Regulation der Expression von Cytochrom c1 in Saccharomyces cerevisiae:
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1994
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| adam_text | REGULATION DER EXPRESSION VON CYTOCHROM C F IN SACCHAROMYCES CEREVISIAE
DISSERTATION DER FAKULTAET FUER BIOLOGIE LUDWIG-MAXIMILIANS-UNIVERSITAET
MUENCHEN VORGELEGT VON ULRICH OECHSNER AUS TUTZING DEZEMBER 1994
INHALTSVERZEICHNIS ABKUERZUNGEN I. EINLEITUNG S. 1-12 II. MATERIAL 13-17
FEINCHEMIKALIEN, RADIONUKLEOTIDE, ENZYME, SONSTIGES, ORGANISMEN,
PLASMIDE UND GENBANKEN, MEDIEN, PUFFER IM. METHODEN 18-39 1. ARBEITEN
MIT HEFEN: 18 ANZUCHT, BESTIMMUNG DER ZELLDICHTE, ANFERTIGUNG VON
DAUERKULTUREN, PAARUNG UND SPORULATION, TIERTEMPERATURSPEKTREN,
TRANSFORMATION, GENAUSTAUSCH, SUBFRAKTIONIERUNG VON ZELLEN IN KERNE,
CYTOPLASMA UND MITOCHONDRIEN. ELEKTROPHORETISCHE DARSTELLUNG GANZER
HEFECHRO- MOSOMEN (TAFE), PRAEPARATION VON GENOMISCHER DNA UND RNA,
PROTEINPRAEPARATION, SS-GALAKTOSIDASE-TEST 2. ARBEITEN MIT E. COLR. 26
WACHSTUM, DAUERKULTUREN, HERSTELLUNG VON KOLONIEFILTERN, TRANSFOR-
MATION, PRAEPARATION VON PLASMIDEN UND GESAMT-DNA, PROTEINPRAE- PARATION
3. ARBEITEN MIT DNA: . 27 RESTRIKTION UND MODIFIKATION LINEARER
DNA-MOLEKUELE, LIGATION VON DNA-FRAGMENTEN, KLONIERUNG VON
OLIGONUKLEOTIDEN, ELEKTROPHO- RESEN, SOUTHERN BLOT, SEQUENZIERUNG 4.
ARBEITEN MIT RNA: 30 POLY(A)+-RNA-REINIGUNG, GELELEKTROPHORESE, NORTHERN
BLOT, REVERSE TRANSKRIPTION 5. KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON
NUKLEINSAEUREN 32 6. RADIOAKTIVE MARKIERUNG VON NUKLEINSAEUREN: 32
ENDMARKIERUNG, RANDOM PRIMED LABELING , IN WYRO-TRANSKRIPTION 7.
HYBRIDISIERUNGEN 33 8. ARBEITEN MIT PROTEINEN: 34 PROTEINBESTIMMUNG,
ELEKTROELUTION, GELELEKTROPHORESE, WESTERN BLOT, IMMUNDEKORATION,
SOUTH/WESTERN ANALYSE 9. ELEKTOPHORETIC MOBILITY SHIRT ASSAY (EMSA) 36
10. DNASE I-FOOTPRINT 38 IV. ERGEBNISSE 40-178 1. CHARAKTERISIERUNG
DES CVTJ-GENORTES: 40-47 1.1 CHROMOSOMALE LOKALISATION 40 1.2
UEBERPRUEFUNG DER KOLINEARITAET DER ERWEITERTEN UPSTREAM -REGION 42 1.3
ERWEITERTE GENOMISCHE RESTRIKTIONSKARTE 44 1.4 SEQUENZIERUNG UND ANALYSE
3 -GELEGENER, NICHT-CODIERENDER BEREICHE 45 2. UNTERSUCHUNGEN ZUR
TRANSKRIPTION VON CYT1: 47-63 2.1 DARSTELLUNG VON TRANSKRIPTEN DES
CVN-GENORTES 47 2.2 BESTIMMUNG DER INITIATIONSPUNKTE DER
CVD-TRANSKRIPTION 50 2.3 BESTIMMUNG DER 3 -ENDEN DER CKTF-TRANSKRIPTE:
55 ISOLIERUNG EINES CDNA-KLONS, IDENTIFIZIERUNG VON TREMINATIONS-
SIGNALEN IM 3 -NICHT-CODIERENDEN BEREICH 2.4 REGULATION DER
TRANSKRIPTION 59 3. HERSTELLUNG DER CYFF-MUTANTE WA10 DURCH
GENAUSTAUSCH: 63-70 3.1 IN WFRO-KONSTRUKTIO N DES CYT7-GENAUSTAUSCHES 64
3.2 DURCHFUEHRUNG DES GENAUSTAUSCHES 65 3.3 UEBERPRUEFUNG DES KORREKTEN
GENAUSTAUSCHES: 65 PHAENOTYPISCHE KONTROLLE, SOUTHERN BLOT-ANALYSE 3.4
AUSWAHL EINER CYT JA::UFL 43-GENAUSTAUSCHMUTANTE 68 3.5 UMKREUZUNG DER
MUTANTE A5 69 3.6 SELEKTION UND CHARAKTERISIERUNG DER MUTANTE WA10 69 4.
