Erhöhte Resistenz gegen Tabak-Mosaik-Virus-Infektionen durch die Expression eines Neotop-spezifischen monoklonalen Antikörpers in Tabakpflanzen:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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1994
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
.
6
1.1.
PFLANZEN,
VIREN,
GENTECHNOLOGIE
UND
ANTIKOERPER
.
6
1.1.1.
RISIKEN
DER
BEKAEMPFUNG
VON
VIREN
DURCH
GENTECHNISCHE
METHODEN
.
7
1.1.2.
DER
EINSATZ
VON
REKOMBINANTEN
ANTIKOERPERN
IN
DER
PFLANZENZUECHTUNG
.
8
1.2.
TABAK
UND
TMV
ALS
MODELLSYSTEM
.
9
1.3.
GRUNDLAGEN
ZUR
ANTIKOERPER-EXPRESSION
IN
PFLANZEN
.
11
1.3.1.
BEKANNTE
DATEN
ZUR
EXPRESSION
VON
IMMUNGLOBULINEN
IN
PFLANZEN
.
13
1.4.
ZUSAMMENFASSUNG
UND
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
.
14
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
16
2.1.
MATERIAL
.
16
2.1.1.
CHEMIKALIEN,
PUFFER,
ENZYME,
LABORWAREN
UND
LABORGERAETE
.
16
2.1.2.
BAKTERIEN,
VIREN
UND
PFLANZEN
.
16
2.1.3.
PLASMIDE,
VEKTOREN,
OLIGONUKLEOTIDE
UND
CDNA
.
16
2.1.4.
ANTIKOERPER
UND
NACHWEIS-REAGENTIEN
.
18
22.
METHODEN
.
19
2.2.1.
STANDARD-LABORMETHODEN,
KULTUR-BEDINGUNGEN
FUER
BAKTERIEN
UND
PFLANZEN
.
19
2.2.2.
ISOLATION
VON
NUKLEINSAEUREN
(DNA
UND
RNA)
.
19
2.2.3.
ISOLATION
VON
ANTIKOERPERN
AUS
PFLANZEN
.
19
2.2.4.
KONZENTRATIONS-BESTIMMUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
UND
PROTEINEN
.
20
2.2.5.
ELEKTROPHORESE
VON
NUKLEINSAEUREN
UND
PROTEINEN
.
20
2.2.6.
MARKIERUNG
UND
NACHWEIS-REAKTIONEN
FUER
DNA,
RNA
UND
PROTEINE
.
20
2.2.7.
SEQUENZIERUNGS
UND
PCR-TECHNIKEN
.
21
2.2.8.
HERSTELLUNG
VON
STERILEN
PFLANZEN-,
PROTOPLASTEN
UND
SUSPENSIONS-KULTUREN
.
21
2.2.9.
HERSTELLUNG
VON
HETERO
UND
HOMOZYGOTEN
FILIALGENERATIONEN
.
22
2.2.10.
ELISA-TESTE
.
22
2.2.11.
TMV-INFEKTIONS-TESTE
.
23
3.
ERGEBNISSE
.
24
3.1.
UEBERSICHT
DER
DURCHGEFUEHRTEN
VERSUCHE
.
24
3.2.
HERSTELLUNG
DER
ANTIKOERPER-TANDEM-KONSTRUKTIONEN
IM
VEKTOR
PSS
.
24
3.2.1.
VERWENDETE
TERMINOLOGIE
.
26
3.3.
UEBERSICHT
DER
DURCHGEFUEHRTEN
PFLANZEN-TRANSFORMATIONEN
.
27
3.4.
ANALYSE
DER
TRANSGENEN
TABAKPFLANZEN
.
29
3.4.1.
BESTIMMUNG
DER
ANTIKOERPER-MENGEN
IN
TRANSGENEN
PFLANZEN
MIT
DER
ELISA-TECHNIK
.
29
3.4.1.1.
ALLGEMEINE
ERGEBNISSE
.
