Untersuchungen zur Aktivität des humanen 7SL-Promotors und Analyse beteiligter Transkriptionsfaktoren:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1995
|
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
.
1
2.
MATERIAL
.
7
2.1.
HERKUNFT
DER
VERWENDETEN
CHEMIKALIEN
.
7
2.2.
HERKUNFT
DER
VERWENDETEN
ENZYME
.
9
3.
EXPERIMENTELLE
METHODEN
.
10
3.1.
MODIFIZIERUNG
UND
SUBKLONIERUNG
VON
DNA-MOLEKUELEN
.
10
3.1.1.
RESTRIKTION
.
10
3.1.2.
AUFFULLEN
5'-UEBERHAENGENDER
DNA-ENDEN
.
10
3.1.3.
DEPHOSPHORYLIERUNG
.
10
3.1.4.
KMASIERUNG
.
11
3.1.5.
BEHANDLUNG
VON
SYNTHETISCHEN
OLIGONUKLEOTIDEN
.
11
3.1.6.
LIGATION
.
11
3.1.7.
TRANSFORMATION
.
11
3.1.8.
PRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
IM
KLEINEN
MASSSTAB
.
12
3.1.9.
PRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
IM
GROSSEN
MASSSTAB
.
12
3.1.10.
SEQUENZIERUNG
.
13
3.2.
ELEKTROPHORESE
.
13
3.2.1.
AGAROSE-GELE
.
13
3.2.2.
ELUTION
VON
DNA
AUS
AGAROSEGELEN
.
14
3.2.3.
DENATURIERENDE
POLYACRYLAMIDGELE
.
14
3.2.4.
NATIVE
POLYACRYLAMIDGELE
.
15
3.2.5.
AUTORADIOGRAPHIE
.
15
3.3.
ZELLKULTUR
.
15
3.3.1.
VERWENDETE
ZELLINIEN
UND
KULTURBEDINGUNGEN
.
15
3.3.2.
DIFFERENZIERUNG
VON
F9-ZELLEN
.
17
3.3.3.
TRANSFEKTION
DURCH
KALZIUMPHOSPHAT-DNA-KOPRAEZIPITATION
.
17
3.3.4.
TRANSFEKTION
DURCH
ELEKTROPORATION
.
19
3.3.5.
RNA-ISOLIERUNG
AUS
EUKARYOTEN
ZELLEN
.
19
3.3.6.
PRAEPARATION
VON
SLOO-EXTRAKT
.
20
3.4.
IN
VIFRO-TRANSKRIPTION
.
20
3.4.1.
IN
VITRO-TRANSKRIPTION
ZUM
DIREKTEN
NACHWEIS
DER
TRANSKRIPTE
.
20
3.4.2.
IN
WIRO-TRANSKRIPTION
ZUM
INDIREKTEN
NACHWEIS
DER
TRANSKRIPTE
.
21
3.5.
RADIOAKTIVE
NACHWEISMETHODEN
.
21
3.5.1.
5'-ENDMARIDERUNG
VON
DNA
.
21
3.5.2.
3'-ENDMARKIERUNG
VON
DNA
.
22
3.5.3.
3
'
-ENDMARIDERUNG
VON
RNA
.
22
3.5.4.
S1-VERDAUUNGSSCHUTZ-ANALYSE
.
23
3.6.
REINIGUNG
SPEZIFISCHER
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
.
24
3.6.1.
BESTIMMUNG
DER
PROTEINKONZENTRATION
.
24
3.6.2.
BESTIMMUNG
DER
LEITFAEHIGKEIT
.
24
3.6.3.
KONZENTRIERUNG
VON
PROTEINEN
DURCH
AMMANIUMSULFATFAELLUNG
.
24
3.6.4.
KONZENTRIERUNG
VON
PROTEINEN
DURCH
ZENTRIFUGATION
.
24
3.6.5.
"ELECTROPHORETIC
MOBILITY
SBIFT"-ANALYSEN
(EMSA)
.
