Untersuchungen über die pflanzliche Beta-Methylcrotonyl-CoA-Carboxylase (EC 6.4.1.4) und ihre Reinigung aus Hordeum vulgare L.: = Investigations on the plant Beta-Methylcrotonyl-CoA carboxylase (EC 6.4.1.4) and its purification from Hordeum vulgare L.
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Karlsruhe
Botanisches Inst. (Pflanzenphysiologie und Pflanzenbiochemie), Univ.
1995
|
| Schriftenreihe: | Karlsruher Beiträge zur Pflanzenphysiologie
28 |
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I
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
.
V
SUMMARY
.
VII
1.
EINLEITUNG
UND
PROBLEMSTELLUNG
.
1
1
1
EINLEITUNG
.
1
1.2
PROBLEMSTELLUNG
.
3
2.
BIOTINHALTIGE
ENZYME
.
5
2
1
STRUKTUR
UND REAKTIONSWEISE
BIOTINABHAENGIGER
CARBOXYLASEN
.
5
2.2
UEBERBLICK
UEBER
DAS
VORKOMMEN
BIOTINHALTIGER
ENZYME
BEI
PFLANZEN
.
12
2.2
1
ACETYL-COA
CARBOXYLASE
(ACC)
.
12
2
2.2
PYRUVATCARBOXYLASE
(PC)
.
16
2.2
3
PROPIONYL-COA
CARBOXYLASE
(PCC)
.
16
2.2.4
GERANYL-COA
CARBOXYLASE
(GCC)
.
17
2.2.5
HARNSTOFF
CARBOXYLASE
(UC)
.
19
2.2
6
METHYLCROTONYL-COA
CARBOXYLASE
(MCC)
.
20
2.2
6.1
METHYLCROTONYL-COA
CARBOXYLASE
BEI
MIKROORGANISMEN
.
20
2.2.6.2
METHYLCROTONYL-COA
CARBOXYLASE
BEI
TIEREN
.
22
2.2.6.3
METHYLCROTONYL-COA
CARBOXYLASE
BEI
PFLANZEN
.
23
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
24
3
1
ISOLIERUNG
UND
REINIGUNG
DER
MCC
AUS
PFLANZEN
.
24
3
1.1
PFLANZENANZUCHT
.
24
3.1.1.1
ANZUCHT
UNTER
STANDARDBEDINGUNGEN
.
24
3.1
1.2
ANZUCHT
BEI
BEHANDLUNG
MIT
BESTIMMTEN
SUBSTANZEN
.
24
3.12
HERSTELLUNG
EINER
ROHPRAEPARATION
VON
MCC
.
26
3
1.3
AUFFEINIGUNG
DER
MCC
UEBER
KONVENTIONELLE
CHROMATOGRAPHIEMETHODEN
.
27
3.1
3.1
ANIONENTAUSCHERCHROMATOGRAPHIE
.
28
3.1.3
2
FARBLIGAND-AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
.
28
3.3
4
AUFFEINIGUNG
DER
MCC
UEBER
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
MIT
AVIDIN-AGAROSE
.
29
3
2
MESSUNG
DER
MCC-AKTIVITAET
.
29
3.3
PROTEINBESTIMMUNG
.
31
3.4
SYNTHESE
EINER
AVIDIN-AGAROSE
.
32
II
3
4.1
AKTIVIERUNG
DER
AGAROSE
MIT
BROMCYAN
.
32
3
4
2
KOPPLUNG
VON
AVIDIN.
.
.
.32
3
4
3
UEBERFUEHRUNG
DER
AVIDINTETRAMERE
IN
MONOMERE
.33
3.5
GELELEKTROPHORESE
.
33
3
5.1
DENATURIERENDE
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
.
33
3.5
1
1
PROBENVORBEREITUNG,
GELHERSTELLUNG
UND
AUFTRENNUNG
DER
PROBEN.
.
33
3
5
1.2
SILBERFARBUNG
.
35
3.5
2
NATIVE
ELEKTROPHORESE
.
35
3.5
2
1
PROBENVORBEREITUNG
UND
DURCHFUEHRUNG
DER
NATIVEN
ELEKTROPHORESE
.
35
3
5.2.2
DETEKTION
DER
MCC
DURCH
AKTIVITAETSTEST
IM
GEL
.
36
3
6
WESTERN
BLOT-ANALYSE
.
36
3.7
DOT
BLOT-ANALYSE
.
.
.
.37
3
8
BESTIMMUNG
DES
PH-OPTIMUMS
DER
MCC
.
38
3.9
BESTIMMUNG
DES
ISOELEKTRISCHEN
PUNKTES
DER
MCC
.
38
3
10
BESTIMMUNG
DES
MOLEKULARGEWICHTES
DER
NATIVEN
MCC
.
39
3
11
KORREKTURRECHNUNG
NACH
LEE
&
WILSON
.
40
3
12
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
DER
VERSUCHE
.
41
4.
ERGEBNISSE
.
42
4.1
AKTIVITAET
DER
BIOTIN-CARBOXYLASEN
IN
ABHAENGIGKEIT
VOM
ALTER
.
42
4
1.1
ENTWICKLUNG
DER
AKTIVITAET
BIOTINHALTIGER
CARBOXYLASEN
AUS
MAIS
IN
ABHAENGIGKEIT
VOM
ALTER
.
.
42
4
12
ENTWICKLUNG
DER
AKTIVITAET
VON
MCC,
ACC
UND
PCC
IN
GRUENEN
GERSTENKEIMLINGEN
UNTER
DAUERDUNKEL-BEDINGUNGEN
.
