Die Southern-Blot-Analyse als Diagnose- und Verlaufsparameter bei Non-Hodgkin-Lymphomen: Untersuchung der Genkonfiguration der Antigenrezeptorgene und des Bcl-2-Onkogens
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1995
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
9-22
1.1
LYMPHOME
UND
IHRE
DIAGNOSE
9
1.2
ENTSTEHUNG
DER
ANTIKOERPERDIVERSITAET
10
1.3
SEQUENTIELLE
AKTIVIERUNG
DER
IMMUNGLOBULINGEN
UMLAGERUNG
11
1.4
DIAGNOSTISCHE
MOEGLICHKEITEN
VON
IMMUNGENOTY
PISCHEN
STUDIEN
13
1.5
LINIENSPEZIFITAET
DER
GENREARRANGEMENTS
UND
CROSS-LINEAGE-REARRANGEMENT
14
1.6
MONOKLONALITAET
UND
MALIGNITAET
15
1.7
DIE
BCL-2-TRANSLOKATION
T(14;18)(Q32;Q21)
16
1.8
DIAGNOSTISCHE
AUSSAGEKRAFT
DER
T(14;18)-TRANS
LOKATION
19
1.9
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
20
2.
MATERIAL
22-27
2.1
CHEMIKALIEN
UND
SUBSTANZEN
FUER
DIE
SOUTHERN
BLOT
ANALYSE
22
2.2
CHEMIKALIEN
UND
SUBSTANZEN
FUER
DIE
POLYMERASE
KETTENREAKTION
24
2.3
CHEMIKALIEN
UND
SUBSTANZEN
FUER
DAS
KLONIEREN
VON
DSDNA-SONDEN
25
2.4
APPARATE
UND
MATERIALIEN
27
3.
METHODEN
29-56
3.1
SOUTHERN-BLOT-ANALYSE
29
3.1.1
DNA-EXTRAKTION
29
3.1.1.1
PRAEPARATION
GENOMISCHER
DNA
29
3.1.1.2
BESTIMMUNG
VON
REINHEIT
UND
KONZENTRATION
DER
DNA
29
3.1.2
GELELEKTROPHORESE
30
3.1.2.1
VORBEREITUNG
DES
GELES
30
3.1.2.2
RESTRIKTIONSENZYMVERDAU
DER
DNA
30
3.1.2.3
GELELKTROPHORETISCHE
AUFTRENNUNG
DER
DNA-PROBEN
31
3.1.2.4
PHOTOGRAPHIE
DES
GELES
31
3.1.3
SOUTHERN-BLOTTING
32
3.1.3.1
VORBEREITUNG
DES
TRANSFERS
32
3.1.3.2
BLOTTING-SCHRITTE
32
3.1.3.2.1
DEPURINIEREN
32
3.1.3.2.2
DENATURIEREN
33
3.1.3.2.3
NEUTRALISIEREN
33
3.1.3.2.4
DNA-TRANSFER
33
3.1.3.2.5
SPUELEN
UND
FIXIERUNG
DER
DNA
AUF
DER
MEMBRAN
33
3.1.4
HYBRIDISIERUNG
DES
SOUTHERN-BLOTS
MIT
RADIO
34
AKTIV
MARKIERTEN
DNA-SONDEN
3.1.4.1
VERWENDETE
DNA-SONDEN
34
3.1.4.2
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
DER
HYBRIDISIERUNGSPROBEN
35
3.1.4.3
HYBRIDISIERUNG
DES
SOUTHEM-BLOTS
36
3.1.4.3.1
PRAEHYBRIDISIEREN
UND
HYBRIDISIEREN
36
3.1.4.3.2
WASCHEN
DES
HYBRIDISIERTEN
BLOTS
36
3.1.4.3.3
AUTORADIOGRAPHIE
37
3.1.4.3.4
DEHYBRIDISERUNG
UND
REHYBRIDISIERUNG
37
3.1.4.4
PRINZIP
DER
AUSWERTUNG
EINER
SOUTHEM-BLOT-ANALYSE
38
3.2
POLYMERASE-KETTENREAKTION
40
3.2.1
ZIEL-DNA
(TEMPLATE-DNA)
40
3.2.2
PRIMER
40
3.2.3
KONTROLLREAKTIONEN
40
3.2.3.1
NACHWEIS
DES
GENOMISCHEN
BCL-2-GENES
40
3.2.3.2
POSITIVKONTROLLE
FUER
DIE
T(
14;
1
8)(Q32;Q21)
41
3.2.3.3
NEGATIVKONTROLLE
41
3.2.3.4
REAGENTIENKONTROLLE
41
3.2.4
REAKTIONSBEDINGUNGEN
41
3.2.5
NACHWEIS
DES
PCR-PRODUKTES
42
3.2.5.1
GELELEKTROPHORESE
42
3.2.5.2
BLOTTING
42
3.2.5.3
HYBRIDISIERUNG
43
33
KLONIEREN
VON
DSDNA-SONDEN
ZUR
SOUTHERN-BLOT-
43
