Isolierung und Charakterisierung von neuen Inhibitoren für die menschliche Mastzell-Proteinase-Tryptase und für das Gewebe-Kallikrein:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1994
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| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | München, Univ., Fak. für Chemie und Pharmazie, Diss., 1995 |
| Beschreibung: | IV, 87 S. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
1
A
ZUSAMMENFASSUNG
3
B
EINLEITUNG
5
B.L
DIE
MASTZELLE
5
B.2
MENSCHLICHE
TRYPTASE
5
B.3
AUFGABENSTELLUNG
8
C
MATERIALIEN
UND
METHODEN
9
C.L
MATERIALIEN
9
C.1.1
GERAETE
9
C.
1.1.1
GERAETE
FUER
DIE
SAEULENCHROMATOGRAPHIE
9
C
.
1.1.2
GERAETE
FUER
DIE
ENZYMKINETIK
9
C.L.
1.3
GERAETE
FUER
DIE
ELEKTROPHORESE
9
C.L.
1.4
SONSTIGE
GERAETE
9
C.1.2
SUBSTANZEN
UND
MATERIALIEN
10
C.L.
2.1
BLUTEGELEXTRAKT
10
C.
1.2.2
ENZYME
10
C.
1.2.3
SUBSTRATE
10
C.
1.2
4
INHIBITOREN
UND
REAGENZIEN
FUER
DIE
"ACTIVE-SITE"-TITRATION
11
C.
1.2.5
REAGENZIEN
FUER
DIE
PROTEINBESTIMMUNG
11
C.
1.2.6
MATERIALIEN
FUER
DIE
SAEULENCHROMATOGRAPHIE
11
C.
1.2.7
MATERIALIEN
FUER
DIE
ELEKTROPHORESE
12
C.
1.2.8
MATERIALIEN
FUER
BLUTGERINNUNGS-UNTERSUCHUNGEN
12
C.
1.2.9
SONSTIGE
MATERIALIEN
12
C.2
METHODEN
12
C.2.1
ISOLIERUNGSMETHODEN
12
C.2.
1.1
ISOLIERUNG
DES
TRYPSIN/CHYMOTRYPSIN-INHIBITORS
UND
DES
TRYPTASE-INHIBITORS
AUS
DEM
MEDIZINISCHEN
BLUTEGEL
HIRUDO
MEDICINALIS
12
C.2.
1.2
ISOLIERUNG
DES
HISTONS
HL
AUS
MENSCHLICHEN
TONSILLEN
14
C.2.2
BESTIMMUNG
DER
PROTEINKONZENTRATION
14
C.2.3
BESTIMMUNG
DER
HEMMAKTIVITAET
15
C.2.3.1
TRYPTASE-HEMMUNG
15
C.2.3.
2
TRYPSIN/CHYMOTRYPSIN-HEMMUNG
16
C.2.4
METHODEN
FUER
DIE
PROTEINCHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
17
C.2.4.1
SDS-GELELEKTROPHORESE
17
C.2.4.2
ISOELEKTRISCHE
FOKUSSIERUNG
17
C.2.4.3
HPLC
17
C.2.4.4
AMINOSAEURESEQUENZIERUNG
18
C.2.4.5
AMINOSAEUREANALYSE
19
C.2.4.6
MASSENSPEKTROSKOPIE
19
C.2.4.7
ERMITTLUNG
VON
AEHNLICHEN
SEQUENZEN
19
C.2.5
METHODEN
FUER
DIE
ENZYMKINETISCHE
CHARAKTERISIERUNG
19
C.2.5.
1
"ACTIVE-SITE"-TITRATION
VON
PROTEINASEN
UND
INHIBITOREN
19
C.2.5.2
BESTIMMUNG
DER
AKTIVEN
INHIBITORKONZENTRATION
20
C.2.5.
3
BESTIMMUNG
DER
SPEZIFITAET
DER
INHIBITOREN
21
C.2.5.4
BESTIMMUNG
DER
DISSOZIATIONSKONSTANTEN
DER
ENZYM/INHIBITOR-KOMPLEXE
UNTER
GLEICHGEWICHTSBEDINGUNGEN
21
C.2.6
BIOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
25
C.2.6.1
BLUTGERINNUNG
25
C.2.6.2
HEMMUNG
DER
SPALTUNG
BIOLOGISCH
RELEVANTER
SUBSTRATE
25
C.2.6.2.
1
HEMMUNG
DER
TRYPTASE-INDUZIERTEN
SPALTUNG
VON
PEPTIDHORMONEN
25
C.2.6.2.2
HEMMUNG
DER
TRYPTASE-INDUZIERTEN
KININOGEN-SPALTUNG
27
C.2.6.3
HEMMUNG
DER
TRYPTASE-INDUZIERTEN
PROLIFERATION
VON
HUMANEN
KERATINOZYTEN
27
C.2.7
SPALTUNG
DES
HISTONS
HL
DURCH
TRYPTASE
28
D
ERGEBNISSE
29
D.L
ISOLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DES
HISTONS
HL
ALS
TEMPORAEREN
TRYPTASE-INHIBITOR
AUS
MENSCHLICHEN
TONSILLEN
29
D.1.1
VORVERSUCHE
29
D.
