NMR-spektroskopische Untersuchungen zur Dynamik der Cis-trans-Isomerisierung am Prolin und deren Katalyse durch Cyclophilin:
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| Format: | Buch |
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1995
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INHALTSVERZEICHNIS
L
EINLEITUNG
.
1
1.
DIE
PROTEINFALTUNG
.
1
2.
DIE
PROLYL-PEPTIDBINDUNG
.
2
3.
PEPTIDYL-PROLYL-CIX4RAZIS-ISOMERASEN
.
4
4.
PROBLEMSTELLUNG
.
6
IL
THEORETISCHER
TEIL
.
8
L
PHYSIKALISCHE
GRUNDLAGEN
DER
NMR-SPEKTROSKOPIE
.
8
2.
DIE
NMR-PARAMETER
.
10
3.
ZWEIDIMENSIONALE
NMR-SPEKTROSKOPIE
.
11
4.
ZUORDNUNG
VON
ZWEIDIMENSIONALEN
PEPTID-NMR-SPEKTREN
.
13
5.
DYNAMISCHE
NMR-SPEKTROSKOPIE
.
15
5.1.
LINIENFONNANALYSE
.
15
5.2.
ZWEIDIMENSIONALE
AUSTAUSCHSPEKTROSKOPIE
(NOESY=NUCLEAR
OVERHAUSER
AND
EXCHANGE
SPECTROSCOPY)
.
18
HL
MATERIAL
UND
METHODEN
.
19
1.
MATERIAL
.
19
1.1.
ENZYME
.
19
1.2.
PEPTIDE
.
19
1.3.
CHEMIKALIEN
.
19
1.4.
SONSTIGES
VERBRAUCHSMATERIAL
.
19
1.5.
GERAETE
.
-
.
20
2.
METHODEN
.
21
2.1.
PRAEPARATION
DES
CYTOSOLISCHEN
CYCLOPHILINS
18
AUS
SCHWEINERNERE
(CYPL8).
21
2.2.
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
.
22
2.3.
BESTIMMUNG
DER
KATALYTISCH
AKTIVEN
KONZENTRATION
DER
CYPL8
STAMMLOESUNG
MITTELS
FLUORIMETRISCHER
TITRATION
.
23
2.4.
STANDARDAKTIVITAETSTEST
FUER
PPIASEN
.
23
2.5.
VORBEREITUNG
DER
NMR-PROBEN
.
25
2.5.1.
VORBEREITUNG
DER
CYPL8-LOESUNG
FUER
DIE
NMR-MESSUNGEN
.
25
2.5.2.
NMR-PROBEN
VON
PEPTIDEN
DER
STRUKTUR
SUC-ALA-XAA-PRO-PHE-PNA
UND
ALA-GLY-YAA-PHE-PNA
.
26
2.5.3.
NMR-PROBE
VON
HUMANEM
CALCITONIN
.
26
2.6.
NMR-MESSUNGEN
.
26
2.6.1.
SPEKTROMETERBEDINGUNGEN
.
26
2.6.2.
EINDIMENSIONALE
NMR-EXPERIMENTE
.
27
2.6.2.1.
EINDIMENSIONALE
1H
NMR-MESSUNGEN
ZUR
KINETISCHEN
CHARAKTERISIERUNG
DER
PPIASE-AKTIVITAET
GEGENUEBER
SUC-ALA-PHE-PRO-PHE
PNA
.
27
2.6.2.2.
EINDIMENSIONALE
1H
NMR-MESSUNGEN
AN
OLIGOPEPTIDEN
MIT
PROLINSURROGATEN
.
28
2.6.23.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
LOESUNGSMITTELABHAENGIGKEIT
DER
CIS/TRANS
ISOMERISIERUNG
.
29
2.6.2.4.
ERMITTLUNG
DER
GESCHWINDIGKEITSKONSTANTE
DER
UNKATALYSIERTEN
RIS/IRANS-ISOMERISIERUNG
(KO)
UND
DER
AKTIVIERUNGSPARAMETER
DIESER
REAKTION
IN
HUMANEM
CALCITONIN
.
29
2.6.3.
ZWEIDIMENSIONALE
NMR-EXPERIMENTE
.
29
2.63.1.
NMR-EXPERIMENTE
ZUR
KATALYSE
DER
CIS/TRANS-ISOMERISIERUNG
DER
PROLYL-PEPTIDBINDUNGEN
IN
HUMANEM
CALCITONIN
.
30
2.7.
DATENVERARBEITUNG
FUER
DIE
LINIENFORMANALYSE
.
30
2.8.
CD-MESSUNGEN
AN
HUMANEM
CALCITONIN
.
31
IV.
ERGEBNISSE
UND
DISKUSSION
.
33
1.
