Reinigung und Charakterisierung heparinbindender Wachstumsfaktoren aus humanen Prostatakarzinomzellen:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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1995
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-I
INHALTSVERZEICHNIS
KAPITEL
INHALT
SEITE
0
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
1
1
EINLEITUNG
4
1.1
WACHSTUMSFAKTOREN
4
1.2
REGULATION
DES
TUMORWACHSTUMS
5
1.3
DIE
FAMILIE
DER
FIBROBLASTENWACHSTUMSFAKTOREN
(FGFS)
7
1.3.1
GESCHICHTE
DER
FIBROBLASTENWACHSTUMSFAKTOREN
7
1.3.2
EIGENSCHAFTEN
DER
FIBROBLASTENWACHSTUMSFAKTOREN
8
1.3.3
FGF
-
EIN
ANGIOGENESEFAKTOR
10
1.4
DAS
PROSTATAKARZINOM
11
2
PROBLEMSTELLUNG
16
3
MATERIAL
UND
METHODEN
19
3.1
ZELLEN
UND
ZELLKULTUREN
19
3.2
PROLIFERATIONSASSAYS
20
3.2.1
ADHAERENTER
PROLIFERATIONSASSAY
20
3.2.2
WEICHAGAR-ASSAY
21
3.2.3
KOKULTUREXPERIMENTE
22
3.2.3.1
KOKULTUREXPERIMENTE
IM
WEICHAGAR
22
3.2.3.2
KOKULTUREXPERIMENTE
IM
FLUESSIGMEDIUM
23
3.2.4
MTT-ASSAY
24
3.2.5
QUANTIKINEHS-ASSAY
27
3.3
KOMPETITIONSASSAYS
28
3.3.1
RADIOREZEPTORASSAY
28
3.3.2
KOMPETITIONSASSAY
MIT
BIOTINYLIERTEM
BFGF
30
3.4
GEWINNUNG
DES
KONDITIONIERTEN
MEDIUMS
31
3.4.1
KONDITIONIERTES
MEDIUM
AUS
ZELLKULTURSCHALEN
32
3.4.2
KONDITIONIERTES
MEDIUM
AUS
MICROCARRIER-KULTUREN
34
3.4.3
KONDITIONIERTES
MEDIUM
AUS
YYHOLLOW-FIBER
CELL
CULTURE
"
-SYSTEM
35
3.5
ZELLAUFSCHLUSS
36
3.6
CHROMATOGRAPHISCHE
METHODEN
36
-N
3.6.1
HEPARIN-SEPHAROSE
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
37
3.6.1.1
KALIBRIERUNG
DER
HEPARIN-SEPHAROSE
AFFINITAETSSAEULE
37
3.6.1.2
VERSUCHSDURCHFUEHRUNG
41
3.6.2
ANIONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
42
3.6.3
GELFILTRATION
42
3.6.3.1
KALIBRIERUNG
DER
GELFILTRATIONSSAEULE
42
3.6.3.2
VERSUCHSDURCHFUEHRUNG
44
3.6.4
REVERSED
PHASE
CHROMATOGRAPHIE
44
3.6.5
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
MIT
AFFI-GEL
BLUE-SAEULE
45
3.7
PROTEINBESTIMMUNG
45
3.8
SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE(SDS-PAGE)
48
3.9
IMMUNOBLOTTING
49
3.9.1
DOT-BLOT
49
3.9.1.1
VERGLEICH
DER
METHODIK
RADIOAKTIVE/CHEMILUMINESZENS-DETEKTION
49
3.9.1.2
VERGLEICH
VERSCHIEDENER
PRIMAERANTIKOERPER;
BESTIMMUNG
DES
KONZENTRATIONSOPTIMUMS
50
3.9.2
WESTERN-BLOT
51
3.10
COOMASSIE
BRILLIANT
BLAU-FAERBUNG
52
3.11
PARTIALSEQUENZIERUNG
52
3.12
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