HYBRIDISTERUNG
3.3.1
EINFUEHRUNG
43
3.3.2
LIGIERUNG
43
3.2.2.1
LINEARISIEREN
DES
PLASMIDS:
SPALTUNG
MIT
DER
RESTRIKTIONS-
43
ENDONUCLEASE
ECORI
3.2.2.2
DEPHOSPHORYLIERUNG
DES
5'-TERMINUS
UND
PHENOL-CHLOROFORM-
44
ISOAMYL
EXTRAKTION
3.2.2.3
INSERT-DNA
45
3.2.2.4
LIGIERUNGSREAKTION
45
3.3.3
TRANSFORMATION
46
3.3.3.1
VORBEREITUNG
UND
KOMPETENZINDUKTION
DER
E.COLI-WIRTSZELLEN
46
3.3.3.1.1
AUFZUCHT
IN
DIE
EXPONENTIELLE
WACHSTUMSPHASE
46
3.3.3.1.2
CALCIUMCHLORID-PROZEDUR
47
3.3.3.2
TRANSFORMATION
47
3.3.3.2.1
INTERNALISIERUNG
DES
REKOMBINANTEN
PLASMIDES
47
3.3.3.2.2
EXPRESSION
DER
ANTIBIOTIKARESISTENZ
UND
SELEKTION
DER
48
TRANSFORMANTEN
3.3.4
QUALITAETSKONTROLLEN
DER
ARBEITSSCHRITTE
48
3.3.4.1
NEGATIVKONTROLLE
48
3.3.4.2
KOMPETENZKONTROLLE
49
3.3.4.3
KONTROLLE
DER
LIGIERUNG
49
3.3.4.4
STERILITAETSKONTROLLE
49
3.3.4.S
KONTROLLE
DER
ALKALISCHEN-PHOSPHATASE-BEHANDLUNG
50
3.3.5
AMPLIFIKATION
UND
ISOLATION
DES
REKOMBI
50
NANTEN
PLASMIDES
3.3.5.1
SELEKTION
DER
REKOMBINANT
TRANSFORMIERTEN
KLONE
50
3.3.5.2
KONTROLLE
DER
TRANSFORMATION
DURCH
MINIPREP-ISOLATION
50
3.3.S.3
LARGE-SCALE-PRAEPARATION
DES
PLASMIDES
52
3.3.5.3.1
AUFZUCHT
EINES
TRANSFORMIERTEN
KLONS
52
3.3.5.3.2
PLASMIDISOLATION
UND
AUFREINIGUNG
53
33.5.3.3
PRAEPARATION
DER
INSERT-DNA
55
3.3.6
ANMERKUNG:
SATELLITENBILDUNG
57
3.3.7
ZUSAMMENFASSUNG
DER
METHODE
57
4.
ERGEBNIS:
59-105
SOUTHERN-BLOT-UNTERSUCHUNGEN
AN
NON
HODGKIN-LYMPHOMEN
DER
B-ZELL
REIHE
4.1
LYMPHOZYTISCHE
LYMPHOME
60
4.1.1
CHRONISCH
LYMPHATISCHE
LEUKAEMIE
60
4.1.1.1
KLINISCHE
DATEN
DER
PATIENTEN
60
4.1.1.2
ERGEBNISSE
61
4.1.1.2.1
JH-HYBRIDISIENING
61
4.1.1.2.2
CP-HYBRIDISERUNG
63
4.1.1.2.3
TSS-HYBRIDISERUNG
64
4.1.1.3
INTERPRETATION
DER
ERGEBNISSE:
INTERPRETATION
DER
VERSCHIEDENEN
BANDEN
64
A)
AUSPRAEGUNG
UND
INTENSITAET
DER
GERMLINE
65
B)
ZELLULAERE
ZUORDNUNG
DER
KEIMBAHNBANDE
BEI
EINER
UMLAGERUNG
66
C)
ZAHL
DER
UMGELAGERTEN
BANDEN
67
D)
VERHALTEN
DES
KLONES
IN
VERSCHIEDENEN
KOMPARTIMENTEN
68
F)
VERHALTEN
DES
KLONES
IM
VERLAUF
EINES
HALBEN
JAHRES
68
4.1.2
HAARZELLEUKAEMIE
69
4.1.2.1
KLINISCHE
DATEN
DER
PATIENTEN
69
4.1.2.2
ERGEBNISSE
71
4.1.2.3
INTERPRETATION
UND
DISKUSSION
DER
ERGEBNISSE
72
4.2
PLASMOZYTISCHE
UND
IYMPHOPLASMOZYTOIDE
75
LYMPHOME:
PLASMOZYTOM,
M.WALDENSTROEM
UND
IMMUNOZYTOM
4.2.1
KLINISCHE
DATEN
DER
PATIENTEN
75
4.2.2
ERGEBNISSE
DER
JH-HYBRIDSIERUNG
77
4.2.3
INTERPRETATION
UND
DISKUSSION
DER
ERGEBNISSE
78
4.2.3.1
PLASMOZYTOM
78
4.23.2
IMMUNOZYTOM
UND
M.WALDENSTROEM
80
43
ZENTROBLASTISCH-ZENTROZYTISCHES
LYMPHOM
81
4.3.1
KLINISCHE
DATEN
DER
PATIENTEN
81
4.3.2
ERGEBNIS
DER
JH-HYBRIDISIERUNG
83
4.3.3
INTERPRETATION
UND
DISKUSSION
DER
ERGEBNISSE
85
4.3.3.1
PATIENTIN
E.
