Einfluss von Escherichia-coli-Adhäsinen, -Fimbrien und dem Alpha-Hämolysin auf die Signaltransduktion und Mediatorfreisetzung aus Immun-Effektorzellen:
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Format: | Abschlussarbeit Buch |
Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
1993
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Beschreibung: | Erscheinungsjahr auf der Haupttitels.: 1992 |
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INHALTSVERZEICHNIS
A.
EINLEITUNG
1
A.L.
UEBERSICHT
INFEKTABWEHR
1
A.2.
ESCHERICHIA
COLI
-
MODELL
ZUR
ANALYSE
DER
2
MIKROBIELLEN
PATHOGENITAET
A.2.1.
BEDEUTUNG
DER
ADHAESINE
3
A.2.2.
BEDEUTUNG
DES
HAEMOLYSINS
4
A3.
ZELLEN
DER
UNSPEZIFISCHEN
INFEKTABWEHR
6
A.3.
1.
DER
NEUTROPHILE
POLYMORPHKERNIGE
GRANULOZYT
(PMN)
6
A.3.2.
DER
THROMBOZYT
7
A.3.3.
DER
MONOZYT
UND
DER
MAKROPHAGE
8
A3.4.
DIE
MASTZELLE,
DER
BASOPHILE
GRANULOZYT
9
A.3.5.
DER
LYMPHOZYT
10
A4.
MEDIATOREN
DER
ENTZUENDUNG
11
A.4.1.
NEUGENERIERTE
MEDIATOREN
12
A.4.1.1.
ARACHIDONSAEUREMETABOLITE
12
A.4.1.2.
SAUERSTOFIMETABOLITE
14
A.4.2.
ZYTOKINE
14
A4.3.
PRAEFORMIERTE
MEDIATOREN
15
A.5.
SIGNALTRANSDUKTIONSKETTE
15
A
5.1.
GTP-BINDENDE
PROTEINE
15
A5.2.
DERPHOSPHATIDYLINOSITOL-METABOLISMUS
17
A5.2.1.
PHOSPHATIDYLINOSITOL-SPEZIFISCHE
PHOSPHOLIPASE
C
(PIP2-PLC)
18
A.5.2.2.
PHOSPHATIDYLINOSITOL4-KINASE
(PI4-KINASE)
18
A5.3.
PROTEINKINASE
C
(PKC)
18
A.6.
AUFGABENSTELLUNG
20
B.
MATERIAL
UND
METHODEN
22
B.L.
MATERIAL
22
B.1.1.
CHEMIKALIEN
22
B.1.2.
RADIOAKTIVE
SUBSTANZEN
22
B.1.3.
GERAETE
23
B.1.4. BAKTERIENSTAEMME
24
B.2.
METHODEN
25
B.2.1.
ZELLISOLIERUNGEN
25
B.2
1.1.
ANREINIGUNG
UND
ISOLIERUNG
HUMANER
THROMBOZYTEN,
25
NEUTROPHILER
POLYMORPHKERNIGER
GRANULOZYTEN
(PMN)
UND
LYMPHOZYTEN-MONOZYTEN-BASOPHILER
(LMB).
B.2.1
2.
GEWINNUNG
UND
ANREINIGUNG
VON
RATTENPERITONEALMASTZELLEN
26
B.2
1.3.
ANZUCHT
DER
BAKTERIENSTAEMME.
26
B.2.2.
ZELLBIOLOGISCHE
TESTSYSTEME
27
B.2.2.1.
AGGREGATION
VON
THROMBOZYTEN
27
B.2.
2.2.
CHEMILUMINESZENZMESSUNG
27
B.
2.2.3.
HISTAMINFREISETZUNG
27
B.2.2.4.
SEROTONINFREISETZUNG
27
B.
2.2.5.
LEUKOTRIEN-,
12-HETE
BESTIMMUNG
MITTELS
27
HOCHDRUCKFLUESSIGKEITSCHROMATOGRAPHIE
(HPLC)
B.2.2.6.
TNF-A,
IL-6,
IL-LSS
BESTIMMUNG
28
B.2.2.
7.