GROBKARTIERUNG VON PROMOTORREGIONEN DER CYTF-TRANSKRIPTION: 70-83 4.1
KONSTRUKTION VON CVTMRAGENDEN PLASMIDEN MIT VERKUERZUNGEN 70 IM
5 -BEREICH VOR DEM GEN 4.2 EXPRESSIONSANALYSEN VON CYT1 IN WT-HEFEN,
WA10 UND TRANS- 72 FORMANTEN: WACHSTUM, GENERATIONSZEITEN,
TIEFTEMPERATURSPEKTREN, PROTEIN- UND RNA-ANALYSE 5. FEINKARTIERUNG
WICHTIGER REGIONEN DER CVT/-EXPRESSION UEBER 84-104 CYT7//ACZ-FUSION: 5.1
HERSTELLUNG UND FUNKTIONALE UEBERPRUEFUNG EINES PLASMIDCODIERTEN 84
CM//ACZ-HYBRIDGENS 5.2 HERSTELLUNG DES CVTJ//ACZ-FUSIONSGENS MIT
UNTERSCHIEDLICHEN 90 PROMOTORANTEILEN AUF HEFE/E.
CO//- SHUTTLE -PLASMIDEN 5.3 EXPRESSIONSANALYSEN ZUR REGULATION DES
CVTJ-PROMOTORS: 92 KOHLENSTOFFQUELLENABHAENGIGKEIT, CV UND
HAEM-ABHAENGIGKEIT DER CVT7-EXPRESSION 6. SUCHE NACH ERKENNUNGSSTELLEN FUER
DNA-BINDENDE PROTEINE: 105-111 SEQUENZANALYSE DES CYTOCHROM CJ-GENORTES
EINSCHLIESSLICH 5 UND 3 NICHT-CODIERENDER REGIONEN 7.
CVTJ-EXPRESSIONSSTUDIEN IN HEFEMUTANTEN FUER TRANSKRIPTIONS- 111-132
FAKTOREN: 7.1 VERSUCHE ZUR CVTI-EXPRESSION IN DER /?AP2-MUTANTE LGW1:
111 TIEFTEMPERATURSPEKTREN, RNA-ANALYSE, KOHLENSTOFFQUELLEN- REGULATION
DER CVN//ACZ-EXPRESSION 7.2 VERSUCHE ZUR CVTF-EXPRESSION IN DER HAP
7-MUTANTE LGW32: 116 TIEFTEMPERATURSPEKTREN, HAEM/CVABHAENGIGKEIT DER
CYTULACZ- EXPRESSION 7.3 VERSUCHE ZUR CV7 )-EXPRESSION IN DER
CPFT-MUTANTE YSS90: 122 EINFLUSS AUF DAS ZELLWACHSTUM, C-QUELLEN- UND
HAEM/C 2-ABHAENGIGE CVT///ACZ-EXPRESSION, KOPIENZAHL VON PLASMIDEN IN
TRANSFORMIER- TEN HEFEN 8. VERSUCHE ZUR IN WYRO-DNA-BINDUNG VON
PROTEINEN IM UPSTREAM - 133-160 BEREICH DES CYTOCHROM C -GENS: 8.1
UNTERSUCHUNG VON PROTEIN/DNA-WECHSELWIRKUNGEN IN DER BASALEN 133
PROMOTORREGION VON CYT1 8.2 DNA-BINDUNG VON PROTEINEN IN DER UAS-REGION
DES CYT1- 136 PROMOTORS: KOMPETITIONSVERSUCHE, NACHWEIS DER NACH
C-QUELLEN UND HAEM/O2-GEHALT DIFFERENZIERTEN, CPFIP-ABHAENGIGEN
POTEIN/DNA- WECHSELWIRKUNGEN 8.3 ANALYSE DER CPFIP-ABHAENGIGEN
PROTEIN/DNA-KOMPLEXE IM UAS- BEREICH VON CYT1: EINWIRKUNG VON
DETERGENTIEN UND ERHOEHTEN TEMPERATUREN, VERSUCHE MIT KERNEXTRAKTEN AUS
HAP- UND CPF1- MUTANTEN, VERSUCHE MIT GEMISCHTEN KERNEXTRAKTEN,
PROTEIN/DNA- WECHSELWIRKUNGEN NACH PHOSPHATASEBEHANDLUNG 9. VERSUCHE ZUR
IDENTIFIZIERUNG DER AN DEN WECHSELWIRKUNGEN MIT DER UASCYTI BETEILIGTEN
PROTEINE: ISOLIERUNG VON PROTEINEN AUS EMSA-KOMPLEXEN, IDENTIFIZIERUNG
UASCYTI-BINDENDER FAKTOREN UEBER SOUTH/WESTEM-ANALYSE, EMSA-EXPERIMENTE
MIT IN E. COLI EXPRIMIERTEM CPF 1-PROTEIN, EINSATZ VON GEGEN CPF 1
P-GERICHTETEM ANTISERUM IN EMSA- STUDIEN UND WESTERN BLOTS 10. DURCH
PROTEINBINDUNG VOR DNASE I-ANGRIFF GESCHUETZTE UAS- REGIONEN: NACHWEIS
DER PROTEINBINDUNG AN ERKENNUNGSSEQUENZEN DER KERNFAKTOREN CPF 1P, HAPIP
UND HAP2/3/4 V. DISKUSSION VI. ZUSAMMENFASSUNG VII. LITERATUR 147
161-171 172-178 179-193 194-198 199-214 ANHANG: DANKSAGUNG, LEBENSLAUF
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