53
3.13
MATERIAL
UND
GERAETE
53
4
ERGEBNISSE
58
4.1
CHARAKTERISIERUNG
DER
ZELLINIEN
58
4.1.1
LNCAP-ZELLEN
58
4.1.1.1
STIMULATION
DURCH
ANDROGENE
58
4.1.1.2
STIMULATION
DURCH
WACHSTUMSFAKTOREN
60
4.1.2
DU-145-ZELLEN
63
4.1.2.1
STIMULATION
DURCH
ANDROGENE
63
4.1.2.2
STIMULATION
DURCH
WACHSTUMSFAKTOREN
64
4.1.3
SW-13-ZELLEN
66
4.1.3.1
STIMULATION
DURCH
ANDROGENE
66
4.1.3.2
STIMULATION
DURCH
WACHSTUMSFAKTOREN
66
4.1.3.3
STIMULATION
DURCH
HISTONE
67
4.1.4
FBHE-ZELLEN
68
4.1.4.1
STIMULATION
DURCH
ANDROGENE
68
4.1.4.2
STIMULATION
DURCH
WACHSTUMSFAKTOREN
68
-M
4.2
INHIBITION
DURCH
POLYANIONEN
70
4.2.1
SURAMIN
72
4.2.2
DEXTRANSULFAT
73
4.2.3
INHIBITION
ANDROGENSTIMULIERTER
LNCAP-ZELLEN
DURCH
POLYANIONEN
76
4.2.4
INHIBITION
TGFA-STIMULIERTER
ZELLEN
DURCH
POLYANIONEN
78
4.3
ETABLIERUNG
DES
MTT-ASSAYS
80
4.4
VORVERSUCHE
ZUM
NACHWEIS
FGF-AEHNLICHER
BIOAKTIVITAETEN
AUS
KONDITIONIERTEN
MEDIEN
83
4.4.1
BIOAKTIVITAETEN
AUS
MEDIENKONZENTRATEN
83
4.4.2
KOKULTUREXPERIMENTE
85
4.4.2.1
KOKULTUREXPERIMENTE
IM
FLUESSIGMEDIUM
MIT
FILTER-INSERTS
85
4.4.2.2
KOKULTUREXPERIMENTE
IM
WEICHAGAR
86
4.4.3
BIOAKTIVITAETEN
AUS
INITIALGEREINIGTEN
KONDITIONIERTEN
MEDIEN
88
4.4.3.1
GELFILTRATION
88
4.4.3.2
HEPARIN-SEPHAROSE
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
91
4.5
CHROMATOGRAPHISCHE
TRENNUNGEN
92
4.5.1
HEPARIN-SEPHAROSE
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
92
4.5.1.1
LNCAP-ZELLEN
92
4.5.1.1.1
KONDITIONIERTES
MEDIUM
92
4.5.1.1.2
QUANTIKINEHS-ASSAY
96
4.5.1.2
DU-145-ZELLEN
96
4.5.1.2.1
KONDITIONIERTES
MEDIUM
96
4.5.1.2.2
ZELL-LYSAT
100
4.5.1.2.3
QUANTIKINEHS-ASSAY
101
4.5.2
ANIONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
102
4.5.3
GELFILTRATION
104
4.5.4
REVERSED
PHASE
CHROMATOGRAPHIE
105
4.5.5
AFFI-GEL
BLUE-AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
106
4.6
WESTERN-BLOT
108
4.6.1
LNCAP-ZELLEN
108
4.6.2
DU-145-ZELLEN
109
4.7
PARTIALSEQUENZIERUNG
114
5
DISKUSSION
117
5.1
MODELLSYSTEM
117
5.2
ZELLINIEN
UND
BIOASSAYS
118
5.3
DEXTRANSULFAT
UND
SURAMIN
ALS
INHIBITOREN
AUF
AUTO-/PARAKRINE
-IV
5.4
5.5
5.6
MECHANISMEN
122
SEKRETION
HEPARINBINDENDER
WACHSTUMSFAKTOREN
(BFGF
UND
HISTONE)
123
SEKRETION
VON
HMG2
UND
P28-AMPHOTERIN
126
SCHLUSSBETRACHTUNGEN
UND
AUSBLICK
127
6
ZUSAMMENFASSUNG
130
7
LITERATUR
133 |
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