ENZYMBESTIMMUNG
29
B.2.2.7.1.
LAKTAT
DEHYDROGENASE
(LDH)
29
B.2.2.
7.2.
SS-GLUKURONIDASE
29
B.2.2.
7.3.
LYSOZYM
30
B.2.2.
8
ADHAERENZ
UND
PHAGOZYTOSE
30
B.2.
2.9
L^C-ARACHIDONSAEUREMETABOLISMUS
31
B.2.2.
10
BESTIMMUNG
DER
HAEMOLYSINAKTIVITAET
DES
E.
COLI
A-HAEMOLYSINS
31
B.2.3. BIOCHEMISCHE
METHODEN
31
B.2.3.1.
ZELLULAERE
FRAKTIONIERUNG
31
B.2.3.2.
PROTEINBESTIMMUNG
NACH
BRADFORD
31
B.2.3.3.
ATP-,
ADP-,
AMP
BESTIMMUNG
31
B.2.3.4.
GPP(NH)P-BINDUNGSTEST
32
B.2.
3.5.
GTPASE
AKTIVITAET
32
B
2.3.6.
PHOSPHORYLIERUNG
33
B.2.3.
7.
PHOSPHATIDYLINOSITOLPHOSPHATMETABOLISMUS
33
B
2.3.8.
PHOSPHATIDYLINOSITOL-SPEZIFISCHE
PHOSPHOLIPASE
C
33
(PIP2-PLC)
AKTIVITAET
B.2.3.
9.
PHOSPHATIDYLINOSITOL4-KINASE
(PI4-KINASE)
AKTIVITAET
34
B.2.3.
10
PROTEINKINASE
C
(PKC)
AKTIVITAET
34
B.2.4.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
35
B.2
4.1.
RNA-ISOLIERUNG
35
B.2.4.2.
PRIMER
HERSTELLUNG
35
B
2.4.3.
REVERSE
TRANSKRIPTION
35
B.2
4.4.
POLYMERASEKETTENREAKTION
(PCR)
36
B
2.4.5.
ZUSAETZLICHE
MOLEKULARBIOLOGISCHE
STANDARDMETHODEN
36
B.2.5.
STATISTIK
36
C.
RESULTATE
37
C.L.
WECHSELWIRKUNG
VON
ADHAESINTRAGENDEN
E.
COLI
BAKTERIEN
MIT
IMMUNKOMPETENTEN
EFFEKTORZELLEN
38
C.1.1.
ADHAERENZ
UND
PHAGOZYTOSE
38
C.1.2.
MEDIATORFREISETZUNG
AUS
HUMANEN
GRANULOZYTEN
(PMN)
39
C.L.2.1.
CHEMILUMINESZENZ
39
C.L.
2.2.
LIPIDMEDIATOREN
39
C.
1.22.1.
[L^C]-ARACHIDONSAEURE
UMSETZUNG
40
C.L.
2.2.2.
FREISETZUNG
VON
LEUKOTRIENEN
41
C.L.
2.3.
ENZYMFREISETZUNG
42
C.1.3.
HISTAMINFREISETZUNG
AUS
MASTZELLEN
42
C.1.4.
THROMBOZYTENAKTIVIENING
43
C.1.5.
AKTIVIERUNG
VON
HUMANEN
LYMPHOZYTEN/MONOZYTEN/BASOPHILEN
(LMB)
44
C.L.
5.1.
LEUKOTRIENE
44
C.1.6.
FREISETZUNG
VON
ZYTOKINEN
46
C.2.
DAS
E.
COLI
A-HAEMOLYSIN
-
WICHTIGER
PATHOGENITAETSFAKTOR
IM
RAHMEN
DES
ENTZUENDUNGSGESCHEHENS
49
C.2.1.
AKTIVIERUNG
VON
HUMANEN
GRANULOZYTEN
50
C.
2.1.1.
CHEMILUMINESZENZ
50
C.2.1.2.
LEUKOTRIENFREISETZUNG
52
C.2.2.
AKTIVIERUNG
VON
HUMANEN
LYMPHOZYTEN/MONOZYTEN/BASOPHILER
(LMB)
52
C.2.2.1.
