Herstellung und Charakterisierung monoklonaler Antikörper gegen canine (Hunde) T-Zellen:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1995
|
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| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1.
EINLEITUNG
1
1.1.
DER
HUND
ALS
MODELL
IN
DER
KNOCHENMARKTRANSPLANTATION
1
1.2.
ENTWICKLUNGSSTAND
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
GEGEN
HUNDEBLUTZELLEN
ZU
BEGINN
DER
ARBEIT
3
1.3.
ANTIKOERPERBEHANDLUNG
UND
TRANSPLANTATIONEN
BEIM
HUND
7
1.4.
TRANSPLANTATION
UND
ABSTOSSUNGSREAKTIONEN
12
1.5.
ZIEL
DER
ARBEIT
16
2.
MATERIAL
UND
METHODEN.
17
2.1.
ALLGEMEINES
17
2.1.1.
VERSUCHSTIERE
17
2.1.1.1.
VERSUCHSHUNDE
17
2.1.1.2.
MAUS
STAEMME
17
2.1.1.3.
RATTEN
STAEMME
18
2.1.1.4.
HAMSTER
18
2.1.2.
ZELLINIEN
18
2.1.2.1.
MYELOM-ZELLINIEN
18
2.1.2.2.
CANINE-ZELLINIEN
18
2.1.3.
ANTIKOERPER
19
2.1.3.1.
POLYKLONALE
SEREN
19
2.1.3.2.
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
20
2.1.4.
EINZELZELLPRAEPARATIONEN
21
2.1.4.1.
GEWINNUNG
VON
PBL
(PERIPHEREN-SSLUT-LYMPHOZYTEN)
21
2.1.4.2.
GEWINNUNG
VON
NADC
(NON-ADHERENT-QOG-CELLS)
22
2.1.4.3.
PRAEPARATION
VON
KNOCHENMARK
23
2.1.4.4.
EINZELZELLPRAEPARATION
VON
LYMPHATISCHEN
ORGANEN
23
2.1.4.5.
STIMULIERUNG
VON
T-LYMPHOZYTEN
DURCH
PHA
(PHYTOHAEMAGGLUTININ)
24
2.1.4.6.
PRAEPARATION
VON
ZELLOBERFLAECHENANTIGENEN
AUS
PBL
UND
THYMUS
24
2.1.4.7.
PRAEPARATION
VON
ZELLOBERFLAECHENANTIGENEN
UEBER
NHS-SAEULEN
25
2.2.
HERSTELLUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
27
2.2.1.
ZELLKULTURBEDINGUNGEN
27
2.2.2.
WACHSTUMSMEDIEN
28
2.2.2.1.
BASISMEDIUM
28
2.2.2.2.
SELEKTIONSMEDIEN
29
2.2.2.2.1.
HAT-MEDIUM
29
2.2.2.2.2.
HT-MEDIUM
30
2.2.2.2.3.
AZA-MEDIUM
30
2.2.3.
MAKROPHAGEN
30
2.2.4.
IMMUNISIERUNG
31
2.2.5.
FUSION
33
2.2.6.
REKLONIERUNG
35
2.2.7.
KRYOKONSERVIERUNG
35
2.2.8.
AUFTAUEN
VON
HYBRIDOMZELLEN
35
2.3.
HERSTELLUNG
GROSSER
MENGEN
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
36
2.3.1.
ANTIKOERPERGEWINNUNG
AUS
FLASCHENKULTUREN
36
2.3.2.
ANTIKOERPERGEWINNUNG
AUS
WANNENSTAPELN
37
2.3.3.
ANTIKOERPERGEWINNUNG
MIT
EINEM
BIOREAKTOR
37
2.4.
REINIGUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
38
2.4.1.
REINIGUNG
UEBER
PROTEIN
G
38
2.4.2.
REINIGUNG
DURCH
CAPRONSAEURE
UND
AMMONIUMSULFATFAELLUNG
39
2.5.
MARKIERUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
40
2.5.1.
FITC
MARKIERUNG
40
2.5.2.
BIOTIN
MARKIERUNG
41
'
3.
IN-VITRO
UNTERSUCHUNGEN
(MATERIAL
UND
METHODEN)
42
3.1.
SCREENING
42
3.1.1.
ELISA
42
3.1.2.
IMMUNOASSAY
43
3.1.3.
SCREENING
PER
FACS
(FLUORESCENS-ACTIVATED-CELL-SORTER)
45
3.1.3.1.
FACS-SCREENING
AUF
HUNDE-PBL
46
3.1.3.2.
FACS-ANALYSEN
MIT
ZELLSUSPENSIONEN
VERSCHIEDENER
LYMPHATISCHER
ORGANE
47
3.1.3.3.
FACS-ANALYSEN
MIT
CANINEN
ZELLINIEN
47
3.1.2.4.
FACS-ANALYSEN
AUF
PBL
VERSCHIEDENER
SPEZIES
ZUR
BESTIMMUNG
DER
KREUZREAKTIVITAET
47
3.2.
SUBKLASSENBESTIMMUNG
48
3.2.1.
MAUS-HYBRIDOME
49
3.2.2.
