Fettsäurebindungsproteine als vielseitig verwendbare Moleküle zur Fettsäurebestimmung und Herzinfarktdiagnostik mit integriert- und faseroptischen Sensoren:
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1995
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
1. ZUSAMMENFASSUNG 1
2. EINLEITUNG 4
2.1. OPTISCHE AFFINITAETSSENSOREN 5
2.2. FETTSAEUREBINDUNGSPROTEINE ALS REZEPTOREN FUER FREIE FETTSAEUREN 10
UND ALS HERZINFARKTMARKER
3. PROBLEMSTELLUNG 17
4. ERGEBNISSE 18
4.1. FASEROPTISCHER AFFINITAETSSENSOR ZUR BESTIMMUNG DER KONZENTRATION
FREIER FETTSAEUREN MIT FLUOROPHORMARKIERTEM L-FABP ALS REZEPTOR 18
4.1.1. BINDUNGS- UND VERDRAENGUNGSEXPERIMENTE MIT FREIEN FETTSAEUREN 18
4.1.2. PRODUKTION, REINIGUNG UND CHARAKTERISIERUNG DES
L-FABP/ACRYLODAN-KONJUGATS 20
4.1.3. FLUORESZENZSPEKTROSKOPISCHE BESTIMMUNG DER KONZENTRATION FREIER
FETTSAEUREN
IM KUEVETTENTEST 22
4.1.4. IMMOBILISIERUNG DES L-FABP/ACRYLODAN-KONJUGATS AUF GLASFASERN UND
MESSUNG
IM EVANESZENTEN FELD 25
4.1.5. AUFBAU EINES DUNCHFLUSSSYSTEMS MIT EXTRINSISCHER OPTODE 29
4.1.6. IMMOBILISIERUNGSEXPERIMENTE AUF VERSCHIEDENEN MEMBRANEN 31
4.1.7. BESTIMMUNG DER KONZENTRATION FREIER FETTSAEUREN MIT EXTRINSISCHER
OPTODE 32
4.1.8. MESSWERTVERGLEICH NACH MEMBRANAUSTAUSCH 33
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTSVERZEICHNIS
4.2. VERDRAENGUNGSPRINZIP ZUR BESTIMMUNG DER KONZENTRATION FREIER
FETTSAEUREN
MIT DEM GITTERKOPPLER 35
4.2.1. VORUNTERSUCHUNGEN 36
4.2.2. IMMOBILISIERUNG VON FETTSAEURE-DERIVATEN AUF SENSOR-GLASTRAEGEM 41
4.2.3. AUFBAU DER GITTERKOPPLER-MESSSTATION 42
4.2.4. GITTERKOPPLER-SENSOR ZUR BESTIMMUNG DER KONZENTRATION FREIER
FETTSAEUREN 49
4.2.5. UNTERSUCHUNG UNSPEZIFISCHER BINDUNGS- UND VERDRAENGUNGSPROZESSE
BEI DER
BESTIMMUNG DER KONZENTRATION FREIER FETTSAEUREN MIT DEM GITTERKOPPLER 56
4.2.6. REPRODUZIERBARKEIT BEI DER BESTIMMUNG DER KONZENTRATION FREIER
FETTSAEUREN MIT DEM GITTERKOPPLER 58
4.3. GITTERKOPPLER-IMMUNOSENSOR ZUR BESTIMMUNG DES HERZINFARKT
MARKERS H-FABP _ 60
4.3.1. IMMOBILISIERUNG VON ANTIKOERPERN UND H-FABP AUF SERISOR-GLASTRAEGEM
60
4.3.2. IMMOBILISIERUNGSKONTROLLEN UND OBERFLAECHENUNTERSUCHUNGEN MIT
ZEITAUFGELOESTER MASSENSPEKTROMETRIE 61
4.3.3. VERGLEICH VON KOVALENTER UND ADSORPTIVER IMMOBILISIERUNG MIT DEM
GITTERKOPPLER 65
4.3.4. UNTERSUCHUNG DER ANTIKOERPER FUER DEN H-FABP-SENSOR MIT DEM
GITTERKOPPLER 67
4.3.5. VERGLEICH VERSCHIEDENER ASSAY-KONFIGURATIONEN 69
4.3.6. KOMPETITIVES VERFAHREN ZUR BESTIMMUNG VON H-FABP MIT DEM
GITTERKOPPLER 71
4.3.7. REPRODUZIERBARKEIT DER H-FABP-BESTIMMUNG MIT DEM GITTERKOPPLER 79
5. DISKUSSION 81
6. EXPERIMENTELLER TEIL 95
6.1. MATERIALIEN, REAGENZIEN UND GERAETE 95
6.1.1. MATERIALIEN UND REAGENZIEN 95
6.1.2. GERAETE 96
6.2. ISOLIERUNG VON REKOMBINANTEM H- UND L-FABP 98
6.3. DARSTELLUNG UND CHARAKTERISIERUNG DES L-FABP/ACRYLODAN-KONJUGATS 99
INHALTSVERZEICHNIS
6.4. IMMOBILISIERUNG VON L-FABP UND L-FABP-ACRYLODAN AUF
ANORGANISCHEN TRAEGERN 101
6.4.1. IMMOBILISIERUNG AUF GLASFASERN 101
6.4.2. KOVALENTE IMMOBILISIERUNG AUF IMMUNODYNEMEMBRANEN 102
6.4.3. ADSORPTIVE IMMOBILISIERUNG AUF NITROCELLULOSE 102
6.4.4. IMMOBILISIERUNGSKONTROLLEN 103
6.5. PROTOKOLLE FUER FASEROPTISCHE SENSORMESSUNGEN ZUR BESTIMMUNG
DER KONZENTRATION FREIER FETTSAEUREN 104
6.5.1. SENSORMESSUNG IM EVANESZENTEN FELD 104
6.5.2. SENSORMESSUNG MIT EXTRINSISCHER OPTODE 104
6.6. IMMOBILISIERUNG VON FETTSAEUREN ~ 105
6.6.1. IMMOBILISIERUNG VON FETTSAEUREN AUF MEMBRANEN 105
6.6.2. VERDRAENGUNGSVERSUCHE MIT BLAUBANDMEMBRANEN 106
6.6.3. IMMOBILISIERUNG VON FETTSAEUREN AUF GLASTRAEGEM FUER MESSUNGEN
MIT DEM GITTERKOPPLER 107
6.7. PROTOKOLL FUER DIE BESTIMMUNG DER KONZENTRATION FREIER FETTSAEUREN
MIT DEM GITTERKOPPLER-SENSOR 109
6.8. IMMOBILISIERUNG VON ANTIKOERPERN UND H-FABP AUF SENSOR-GLASTRAEGERN
110
6.8.1. ADSORPTIVE UND KOVALENTE IMMOBILISIERUNG 110
6.8.2. IMMOBILISIERUNGSKONTROLLEN 111
6.9. PROTOKOLL FUER DIE H-FABP-BESTIMMUNG MIT DEM GITTERKOPPLER-SENSOR
113
7. LITERATURVERZEICHNIS 114 |
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