Differenzierung der Orthopockenviren mit Hilfe molekularbiologischer Methoden:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1995
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
2.
SCHRIFTTUM
2
2.1.
TAXONOMIE
DER
ORTHOPOCKENVIREN
2
2.2.
BEDEUTUNG
DER
ORTHOPOCKENVIREN
HEUTE
3
2.3.
MORPHOLOGIE
UND
VIRIONAUFBAU
4
2.4.
VIRALE
PROTEINE
5
2.4.1.
DER
CORE-ASSOZIIERTE
REPLIKATIONSAPPARAT
5
2.4.2.
WEITERE
VIRION-ASSOZIIERTE
PROTEINE
5
2.4.3.
EXOGEN
WIRKENDE
PROTEINE
5
2.4.4.
DNS-ABHAENGIGE
RNS-POLYMERASE
(RPO)
UND
A-TYPE
INCLUSION
BODY
(ATIB)-PROTEIN
6
2.5.
GENOMAUFBAU
10
2.6.
TRANSKRIPTION
UND
DNS-REPLIKATION
11
2.7.
MUTATION
UND
REKOMBINATION
12
2.8.
NACHWEIS
UND
DIFFERENZIERUNG
14
2.8.1.
NACHWEIS
DER
GENUSZUGEHOERIGKEIT
14
2.8.2.
DIFFERENZIERUNG
EINZELNER
OPV-SPEZIES
15
2.9.
NUKLEINSAEUREHYBRIDISIERUNG
17
2.9.1.
PRINZIP
17
2.9.2.
MARKIERUNGSMETHODEN
FUER
DNS
UND
DETEKTION
DES
ENTSTANDENEN
HYBRIDS
17
2.9.3.
SCHMELZPUNKT,
STRINGENZ
UND
SPEZIFITAET
20
2.10.
POLYMERASE
KETTENREAKTION
21
2.10.1.
PRINZIP
21
2.10.2.
REAKTIONSPARAMETER
22
2.10.3.
PRIMERAUSWAHL
23
2.10.4.
EINFLUSS
EXOGENER
FAKTOREN
23
2.10.5.
KONTAMINATIONSGEFAHREN
24
2.10.6.
VERIFIZIERUNG
DER
PCR-AMPLIFIKATE
24
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
25
3.1.
VIRUSSTAEMME
UND
ISOLATE
25
3.2.
ISOLIERUNG
VIRALER
DNS
27
3.2.1.
ISOLIERUNG
AUS
ZELLKULTURMATERIAL
27
3.2.2.
ISOLIERUNG
AUS
BIOPSIEMATERIAL
27
3.3.
DNS-RESTRIKTIONSENZYMVERDAU
UND
AGAROSEGEL
ELEKTROPHORESE
28
3.4.
POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
(PAGE)
UND
SILBER
FAERBUNG
29
3.5.
GEWINNUNG
VON
HOCHREINER
DNS
AUS
AGAROSE
30
3.5.1.
GELASE
R
TECHNIK
30
3.5.2.
FREEZE-SQUEEZE
METHODE
31
3.6.
KLONIERUNG
VON
DNS-FRAGMENTEN
31
3.7.
TRANSFORMATION
32
3.8.
PLASMID-DNS
PRAEPARATION
33
3.8.1.
PLASMIDSCHNELLTEST
NACH
BIRNBOIM
UND
DOLY
33
3.8.2.
GEWINNUNG
VON
GROSSEN
MENGEN
AN
PLASMID-DNS
34
3.9.
POLYMERASE
KETTENREAKTION
(PCR)
34
3.9.1.
PRIMERAUSWAHL
UND
SYNTHESE
35
3.9.2.
POLYMERASE
KETTENREAKTION
35
3.9.3.
NESTED
PCR
36
3.10.
MARKIERUNG
VON
DNS
MIT
DIGOXIGENIN
36
3.10.1.
RANDOM
PRIMING
LABELING
36
3.10.2.
OLIGONUKLEOTIDE
LABELING
AM
3'-0H
ENDE
37
3.10.3.
MARKIERUNGS-PCR
38
3.10.4.
RUN-OFF
PCR
39
3.11.
FIXIERUNG
VON
DNS
AUF
TRAEGERMEMBRANEN
39
3.11.1.
SOUTHERN
BLOT
39
3.11.2.
DOT
UND
SLOT-BLOT
40
3.12.
HYBRIDISIERUNG
41
3.13.
DETEKTION
VON
DNS/DNS-HYBRIDEN
42
3.14.
REHYBRIDISIERUNG
UND
WIEDERVERWENDUNG
VON
MEMBRANEN
44
4.
ERGEBNISSE
45
4.1.
AUSWAHL
VERWENDETER
OPV-SEQUENZEN
45
4.2.
UNTERSUCHUNGEN
ZUM
SCHNELLNACHWEIS
VON
OPV-DNS
DURCH
DNS/DNS-HYBRIDISIERUNG
47
4.2.1.
VERWENDUNG
GENUS-SPEZIFISCHER
OLIGONUKLEOTIDE
47
4.2.2.
VERWENDUNG
SPEZIES-SPEZIFISCHER,
ENDMARKIERTER
OLIGONUKLEOTIDE
52
4.3.
NACHWEIS
DES
GENUS
OPV
MIT
HILFE
DER
POLYMERASE
KETTENREAKTION
52
4.4.
VERWENDUNG
DES
RESTRIKTIONSENZYMLAENGENPOLYMORPHISMUS
(RFLP)
ZUR
DIFFERENZIERUNG
VERSCHIEDENER
OPV-SPEZIES
57
4.5.
NACHWEIS
DER
SPEZIES
MAEUSEPOCKENVIRUS
60
4.5.1.'
NACHWEIS
DURCH
DNS/DNS-HYBRIDISIERUNG
60
4.5.2.
NACHWEIS
DURCH
POLYMERASE
KETTENREAKTION
66
4.6.
NACHWEIS
DER
SPEZIES
VACCINIAVIRUS
68
4.6.1.
NACHWEIS
DURCH
DNS/DNS-HYBRIDISIERUNG
68
4.6.2.
NACHWEIS
DURCH
POLYMERASE
KETTENREAKTION
71
4.7.
NACHWEIS
DER
SPEZIES
AFFENPOCKENVIRUS
72
4.7.1.
NACHWEIS
DURCH
DNS/DNS-HYBRIDISIERUNG
72
4.7.2.
NACHWEIS
DURCH
POLYMERASE
KETTENREAKTION
73
4.8.
NACHWEIS
DER
SPEZIES
KAMELPOCKENVIRUS
75
4.9.
NACHWEIS
DER
SPEZIES
KUHPOCKENVIRUS
75
4.9.1.
NACHWEIS
DURCH
DNS/DNS-HYBRIDISIERUNG
75
4.9.2.
NACHWEIS
DURCH
POLYMERASE
KETTENREAKTION
77
4.10.
NACHWEIS
UND
DIFFERENZIERUNGSCHEMA
FUER
FUENF
OPV-SPEZIES
79
5.
DISKUSSION
80
6.
ZUSAMMENFASSUNG
92
7.
SUMMARY
94
8.
LITERATURVERZEICHNIS
95
9.
VERZEICHNIS
DER
VERWENDETEN
ABKUERZUNGEN
112 |
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