RATTEN-HYBRIDOME
50
3.3.
IMMUNHISTOLOGIE
50
3.4.
ANTIKOERPER-ABHAENGIGE
MODULATION
VON
OBERFLAECHENANTIGENEN
52
3.5.
C1Q-BINDUNGSTEST
54
3.6.
ANTIKOERPER-ABHAENGIGE
KOMPLEMENT-VERMITTELTE
ZYTOTOXIZITAET
54
3.7.
INHIBITIONSTEST
55
3.8.
KOINKUBATION
VERSCHIEDENER
ANTIKOERPERPAARE
56
3.9.
PANNING
57
3.10.
MOLEKULARGEWICHTSBESTIMMUNG
59
3.10.1.
MOEGLICHKEITEN
ZUR
ISOLIERUNG
DER
ANTIGEN/ANTIKOERPER
KOMPLEXE
59
3.10.1.1.
IMMUNPRAEZIPITATION
UEBER
ELISA-PIATTEN
59
3.10.1.2.
IMMUNPRAEZIPITATION
UEBER
ELISA-ROEHRCHEN
61
3.10.1.3.
IMMUNPRAEZIPITATION
UEBER
PROTEIN
G
61
3.10.2.
SDS-POLYACRYLAMID-FIEL-ELEKTOPHORESE
(SDS-PAGE)
62
3.10.3.
WESTERN
BLOT
64
4.
IN-VIVO
UNTERSUCHUNGEN
(MATERIAL
UND
METHODEN)
66
4.1.
DEPLETIONSVERSUCHE
IN-VIVO
66
4.1.1.
DEPLETIONSVERSUCH
MIT
ANTI-CANINE
THY-1
ANTIKOERPERN:
DOG13
UND
DOG14
67
4.1.2.
DEPLETIONSVERSUCH
MIT
EINEM
ANTI-CANINE
CD8
ANTIKOERPER:
DOG10
68
4.2.
NACHWEISBARKEIT
DER
INFUNDIERTEN
ANTIKOERPER
69
4.2.1.
NACHWEIS
DES
INFUNDIERTEN,
UNGEBUNDENEN
ANTIKOERPERS
IM
SERUM
69
4.2.2.
NACHWEIS
DES
INFUNDIERTEN,
ZELLGEBUNDENEN
ANTIKOERPERS
70
4.2.3.
NACHWEIS
DER
BILDUNG
VON
ANTI-ANTIKOERPERN
71
5.
ERGEBNISSE
72
5.1.
WACHSTUMS
UND
PRODUKTIONSVERHALTEN
VON
MAUS-,
RATTEN
UND
HAMSTER-HYBRIDOMEN
72
5.1.1.
MAUS-MAUS-HYBRIDOME
5.1.2.
RATTEN-MAUS-HYBRIDOME
5.1.3.
HAMSTER-MAUS-HYBRIDOME
72
72
72
5.2.
VOR
UND
NACHTEILE
DER
VERSCHIEDENEN
ANTIKOERPER-PRODUKTIONS
VERFAHREN
73
5.2.1.
FLASCHENKULTUREN
74
5.2.2.
WANNENSTAPEL
74
5.2.3.
BIOREAKTOREN
75
5.2.4.
ASZITES
76
5.3.
REINIGUNG
VON
ANTIKOERPERN
NACH
DER
HERSTELLUNG
IM
LABORMASSSTAB
ODER
ALS
MASSENPRODUKT
77
5.3.1.
REINIGUNG
UEBER
PROTEIN
G
77
5.3.2.
REINIGUNG
DURCH
CAPRONSAEURE
UND
AMMONIUMSULFATFAELLUNG
78
5.4.
MARKIERUNGSFAEHIGKEIT
DER
ANTIKOERPER
79
5.4.1.
FITC-MARKIERUNG
79
5.4.2.
BIOTIN-MARKIERUNG
79
5.5.
WAHL
DES
SCREENING-SYSTEMS
80
5.5.1.
EINFLUSS
DER
TESTZELLEN
AUF
DAS
SCREENING-SYSTEM
80
5.5.1.1.
DETEKTION
DER
IMMUNOASSAYS
MIT
PEROXIDASE
ODER
ALKALISCHER
PHOSPATASE-MARKIERTEN
KONJUGATEN
80
5.5.1.2.
DETEKTION
DER
IMMUNOASSAYS
MIT
FITC-MARKIERTEN
KONJUGATEN
85
5.5.2.
EINFLUSS
DES
KONSERVIERUNGSMITTELS
AUF
DAS
TESTSYTEM
85
5.6.
AUSWIRKUNGEN
VERSCHIEDENER
IMMUNISIERUNGSSCHEMATA
AUF
DIE
IGG
SUBKLASSEN
87
5.6.1.
MAUS-HYBRIDOME
87
5.6.2.
RATTEN-HYBRIDOME
88
5.7.
MODULATIONSFAEHIGKEIT
DER
ANTIKOERPER
88
5.7.1.
MAUS-ANTIKOERPER
88
5.7.2.
RATTEN-ANTIKOERPER
88
5.8.