1.2
ISOLIERUNG
DES
TEMPORAEREN
TRYPTASE-INHIBITORS
30
D.1.3
IDENTIFIZIERUNG
DES
TEMPORAEREN
TRYPTASE-INHIBITORS
ALS
HISTON
HL
32
D.
1.4
SPALTUNG
DES
ISOLIERTEN
HISTONS
HL
DURCH
TRYPTASE
33
D.
1.5
TITRATION
MIT
MENSCHLICHER
TRYPTASE
34
D.
1.5.1
ISOLIERTES
MENSCHLICHES
HISTON
HL
34
D.L.
5.2
HISTON
HL
AUS
KALBSTHYMUS
35
D.2
ISOLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DES
TRYPTASE-INHIBITORS
AUS
DEM
MEDIZINISCHEN
BLUTEGEL
HIRUDO
MEDICINALIS:
LEECH-DERIVED
TRYPTASE
INHIBITOR
(LDTI)
36
D.2.1
VORVERSUCHE
36
D.2.2
ISOLIERUNG
DES
TRYPTASE-INHIBITORS
36
D.2.3
PROTEINCHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
VOM
LDTI
40
D.2.3.1
REINHEITSKRITERIEN
40
D.2.3.
2
AMINOSAEUREZUSAMMENSETZUNG
42
D.2.3.
3
AMINOSAEURESEQUENZ
43
D.2.
3.4
BESTIMMUNG
DER
MOLEKULAREN
MASSE
MITTELS
MASSENSPEKTROSKOPIE
45
D.2.3.5
SEQUENZVERGLEICH
47
D.2.4
HEMMKINETISCHE
CHARAKTERISIERUNG
VOM
LDTI
48
D.2.4.
1
ERMITTLUNG
DER
PROZENTUALEN
SPEZIFISCHEN
AKTIVITAET
48
D.2.4.2
TITRATION
MIT
ISOLIERTER
MENSCHLICHER
TRYPTASE
49
D.2.4.3
ERMITTLUNG
DER
SPEZIFITAET
50
D.2.5
BIOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
VOM
LDTI
51
D.2.5.
1
EINFLUSS
AUF
DIE
BLUTGERINNUNG
51
D.2.5.
2
HEMMUNG
DER
TRYPTASE-INDUZIERTEN
SPALTUNG
VON
PROTEINEN
51
D.2.
5.2.1
HEMMUNG
DER
SPALTUNG
VON
PEPTIDHORMONEN
52
D.2.5.
2.2
HEMMUNG
DER
SPALTUNG
VON
HOCHMOLEKULAREM
KININOGEN
54
D.2.5.
3
HEMMUNG
DER
TRYPTASE-INDUZIERTEN
PROLIFERATION
VON
HUMANEN
KERATINOZYTEN
55
D.2.6
REKOMBINANTER
TRYPTASE-INHIBITOR
56
D.2.7
CHARAKTERISIERUNG
DES
TRYPTASE-INHIBITORS
"PEAK
HI"
56
D.3
ISOLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DES
HIRUSTASINS
AUS
DEM
MEDIZINISCHEN
BLUTEGEL
HIRUDO
MEDICINALIS
58
D.3.1
ISOLIERUNG
DES
HIRUSTASINS
58
D.3.2
PROTEINCHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DES
HIRUSTASINS
61
D.3.
2.1
REINHEITSKRITERIEN
61
D.3.
2.2
AMINOSAEUREZUSAMMENSETZUNG
63
D.3.
2.3
AMINOSAEURESEQUENZ
64
D.3
.2.4
BESTIMMUNG
DER
MOLEKULAREN
MASSE
MITTELS
MASSENSPEKTROSKOPIE
65
D.3.2.5
SEQUENZVERGLEICH
66
D.3.3
HEMMKINETISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DES
HIRUSTASINS
67
D.3.
3.1
TITRATION
MIT
TRYPSIN
UND
CHYMOTRYPSIN
67
D.3.
3.2
ERMITTLUNG
DER
SPEZIFITAET
UND
BERECHNUNG
DER
HEMMKONSTANTEN
67
D.3.4
BIOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
(BLUTGERINNUNG)
DES
HIRUSTASINS
69
E
DISKUSSION
70
E.L
IDENTIFIZIERUNG
DES
MENSCHLICHEN
HISTONS
HL
ALS
TEMPORAEREN
TRYPTASE-INHIBITOR
70
E.2
ISOLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DES
LDTI
AUS
DEM
MEDIZINISCHEN
BLUTEGEL
HIRUDO
MEDICINALIS
71
E.3
ISOLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DES
HIRUSTASINS
AUS
DEM
76
MEDIZINISCHEN
BLUTEGEL
HIRUDO
MEDICINALIS
F
LITERATURVERZEICHNIS
80 |
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| title_full | Isolierung und Charakterisierung von neuen Inhibitoren für die menschliche Mastzell-Proteinase-Tryptase und für das Gewebe-Kallikrein von Christa Söllner |
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