29
3.4.1.2.
ANALYSEN
DER
TRANSGENEN
PFLANZEN
FUER
DIE
KONSTRUKTIONEN
P24TCM,
P24TCW
UND
P24TCA
.
30
3.4.1.3.
ANALYSEN
DER
TRANSGENEN
PFLANZEN
FUER
DIE
KONSTRUKTION
P75TCM
.
33
3.5.
WEITERE
ANALYSEN
DER
TRANSGENEN
PFLANZEN
DER
LINIE
24TCM
.
34
3.5.1.
SPEZIFITAET
UND
AFFINITAET
DES
REKOMBINANTEN
ANTIKOERPERS
24
(MAK24-P)
.
34
3.5.2.
GENOM
UND
TRANSKRIPT-ANALYSE
AUF
DNA
UND
RNA-EBENE
.
35
3.5.2.1
.
NORTHERN-BLOT-ANALYSE,
VERERBUNG
AUF
DIE
NACHKOMMEN
UND
SILENCING-EFFEKT
.
37
3.5.3.
NACHWEIS
DER
SEKRETION
DES
MAK24-P
(24TCM)
.
39
3.5.3.1
.
ANALYSE
VON
INTERZELLULAERER
WASCHFLUESSIGKEIT
(IWF)
.
40
3.5.3.2.
SEKRETION
DER
ANTIKOERPER
AUS
PROTOPLASTEN
UND
SUSPENSIONS-KULTUREN
.
42
3.6.
REDUKTION
DER
TMV-INFEKTION
IN
TRANSGENEN
PFLANZEN
(P24TCM)
.
47
3.6.1.
ANALYSE
VON
F-|
-NACHKOMMEN
.
47
3.6.2.
DURCHGEFUEHRTE
INFEKTIONS-TESTE
MIT
TMV
UND
TNV
.
48
4.
DISKUSSION
.
53
4.1.
ALLGEMEINE
DATEN
ZUR
ANTIKOERPER-EXPRESSION
IN
PFLANZEN
.
53
4.1.1.
EXPRESSION
DER
ANTIKOERPER-GENE
IN
DER
TANDEM-KONSTRUKTION
.
53
4.1.1.1.
UNABHAENGIGE
REGULATION
DER
35SS-PROMOTOREN,
STABILITAET
DER
EINZELNEN
ANTIKOERPER-KETTEN
.
53
4.1.1.2.
ERKENNUNG
DER
MAUS-3
'
-UNTRANSLATIERTEN
REGION
IN
DEN
PFLANZENZELLEN
.
54
4.1.2.
ZUSAMMENLAGERUNG
DER
ANTIKOERPER-KETTEN,
WIRKUNG
DES
MAUS-SIGNALPEPTIDES
.
55
4.1.3.
BEEINFLUSSUNG
DER
ANTIKOERPER-MENGE
DURCH
SILENCING-EFFEKT
UND
HOMOZYGOTIE
.
56
4.2.
SEKRETION
DES
ANTIKOERPERS
UND
SEINE
BEWEGLICHKEIT
IN
DER
ZELLWAND
.
58
4.3.
HERSTELLUNG
UND
VERWENDUNG
VON
ANTIKOERPER-FRAGMENTEN
.
59
4.4.
SUSPENSIONS-KULTUREN
UND
IHRE
BIOTECHNOLOGISCHE
BEDEUTUNG
.
61
4.5.
REDUKTION
DER
TMV-INFEKTIONEN
DURCH
DEN
MAK24
.
62
4.6.
WEITERE
ZUKUNFTSAUSSICHTEN
.
65
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
67
6.
ANHANG
A:
ABBILDUNG
DES
EXPRESSIONSVEKTORS
P24TCM
UND
EIGENSCHAFTEN
ALLER
TRANSGENEN
PFLANZEN
.
69
7.
ANHANG
B:
ABKUERZUNGEN.
.
71
8.
LITERATUR
.
72 |
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