Selbst-Assoziation des Ahhäsivproteins Vitronektin:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1994
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SEITE
1.
EINLEITUNG
1.1.
ZELL-MATRIX-INTERAKTIONEN
1
1.2.
REZEPTOREN
FUER
ADHAESIVPROTEINE
2
1.2.1.
INTEGRINE
2
1.2.2.
NON-INTEGRIN-REZEPTOREN
5
1.3.
ADHAESIVPROTEINE
5
1.4.
VITRONEKTIN
8
1.4.1.
VORKOMMEN
IM
ORGANISMUS
8
1.4.2.
STRUKTUR
UND
KONFORMATION
9
1.4.3.
FUNKTION
13
I.4.3.I.
VITRONEKTIN
ALS
ADHAESIVPROTEIN
13
I.4.3.2.
VITRONEKTIN
IN
DER
BLUTGERINNUNG
14
I.4.3.3.
VITRONEKTIN
IM
FIBRINOLYSESYSTEM
14
1.5.
BEDEUTUNG
VON
MULTIMERISIERUNGSPROZESSEN
BEI
ADHAESIVPROTEINEN
15
1.6.
ZIELSETZUNG
16
2.
MATERIAL
18
2.1.
ZELLMATERIAL
18
2.2.
ANTIKOERPER
18
2.3.
PROTEINE
UND
ENZYME
18
2.4.
REAGENZIEN
19
2.5.
GERAETE
19
2.6.
PUFFER
20
3.
METHODEN
21
3.1.
BIOCHEMISCHE
METHODEN
21
3.1.1.
SDS-GELEKTROPHORESE
(PAGE)
21
3.1.2.
MOLEKULARGEWICHTSBESTIMMUNG
22
3.1.3.
NATIVE
POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORCSE
23
3.1.4.
FAERBEMETHODEN
UND
FOTODOKUMENTATION
24
3.1.5.
DENSITOMETRISCHE
AUSWERTUNG
DER
GELE
25
3.1.6.
PROTEINBESTIMMUNG
25
3.1.7.
GELFILTRATION
25
3.1.8.
BESTIMMUNG
DES
MOLEKULARGEWICHTS
UND
DES
STOKE'SCHEN
RADIUS
26
3.1.9.
ULTRAZENTRIFUGATION
26
INHALTSVERZEICHNIS
3.1.10.
BEHANDLUNGEN
VON
VITRONEKTIN
ZUR
INDUKTION
VON
27
KONFORMATIONSAENDERUNG
UND
MULTIMERISIERUNG
3.1.11.
BEHANDLUNG
VON
PLASMA
MIT
HEPARIN
28
3.2.
IMMUNOLOGISCHE
METHODEN
28
3.2.1.
WESTEM-BLOT-ANALYSE
28
3.2.2.
LIGANDEN-BLOT
29
3.2.3.
ENZYME-LINKED
IMMUNO
SORBENT
ASSAY
(ELISA)
29
3.2.3.I.
DIREKTER
ELISA
29
3.2.3.2.
MATRIX-ELISA
30
3.2.3.3.
INDIREKTER
ELISA
30
3.2.3.4.
KOMPETITIONS-ELISA
31
3.2.3.5.
AUSWERTUNG
UND
KONTROLLEN
32
3.2.4.
HEPARIN-BINDUNGSTEST
33
3.3.
ENZYMATISCHE
SPALTUNG
VON
VITRONEKTIN
DURCH
PLASMIN
33
3.3.1.
PLASMIN-GENERIERUNG
AUS
PLASMINOGEN
33
3.3.2.
CHROMOGENER
SUBSTRATTEST
34
3.3.3.
PROTEOLYSE
VON
VITRONEKTIN
DURCH
PLASMIN
34
3.4.
GEWINNUNG
VON
THROMBOZYTEN-RELEASATE
35
3.4.1.
THROMBOZYTENISOLIERUNG
35
3.4.2.
GELFILTRATION
DER
GEWASCHENEN
THROMBOZYTEN
35
3.4.3.
HERSTELLUNG
VON
THROMBOZYTEN-RELEASATE
36
3.5.
ZELLKULTUR
36
3.5.1.
ZELLKULTURMEDIEN
36
3.5.2.
PRAEPARATION
VON
HUMANEN
UMBILIKALVCNCNCNDOTHCLZCLLCN
(HUVEC)
37
3.5.3.
ZELLPASSAGE
38
3.5.4.
VITALITAETSTESTS
UND
ZELLZAEHLUNG
38
3.5.4.I.
ZELLZAEHLUNG
38
3.5.4.2.
TRYPANBLAU-FAERBUNG
38
3.5.4.3.
MTT-ZYTOTOXIZITAETSLEST
38
3.5.5.
PRAEPARATION
DER
HUVEC-MATRIX
39
3.5.6.
ZELLADHAESIONSTEST
39
3.5.6.I.
VERWENDETE
ZCLLINIEN
39
3.5.6.2.