B.
85
4.33.2
PATIENTIN
M.
C.
86
43.3.3
PATIENTIN
V.
R.
86
4.33.4
PATIENT
S.
K.
87
4.3.4
PATIENTIN
P.
C.:
MOLEKULARBIOLOGISCHE
VERLAUFSUNTERSUCHUNG
88
EINES
CB/CC-LYMPHOMS
4.3.4.1
FRAGESTELLUNG
88
43.4.2
ERGEBNISSE
88
4.3.43
INTERPRETATION
UND
DISKUSSION
92
43.4.4
INTERPRETATION
DER
UMGELAGERTEN
BANDEN
AUF
CHROMOSOMALER
94
EBENE
4.4
HOCHMALIGNE
NON-HODGKIN-LYMPHOME
99
ZENTROBLASTISCHES
UND
IMMUNOBLASTISCHES
LYMPHOM
4.4.1
KLINISCHE
DATEN
DER
PATIENTEN
99
4.4.2
ERGEBNIS
DER
JH-HYBRIDISIERUNG
101
4.4.3
INTERPRETATION
UND
DISKUSSION
DER
ERGEBNISSE
102
4.5
M.HODGKIN
104
4.5.1
KLINISCHE
DATEN
DER
PATIENTEN
104
4.5.2
ERGEBNIS
DER
JH-HYBRIDISIERUNG
105
4.5.3
INTERPRETATION
UND
DISKUSSION
DER
ERGEBNISSE
105
5.
ZUSAMMENFASSUNG
DER
ERGEB
NISSE
106-111
5.1
ERGEBNISSE
DER
SOUTHERN-BLOT-HYBRIDISIERUNG
106
5.2
KORRELATION
DER
SOUTHERN-BLOT-ANALYSE
MIT
DER
STANDARDDIAGNOSTIK
108
6.
DISKUSSION
112-129
6.1
DIAGNOSTISCHE
WERTIGKEIT
DER
SOUTHERN-BLOT
ANALYSE
112
6.1.1
SOUTHERN-BLOT-ANALYSE
BEI
DER
CLL
112
6.1.2
SOUTHERN-BLOT-ANALYSE
BEI
DER
HAARZELL
LEUKAEMIE
114
6.1.3
SOUTHERN-BLOT-ANALYSE
BEI
PLASMOZYTISCHEN
UND
LYMPHOPLASMOZYTOIDEN
NHL
115
6.1.3.1
PLASMOZYTOM
115
6.1.3.2
IMMUNOZYTOM
UND
M.WALDENSTROEM
117
6.1.4
SOUTHERN-BLOT-ANALYSE
BEI
ZENTROZYTISCHEN
UND
ZENTROZYTISCH/
ZENTROBLASTISCHEN
NHL
118
6.1.4.1
WERTIGKEIT
DER
SOUTHEM-BLOT-ANALYSE
118
6.1.4.2
WERTIGKEIT
DER
POLYMERASE
KETTENREAKTION
(PCR)
120
6.1.4.3
KORRELATION
VON
BLUT
UND
KNOCHENMARKSBEFALL
BEI
CB/CC
LYMPHOMEN
122
6.1.5
SOUTHERN-BLOT-ANALYSE
BEI
HOCHMALIGNEN
NHL
123
6.2
MOEGLICHKEITEN
DER
VERBESSERUNG
VON
SENSITIVITAET
UND
DIAGNOSTISCHER
AUSSAGEKRAFT
DER
SOUTHCRN
BLOT-ANALYSE
123
6.2.1
SENSITIVITAET
BEI
GERINGEM
BEFALLSMUSTER
123
6.2.2
DIAGNOSTISCHE
AUSSAGEKRAFT
BEI
AUSGEPRAEG
TEM
BEFALL
125
6.2.3
NACHTEILE
DER
SOUTHERN-BLOT-UNTERSUCHUNG
IN
DER
ROUTINEDIAGNOSTIK
127
6.3
ZUSAMMENFASSUNG
DER
DISKUSSION
128
7.
ZUSAMMENFASSUNG
130-131
8.
LITERATURVERZEICHNIS
132-142
DANKSAGUNG
143
LEBENSLAUF
144 |
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| spellingShingle | Christgau, Heike Die Southern-Blot-Analyse als Diagnose- und Verlaufsparameter bei Non-Hodgkin-Lymphomen Untersuchung der Genkonfiguration der Antigenrezeptorgene und des Bcl-2-Onkogens Blood analysis Blood cancer Lymphoma |
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| topic_facet | Blood analysis Blood cancer Lymphoma Hochschulschrift |
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