PRAEPARATION
DES
CYTOSOLISCHEN
CYCLOPHILINS
18
(CYPL8)
AUS
SCHWEINENIERE
.
33
2.
VORBEREITUNG
VON
CYPL8
FUER
DIE
NMR-EXPERIMENTE
.
36
3.
BESTIMMUNG
DER
KATALYTISCH
AKTIVEN
KONZENTRATION
DER
CYPL8-STAMMLOESUNG
.
36
4.
KINETISCHE
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
KATALYSE
DER
CU/RRANS-ISOMERISIERUNG
DER
PROLYL
PEPTIDBINDUNG
IM
SUBSTRAT
DER
SEQUENZ
SUC-ALA-PHE-PRO-PHE-PNA
DURCH
CYP
18.
37
4.1.
VERGLEICH
DER
EXPERIMENTELLEN
BEDINGUNGEN
DES
STANDARDAKTIVITAETSTESTS
UND
DER
NMR-EXPERIMENTE
.
38
4.2.
BESTIMMUNG
DER
UNKATALYSIERTEN
CIS/TROZIS-ISOMERISIERUNG
DER
SUBSTRATE
SOWIE
DER
PPIASE-AKTIVITAET
IM
STANDARDAKTIVITAETSTEST
.
39
4.3.
EINDIMENSIONALE
NMR-MESSUNGEN
ZUM
NACHWEIS
UND
ZUR
KINETISCHEN
CHARAKTERISIERUNG
DER
PPIASE-AKTIVITAET
.
39
4.3.1.
NACHWEIS
DER
KATALYSE
DER
CIS/RRANS-ISOMERISIERUNG
DURCH
CYPL8
MITTELS
DYNAMISCHER
NMR-SPEKTROSKOPIE
.
39
4.3.2.
QUANTITATIVE
CHARAKTERISIERUNG
DER
KATALYSE
DER
CIS/TRANS
ISOMERISIERUNG
DURCH
CYP
18
.
45
4.4.
DISKUSSION
DER
ERGEBNISSE
ZUR
KINETIK
DER
PPIASE-KATALYSE
.
60
5.
NMR-UNTERSUCHUNGEN
AN
OLIGOPEPTIDEN
MIT
PROLINSURROGATEN
(YAA)
.
69
5.1.
EINFLUSS
DER
VERAENDERUNGEN
DES
PROLINRINGES
AUF
DAS
CISARANS
GLEICHGEWICHT
UND
DIE
GESCHWINDIGKEITSKONSTANTEN
DER
UNKATALYSIERTEN
CIS-*TRANS-ISOMERISIERUNG
(KSS
-
T)
.
71
5.2.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
KATALYSE
DER
CI&4NV-ISOMERISIERUNG
IN
OLIGOPEPTIDEN
MIT
PROLINSURROGATEN
DURCH
CYPL8
.
75
6.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
LOESUNGSMITTELABHAENGIGKEIT
DER
CI&TAZNR-ISOMERISIERUNG
.
79
7.
1H
NMR-UNTERSUCHUNGEN
ZUR
KATALYSE
DER
CIS/RRANS-ISOMERISIERUNG
IM
CALZIUNUEGULIERENDEN
HORMON
CALCITONIN
DURCH
CYPL8
.
82
7.1.
ZUORDNUNG
DES
NMR-SPEKTRUMS
.
83
7.1.1.
IDENTIFIZIERUNG
DER
SPINSYSTEME
.
83
7.1.2.
SEQUENTIELLE
ZUORDNUNG
.
87
7.1.3.
CHARAKTERISIERUNG
DER
BEIDEN
ISOMERE
MIT
JEWEILS
EINER
CIS-PROLYL
PEPTIDBINDUNG
.
92
7.2.
STRUKTUR
VON
HUMANEM
CALCITONIN
IN
WASSER
.
93
7.3.
NACHWEIS
DER
KATALYSE
DER
CIS/FRONS-ISOMERISIERUNG
DER
PHE22-PRO23
PEPTIDBINDUNG
IN
HUMANEM
CALCITONIN
DURCH
CYPL8
.
97
7.4.
BESTIMMUNG
DER
KATALYTISCHEN
EFFIZIENZ
VON
CYPL8
GEGENUEBER
CALCITONIN
.
99
7.5.
CIS/TRONS-ISOMERISIERUNG
DER
ALA31-PRO32-PEPTIDBINDUNG
.
102
7.6.
DISKUSSION
DER
ERGEBNISSE
ZUR
KATALYSE
DER
CIS/ZRANR-ISOMERISIERUNG
IN
HUMANEM
CALCITONIN
.
103
V.
ZUSAMMENFASSUNG
.
105
VI.
ABKUERZUNGEN
.
109
VII.
LITERATURVERZEICHNIS
.
111 |
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