ADHAESIONSTEST
40
3.5.6.3.
AUSWERTUNG
DER
ADHAESIONSDATEN
42
4.
ERGEBNISSE
43
4.1.
INDUKTION
DER
KONFORMATIONSAENDERUNG
VON
GEREINIGTEM
VITRONEKTIN
43
4.1.1.
INDUKTION
DER
KONFORMATIONSAENDERUNG
VON
GEREINIGTEM
VITRONEKTIN
43
4.1.1.1.
INDUKTION
DURCH
HARNSTOFF
43
4.1.1.2.
INDUKTION
DURCH
DETERGENZIEN,
PH-VERSCHIEBUNGEN
UND
TEMPERATURBEHANDLUNGEN
47
4.1.2.
NACHWEIS
DER
HEPARINBINDUNG
AN
VITRONEKTIN
49
4.1.3.
NACHWEIS
DER
KONFORMATION
VON
IMMOBILISIERTEM
VITRONEKTIN
50
4.2.
INDUKTION
VON
VITRONEKTIN-MULTIMEREN
54
4.2.1.
NACHWEIS
IN
DER
NATIVEN
GELELEKTROPHORESE
54
4.2.1.1.
INDUKTION
DURCH
HARNSTOFF
54
4.2.1.2.
INDUKTION
DURCH
DETERGENZIEN
59
4.2.1.3.
INDUKTION
DURCH
PH-VERSCHIEBUNGEN
UND
TEMPERATURBEHANDLUNGEN
60
4.2.2.
NACHWEIS
VON
MULTIMEREN
IN
DER
SDS-GELELEKTROPHORESE
61
4.3.
CHARAKTERISIERUNG
DER
MULTIMERC
61
4.3.1.
GELFILTRATION
61
4.3.2.
ULTRAZENTRIFUGATION
64
4.4.
KONFORMATION
UND
MULTIMERC
VON
VITRONEKTIN
IM
PLASMA,
SERUM
UND
THROMBOZYTEN-RELEASATE
64
4.4.1.
NACHWEIS
DES
KONFORMATIONSZUSTANDES
VON
VITRONEKTIN
IN
PLASMA,
SERUM
UND
THROMBOZYTEN-RELEASATE
64
4.4.2.
NACHWEIS
VON
MULTIMEREN
IN
PLASMA,
SERUM
UND
THROMBOZYTEN
RELEASATE
67
4.4.3.
MOLEKULARGEWICHTSBCSTIMMUNG
VON
VITRONEKTIN
AUS
THROMBOZYTEN
RELEASATE
69
4.5.
PROTEOLYTISCHE
SPALTUNG
VON
VITRONEKTIN
DURCH
PLASMIN
69
4.5.1.
BINDUNG
VON
GPIIB/IIIA-REZCPTOR
AN
PLASMIN-SPALTPRODUKTC
VON
VITRONEKTIN
70
4.6.
WECHSELWIRKUNG
VON
VITRONEKTIN
MIT
ADHAESIVEN
ZELLEN
72
4.6.1.
UNTERSUCHUNGEN
AN
MG
63-ZCLLCN
73
4.6.1.1.
ADHAESION
AUF
INTAKTEM
VITRONEKTIN
73
4.6.I.2.
ADHAESION
AUF
VITRONEKTIN-SPALTPRODUKTC
76
4.6.2.
UNTERSUCHUNGEN
AN
CHO-ZELLEN
79
4.6.3.
UNTERSUCHUNGEN
AN
SCHWEINE-ENDOTHELZCLLCN
81
INHALTSVERZEICHNIS
5.
DISKUSSION
84
5.1.
NACHWEIS
DER
KONFORMATIONSAENDERUNG
VON
VITRONEKTIN
84
5.2.
INDUKTION
UND
CHARAKTERISIERUNG
VON
VITRONEKTIN-MULTIMEREN
88
5.3.
MECHANISMEN
DER
MULTIMERENBILDUNG
90
5.4.
VORKOMMEN
VON
VITRONEKTIN-MULTIMEREN
IN
VIVO
93
5.4.1.
MULTIMERE
IN
PLASMA
UND
SERUM
93
5.4.2.
MULTIMERE
IM
THROMBOZYTEN-RELEASATE
94
5.4.3.
MULTIMERE
IN
DER
EXTRAZELLULAEREN
MATRIX
95
5.5.
EINFLUSS
DER
MULTIMERISIERUNG
AUF
FUNKTIONEN
VON
VITRONEKTIN
95
5.5.1.
EINFLUSS
AUF
DIE
ADHAESIVFUNKTION
95
5.5.2.
EINFLUSS
AUF
DIE
PLASMINPROTEOLYSE
98
5.5.3.
PERSPEKTIVEN
UEBER
MOEGLICHE
FUNKTIONEN
VON
MULTIMEREM
VITRONEKTIN
IN
VIVO
99
6.
ZUSAMMENFASSUNG
101
7.
LITERATUR
103 |
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