Reindarstellung und Kristallisation des Membranproteins Bacteriorhodopsin:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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1995
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I
INHALT
0
VERZEICHNIS
DER
VERWENDETEN
ABKUERZUNGEN
V-VI
1
EINLEITUNG
UND
ZIELSETZUNG
1
2
VORKOMMEN
UND
EIGENSCHAFTEN
VON
BACTERIORHODOPSIN
5
2.1
HALOBACTERIUM
HALOBIUM
5
2.1.1
BAKTERIENKULTUR
7
2.2
PURPURMEMBRAN
8
2.2.1
PRAEPARATION
8
2.3
BACTERIORHODOPSIN
11
2.3.1
SOLUBILISIERUNG
14
2.3.2
OBERFLAECHENLADUNG
19
2.3.3
DER
PHOTOZYKLUS
VON
BACTERIORHODOPSIN
22
3
ISOELEKTRISCHE
FOKUSSIERUNG
26
3.1
EINFUEHRUNG
26
3.2
MATERIAL
UND
METHODEN
27
3.2.1
DURCHFUEHRUNG
DER
ISOELEKTRISCHEN
FOKUSSIERUNG
27
3.2.2
DURCHFUEHRUNG
DER
SDS-POLYACRYLAMIDGEL
ELEKTROPHORESE
29
3.3
ERGEBNISSE
UND
DISKUSSION
30
4
UNTERSUCHUNG
DES
LICHTEINFLUSSES
AUF
DIE
ENTSTEHUNG
VON
HETEROGENITAETEN
IM
BACTERIORHODOPSIN
36
4.1
EINFUEHRUNG
36
4.2
MATERIAL
UND
METHODEN
37
4.2.1
EINRICHTUNG
DER
DUNKELKAMMER
37
4.2.2
DURCHFUEHRUNG
DER
VERSUCHE
37
4.3
ERGEBNISSE
UND
DISKUSSION
38
II
INHALT
S
UNTERSUCHUNG
DES
GEHALTES
DER
AN
BACTERIORHODOPSIN
ASSOZI
IERTEN
LIPIDE
AUF
DIE
ENTSTEHUNG
VON
HETEROGENITAETEN
IM
BACTERIORHODOPSIN
40
5.1
EINFUEHRUNG
40
5.2
MATERIAL
UND
METHODEN
44
5.3
AUSWERTUNG
45
5.4
ERGEBNISSE
UND
DISKUSSION
46
5.4.1
VERGLEICH
DES
MOLAREN
VERHAELTNISSES
VON
LIPID
ZU
BACTERIORHODOPSIN
DER
PURPUNNEMBRAN
MIT
ERGEBNISSEN
AUS
DER
LITERATUR
47
5.4.2
VERGLEICH
DER
MOLAREN
VERHAELTNISSE
VON
LIPID
ZU
BACTERIORHODOPSIN
DER
EINZELNEN
SOLUBILI
SIERUNGSSCHRITTE
UND
DER
PURPURMEMBRAN
49
5.4.3
ZUSAMMENFASSUNG
DER
ERGEBNISSE
52
6
TITRATION
VON
BACTERIORHODOPSIN
54
6.1
EINFUEHRUNG
54
6.2
BERECHNUNG
DER
EFFEKTIVEN
LADUNG
55
6.3
MATERIAL
UND
METHODEN
66
6.4
ERGEBNISSE
UND
DISKUSSION
66
7
CHROMATOFOKUSSIERUNG
70
7.1
EINFUEHRUNG
70
7.2
MATERIAL
UND
METHODEN
71
7.2.1
APPARATUR
71
7.2.2
EXPERIMENTELLE
DURCHFUEHRUNG
72
7.3
ERGEBNISSE
UND
DISKUSSION
74
7.3.1
ZUSAMMENFASSUNG
DER
ERGEBNISSE
84
INHALT
III
8
CHEMISCHE
MODIFIZIERUNG
VON
BACTERIORHODOPSIN
86
8.1
EINFUEHRUNG
86
8.2
MATERIAL
UND
METHODEN
87
8.3
ERGEBNISSE
UND
DISKUSSION
88
9
KRISTALLISATION
VON
MEMBRANPROTEINEN
92
9.1
EINFUEHRUNG
92
9.2
KRISTALLISATIONSTECHNIKEN
97
9.2.1
EINTOPFKRISTALLISATION
(BATCH
CRYSTALLISATION)
98
9.2.2
DAMPFDIFFUSION
99
9.2.3
MIKRODIALYSE
100
9.3
KONZEPT
DER
MISCHKRISTALLBILDUNG
106
9.4
DIE
KRISTALLISATION
BEEINFLUSSENDE
PARAMETER
107
9.5
BISHER
BEKANNTE
BACTERIORHODOPSIN-KRISTALLFORMEN
111
9.6
MATERIAL
UND
METHODEN
114
9.6.1
STAMMLOESUNGEN
114
9.6.2
VORBEREITUNG
DER
KRISTALLISATIONSLOESUNGEN
115
9.6.3
KRISTALLISATIONSANSAETZE
116
9.6.3.1
DAMPFDIFFUSION
116
9.6.3.2
DIALYSE
117
9.6.4
BEURTEILUNG
DER
KRISTALLISATIONSANSAETZE
117
9.7
ERGEBNISSE
UND
DISKUSSION
118
9.7.1
SITTING-DROP-EXPERIMENTE
118
9.7.2
DIALYSE-VERSUCHE
121
9.7.3
BEURTEILUNG
DER
ERGEBNISSE
124
9.7.3.1
KRISTALLISATIONSMETHODE
124
9.7.3.2
VARIATION
DER
VERSUCHSPARAMETER
125
10
ZUSAMMENFASSUNG
UND
AUSBLICK
129
IV
INHALT
11
LITERATUR
133
12
ANHANG
144
12.1
REAGENZIENANHANG
144
12.1.1
GELREZEPTUREN
UND
DABEI
VERWENDETE
LOESUNGEN
144
12.1.2FAERBEREZEPTUREN
UND
FAERBEZEITEN
FUER
DAS
PHAST-SYSTEM
145
12.2
DEFINITIONEN
DES
POLYACRYLAMIDGEHALTES
(T)
UND
DES
VEMETZUNGSGRADES
(C)
147
12.3
HERSTELLEMACHWEIS
148 |
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