LEUKOTRIENGENERIERUNG
52
C.2.2.2.
HISTAMINFREISETZUNG
53
C.2.3.
THROMBOZYTENAKTIVIERUNG
54
C.2.3.].
AGGREGATION
55
C.2.3.2.
SEROTONINFREISETZUNG
56
C.2.3.3.
12-HYDROXYEICOSATETRAENSAEURE
(12-HETE)
56
C.2.4.
ZYTOKINE
59
C.2.4.1.
ZYTOKINFREISETZUNG
59
C.2.4.2.
ZYTOKINSPEZIFISCHE
MRNA
BILDUNG
61
C.3.
STRUKTUR-FUNKTIONSBEZIEHUNG
DES
E.
COLI
A-HAEMOLYSINS
FREISETZUNG
VON
ENTZUENDUNGSMEDIATORSUBSTANZEN
63
C.3.1.
AKTIVIERUNG
VON
HUMANEN
LEUKOZYTEN
(PMN/LMB)
64
C.4.
SIGNALTRANSDUKTION
69
C.4.1.
ATP-VERB
RAUCH
71
C.4.2.
NACHWEIS
ZUR
G-PROTEIN-BETEILIGUNG
73
C.4.2
1.
GPP(NH)P
BINDUNG
UND
GTPASE
AKTIVITAET
73
C.4
2.1.1.
HUMANE
THROMBOZYTEN
73
C.4.2.
1.1.
HUMANE
LEUKOZYTEN
(PMN/LMB)
75
C.4.2.2.
KOSTIMULATION
MIT
GTP-GAMMA-S
76
C.4.2
2.1.
HUMANE
THROMBOZYTEN
76
C.4.2.2.2.
HUMANE
LEUKOZYTEN
(PMN/LMB)
76
C.4.2.3.
NACHSTIMULATION
MIT
NATRIUMFLUORID
(NAF)
79
C.4.2.3.1
HUMANE
THROMBOZYTEN
79
C.4.2.3.
2.
HUMANE
LEUKOZYTEN
(PMN/LMB)
86
C.4.3.
PHOSPHATIDYIINOSITOL-METABOLISMUS
89
C.4.3.1.
PI4-KINASE
AKTIVITAET
IN
HUMANEN
THROMBOZYTEN
90
C.4.3.
2.
EINSATZ
VON
NEOMYCIN
ALS
INHIBITOR
DER
PIP2-PLC
IN
HUMANEN
THROMBOZYTEN
91
C.4.3.3.
IP3
BILDUNG,
INOSITOLPHOSPHOLIPIDMETABOLISMUS,
PIP2-PLC
UND
PI4-KINASE
AKTIVITAET
IN
HUMANEN
PMN
92
C.4.4.
PROTEINKINASE
C
(PKC)
98
C.4.4.
1.
AKTIVIERUNG
DER
PKC
IN
HUMANEN
THROMBOZYTEN
98
C.4.4.
1.1.
EINFLUSS
VON
STAUROSPORINE
ALS
INHIBITOR
DER
PKC
EINFLUSS
VON
PMA
ALS
AKTIVATOR
DER
PKC
101
C.4.4.2.
AKTIVIERUNG
DER
PKC
IN
HUMANEN
LEUKOZYTEN
(PMN/LMB)
105
C.4.5.
PHOSPHORYLIERUNG
106
D.
DISKUSSION
108
D.L.
ADHAESINE/FIMBRIEN
-
AKTIVATOREN
109
ZELLBIOLOGISCHER
LEISTUNGEN
D.2.
DAS
HAEMOLYSINMOLEKIIL
-
EIN
MODELL
ZUM
111
VERSTAENDNIS
VON
STRUKTUR-WECHSELBEZIEHUNG
D.3.
SIGNALTRANSDUKTION
-
TRANSMITTER
DER
113
ZELLULAEREN
REAKTIVITAET
UND/ODER
DER
ZELLULAEREN
PARALYSE
D.L
ZUSAMMENFASSUNG
116
E.
LITERATUR
117 |
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