
DES
PEPTID-ANTIKOERPERS
ANTI-RK2
83
5.2.1.1.
HERSTELLUNG
DES
PEPTID-ANTIKOERPERS
83
5.2.1.2.
AUFREINIGUNG
DES
PEPTID-ANTIKOERPERS
83
5.2.2.
IN
VITRO
TRANSLATION
UND
GLYKOSYLIERUNG
83
5.2.3.
IN
VIVO
TRANSLATION
IN
OOCYTEN
84
5.2.4.
SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
84
5.2.5.
IMMUNPRAEZIPITATION
84
5.3.
ZELLBIOLOGISCHE
METHODEN
85
5.3.1.
KULTIVIERUNG
VON
ZELLINIEN
85
5.3.2.
STABILE
TRANSFEKTION
VON
ZELLINIEN
85
5.3.2.1.
CALCIUMPHOSPHAT-TRANSFEKTION
85
5.3.2.2.
SELEKTION
TRANSFIZIERTER
ZELLEN
86
5.4.
ELEKTROPHYSIOLOGISCHE
METHODEN
86
5.4.1.
ANALYSE
VON
XENOPUS
OOCYTEN
86
5.4.2.
ANALYSE
VON
ZELLINIEN
87
ABKUERZUNGEN
88
LITERATURVERZEICHNIS
91 |
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