24
3.6.6.
CHROMATOGRAPHISCHE
METHODEN
.
25
3.6.6.1.
PHOSPHOCELLULOSE
(PI
1)
.
25
3.6.6.2.
Q-SEPHAROSE
FAST
FLOW
.
26
3.6.6.3.
SUPERDEXYY
200
PREP
GRADE
.
26
3.6.6.4.
DNA-AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
MIT
CNBR-AKTIVIERTER
SEPHAROSE
4B
.
27
3.6.6.5.
DNA-AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
MIT
STREPTAVIDIN-AGAROSE
.
28
4.
ERGEBNISSE
.
30
4.1.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
GEWEBESPEZIFISCHEN
EXPRESSION
DES
7SL-GENS
.
30
4.1.1.
ANALYSE
DER
DNA-AUFNAHME
.
30
4.1.2.
STABILITAET
DER
7SL-RNA
.
32
4.1.3.
EINFLUSS
DER
DNA-METHYLIERUNG
AUF
DIE
7SL-RNA-SYNTHESE
.
.
34
4.1.4.
IN
WTRO-TRANSKRIPTION
DES
7SL-GENS
.
35
4.1.5.
EXPRESSION
DES
7SL-GENS
IN
UNTERSCHIEDLICHEN
ZELLINIEN
.
37
4.1.6.
ANALYSE
DER
MENGE
AN
7SL-RNA
UND
DER
SYNTHESERATE
IN
VIVO
.
39
4.2.
REGULATION
DER
EXPRESSION
DES
7SL-GENS
.
43
4.2.1.
BETEILIGUNG
VON
ATF-PROTEINEN
AN
DER
7SL-TRANSKRIPTION
.
43
4.2.1.1.
UNTERSUCHUNGEN
MIT
REKOMBINANTEN
PROTEINEN
DER
ATF-FAMILIE
.
44
4.2.1.2.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
AKTIVITAET
DER
ATF-FREIEN
C
'
-FRAKTION
.
47
4.2.1.3.
EINFLUSS
VON
MECHANISMEN
DER
SIGNALTRANSDUKTION
AUF
DIE
7SL-RNA-SYNTHESE
IN
VIVO.
.49
4.2.1.4.
VERWENDUNG
ETABLIERTER
ZELLSYSTEME
ZUR
ANALYSE
DER
SIGNALTRANSDUKTION
.
53
4.2.I.5.
REGULATION
DER
7SL-RNA-SYNTHESE
DURCH
EIA
IN
VIVO
.
55
4.2.1.6.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
BETEILIGUNG
VON
ATF-PROTEINEN
AN
DER
7SL-TRANSKRIPTION
IN
VITRO
57
42.2.
BETEILIGUNG
VON
TFHIC
AN
DER
7SL-TRANSKRIPTION
.
59
4.2.2.1.
HOMOLOGIEVERGLEICH
DES
GENINTEMEN
7SL-PROMOTORANTEILS
.
59
4.2.2.2.
HITZESTABILITAET
DER
C-FRAKTION
.
60
4.2.2.3.
KOMPETITIONSANALYSEN
IN
VITRO
.
61
4.2.2.4.
IN
VITRO-TRANSKRIPTION
MIT
PARTIELL
GEREINIGTEM
TFIIIC
.
63
4.2.2.5.
WEITERE
REINIGUNG
VON
TFIIIC
.
65
5.
DISKUSSION
.
68
5.1.
GEWEBESPEZIFISCHE
EXPRESSION
DES
7SL-GENS
.
68
5.2.
BETEILIGUNG
VON
TFIIIC
AN
DER
7SL-TRANSKRIPTION
.
70
5.3.
REGULATION
DER
7SL-TRANSKRIPTION
DURCH
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
DER
ATF-FAMILIE
.
71
5.4.
INITIATION
DER
7SL-TRANSKRIPTION
.
75
6.
ZUSAMMENFASSUNG
.
77
7.
LITERATUR
.
78 |
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