.
.
44
4
2
VERSUCHE
ZUR
ERHOEHUNG
DER
MCC-AKTIVITAET
.
45
4
2.1
VERSUCHE
ZUR
ERHOEHUNG
DER
MCC-AKTIVITAET
DURCH
BEHANDLUNG
VON
PFLANZEN
MIT
CHEMIKALIEN
.
46
4
2
2
INDUKTION
VON
MCC-AKTIVITAET
DURCH
WECHSELNDE
LICHTBEDINGUNGEN
BEI
DER
PFLANZENANZUCHT
.
51
4
3
REINIGUNG
DER
MCC
AUS
PFLANZEN
.
54
4
3
1
REINIGUNG
DER
MCC
AUS
GERSTE
DURCH
SAEULENCHROMATOGRAPHIE
54
4.3
1
1
ANIONENTAUSCHERTRENNUNG
VON
ROHFRAKTIONEN
AUS
GERSTE
54
4
3.12
FARBLIGAND-AFFINITATSCHROMATOGRAPHIE
VON
MCC
AUS
GERSTE
.
55
4
3
13
REINIGUNG
VON
MCC
AUS
GERSTE
UEBER
AFFINITATSCHROMATOGRAPHIE
MIT
AVIDINAGAROSE
.
57
III
4.3
1
4
REINIGUNGSTABELLE
FUER
MCC
AUS
GERSTE
.
59
4
3
2
REINIGUNG
DER
MCC
AUS
ERBSE
DURCH
SAEULENCHROMATOGRAPHIE
.
63
4
3.2
1
ANIONENTAUSCHERTRENNUNG
VON
ROHFRAKTIONEN
AUS
ERBSE
.
63
4.3
2.2
FARBLIGAND-AFFINITATSCHROMATOGRAPHIE
VON
MCC
AUS
ERBSE
.
63
4.3.2
3
REINIGUNGSTABELLE
FUER
MCC
AUS
ERBSE
.
64
4
4
CHARAKTERISIERUNG
VON
EIGENSCHAFTEN
DER
MCC
.
65
4
4.1
MESSUNG
DER
MCC-AKTIVITAT
.
65
4
4.2
STABILITAET
DER
MCC
AUS
GERSTENKEIMLINGEN
.
.
65
4
4
3
EINFLUSS
ANDERER
COA-ESTER
UND
METHYLCROTONATS
AUF
DIE
MCC
AKTIVITAET
.
65
4
4
4
EINFLUSS
DER
TEMPERATUR
AUF
DIE
MCC-AKTIVITAT.
.
67
4
4.5
BESTIMMUNG
DES
PH-OPTIMUMS.
.
.
.
.
69
4
4
6
EINFLUSS
VON
KATIONEN
AUF
DIE
MCC-ENZYMAKTIVITAT
AUS
GERSTENKEIMLINGEN
.
.
.
69
4
4
7
BESTIMMUNG
DES
ISOELEKTRISCHEN
PUNKTES
DURCH
ROTOFOR
.
72
4
4
8
BESTIMMUNG
DES
MOLEKULARGEWICHTS
DER
NATIVEN
MCC
.
.
73
4
4
9
BESTIMMUNG
DER
MICHAELIS-KONSTANTEN
(KM
-WERTE)
.75
4
4.10
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
BINDUNGSREIHENFOLGE
DER
SUBSTRATE
AN
DIE
MCC
.
77
5.
DISKUSSION
.
81
5.1
DIE
ROLLE
DER
METHYLCROTONYL-COA
CARBOXYLASE
IM
PFLANZLICHEN
STOFFWECHSEL
.
.
.
.81
5
1.1
ZUSAMMENHANG
ZWISCHEN
MCC-AKTIVITAT
UND
SENESZENZ.
.
.
83
5
1.3
ERHOEHUNG
DER
MCC-AKTIVITAT
DURCH
STOFFWECHSELMETABOLITE
87
5
1
4
VERAENDERUNG
DER
MCC-AKTIVITAT
IM
TAGESVERLAUF
.
.
88
5
2
REINIGUNG
DER
MCC
AUS
PFLANZEN
.
.
.
.
89
5.2
1
MESSUNG
DER
ENZYMAKTIVITAET
.
90
5.2
2
REINIGUNG
DER
MCC
AUS
GERSTE
.
.
.
90
5
3
CHARAKTERISIERUNG
VON
EIGENSCHAFTEN
DER
MCC
AUS
GERSTE
.
94
5
3
1
SUBSTRATSPEZIFITAET
UND
HEMMUNG
DER
MCC
DURCH
STOFFWECHSELSUBSTRATE
.
95
5
3
2
EINFLUSS
VON
TEMPERATUR
UND
PH-WERT
AUF
DIE
MCC-AKTIVITAT
.
97
5
3
3
EINFLUSS
VON
IONEN
AUF
DIE
MCC-AKTIVITAT
.98
5
3
4
BESTIMMUNG
DES
ISOELEKTRISCHEN
PUNKTES
.
.
100
5
3
5
BESTIMMUNG
DES
NATIVEN
MOLEKULARGEWICHTS
DER
MCC
101
5
3
6
MICHAELIS-KONSTANTEN
UND
BINDUNGSREIHENFOLGE
DER
SUBSTRATE
103
5
4
AUSBLICK
107
IV
6.
ZUSAMMENFASSUNG
.
.109
7.
LITERATUR
.
112 |
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