C1Q-UPTAKE
UND
KOMPLEMENT-VERMITTELTE
ZYTOTOXIZITAET
92
5.9.
PANNING
EINES
MAUS-LGG1
(DOG
10)
UND
RATTEN-LGG2A
(YKIX302.9.3.7.)
KLONES
94
5.9.1.
DOG10
95
5.9.2.
YKIX302.9.3.7.
95
5.10.
RESULTATE
DER
VERSCHIEDENEN
METHODEN
ZUR
MOLEKULARGEWICHTS
BESTIMMUNG
DER
ANTIGENE
95
5.11.
CHARAKTERISIERTE
UND
ETABLIERTE
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
100
5.12.
CLAW:
1.
CANINE
LEUKOCYTE
ANTIGEN
WORKSHOP,
CAMBRIDGE,
ENGLAND,
JULY
1993
153
5.13.
INHIBITIONSSTUDIEN
154
5.13.1.
CD5
ANTIKOERPER
154
5.13.2.
CD8
ANTIKOERPER
155
5.13.3.
CD45
RA+
ANTIKOERPER
157
5.13.4.
THY-1
ANTIKOERPER
158
5.13.5.
FUSIONSSCREENING
UEBER
DIE
INHIBITION
VON
D0G10
UND
CD4-FITC
160
5.14.
KOINKUBATIONSSTUDIEN
161
5.14.1.
KOINKUBATIONSSTUDIEN
MIT
BIOTIN
UND
FITC-MARKIERTEN
ANTIKOERPERN
161
5.14.1.1.
KOINKUBATION
VON
THY-1
ANTIKOERPERN
162
5.14.2.
KOINKUBATIONSSTUDIEN
IN
FORM
VON
ADDITIVEN
ANTIKOERPER
INKUBATIONEN
164
5.15.
DEPLETIONSVERHALTEN
VON
MONOKLONALEN
ANTIKOERPERN
IM
HUND
166
5.15.1.
THY-1
DEPLETIONSVERSUCH
166
5.15.1.1.
VERTRAEGLICHKEIT
DER
THY-1
ANTIKOERPERINFUSIONEN
166
5.15.1.2.
ENTWICKLUNG
DES
ZELL
UND
T-ZELLVERLAUFS
NACH
THY-1
ANTIKOERPERINFUSIONEN
167
5.15.1.3.
ZIRKULATIONSDAUER
DES
ZELLGEBUNDENEN
UND
FREIEN
ANTIKOERPERS
IM
SERUM
UND
DAS
AUFTRETEN
VON
ANTI-ANTIKOERPERN
171
5.15.2.
CD8
DEPLETIONSVERSUCH
174
5.15.2.1.
VERTRAEGLICHKEIT
DER
CD8
ANTIKOERPERINFUSIONEN
174
5.15.2.2.
ENTWICKLUNG
DES
ZELL
UND
T-ZELLVERLAUFES
NACH
CD8
ANTIKOERPERINFUSIONEN
174
5.15.2.3.
ZIRKULATIONSDAUER
DES
ZELLGEBUNDENEN
UND
FREIEN
ANTIKOERPERS
IM
SERUM
UND
DAS
AUFTRETEN
VON
ANTI-ANTIKOERPERN
177
6.
DISKUSSION
179
6.1.
ENTWICKLUNG
UND
ETABLIERUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
GEGEN
HUNDE
BLUTZELLEN
IN
DIESER
DISSERTATION
179
6.2.
RESULTATE
DER
IMMUNISIERUNG
MIT
VERSCHIEDENEN
ZELLEN
UND
ZEITLICH
DIFFERIERENDEN
IMMUNISIERUNGSSCHEMATA
182
6.2.1.
IMMUNISIERUNGEN
MIT
VERSCHIEDENEN
ZELLEN
182
6.2.2.
ZEITLICH
VERSCHIEDENE
IMMUNISIERUNGESSCHEMATA
183
6.3.
EPITOPANALYSEN
DER
THY-1
ANTIKOERPER
184
6.4.
ANTIKOERPERPRODUKTION
FUER
IN-VIVO
VERSUCHE
185
6.5.
IN-VIVO
DEPLETIONSVERSUCHE
188
6.5.1.
CD8
DEPLETIONSVERSUCH
188
6.5.2.
THY-1
DEPLETIONSVERSUCH
189
6.6.
AUSBLICK
192
6.6.1.
ANTI-CANINE
MAK
IN
DER
KNOCHENMARKTRANSPLANTATION
192
6.6.2.
ANTI-CANINE
MAK
IN
DER
VETERINAER-MEDIZIN
194
6.6.3.
ANTI-CANINE
MAK
IN
DER
HUMAN-MEDIZIN
194
7.
ZUSAMMENFASSUNG
195
8.
LITERATURVERZEICHNIS
200
ANHANG:
CLAW-ANTIKOERPER
226
ANHANG:
PUBLIKATIONSFISTE
232
ANHANG:
KOOPERATIONEN
235
ANHANG:
ABKUERZUNGEN
238
ANHANG:
DANKSAGUNG
239
ANHANG:
LEBENSLAUF
241 |
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